嵌合抗原和T细胞受体及使用的方法技术

本发明专利技术提供了包含本文公开的细胞外结构域的嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)。本发明专利技术的一些方面涉及多核苷酸，所述多核苷酸编码包含本文公开的细胞外结构域的嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)。本发明专利技术的其他方面涉及包含所述CAR或所述TCR的细胞及其在T细胞疗法中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】嵌合抗原和T细胞受体及使用的方法相关申请的交叉引用本申请要求2016年4月1日提交的美国临时专利申请号62/317,258的权益，该临时专利申请通过引用整体并入本文。序列表本申请包含序列表，该序列表已经以ASCII格式电子提交，并且通过引用整体并入本文。2017年3月30日创建的所述ASCII拷贝命名为K-1031_02_SL.txt，大小为414,963字节。专利技术背景人类癌症就其本质而言是由已经经历了遗传或表观遗传转化而变成异常癌细胞的正常细胞组成。此时，癌细胞开始表达与正常细胞表达的蛋白质和其他抗原不同的蛋白质和其他抗原。这些异常的肿瘤抗原可以被身体的先天免疫系统用于特异性靶向和杀死癌细胞。然而，癌细胞采用各种机制来阻止免疫细胞如T和B淋巴细胞成功靶向癌细胞。目前的疗法T细胞疗法依赖于经富集或经修饰的人T细胞来靶向并杀死患者中的癌细胞。为了增加T细胞靶向和杀死特定癌细胞的能力，已经开发了方法来工程化改造T细胞以表达将T细胞导向特定靶癌细胞的构建体。嵌合抗原受体(CAR)和工程化T细胞受体(TCR)，其包含能够与特定肿瘤抗原相互作用的结合结构域，允许T细胞靶向并杀死表达特定肿瘤抗原的癌细胞。存在对用于靶向和杀死癌细胞的改进的CAR和TCR的需求。专利技术概述本专利技术通过提供包含表达特异性靶向并杀死癌细胞的抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)的经基因工程化改造的免疫细胞的组合物和方法解决了该需求。CAR可以包含例如，(i)抗原特异性组分(“抗原结合分子”)，(ii)一个或多个共刺激结构域(其包括铰链结构域)，和(iii)一个或多个活化结构域。每个结构域可以是异种的，也就是说，由衍生自不同蛋白质链的序列组成。表达CAR的免疫细胞(例如T细胞)可以用于各种疗法，包括癌症疗法。如下文(包括实施例部分)更详细描述的，与包含包括完整铰链结构域(“CHD”)的共刺激结构域的CAR相比，包含包括截短铰链结构域(“THD”)的共刺激结构域的CAR提供了出乎意料的优越性质。可以将编码此类CAR的多核苷酸转导到T细胞中，而CAR在T细胞例如患者自身的T细胞中得到表达。当将经转导的T细胞移植回患者时，CAR指导T细胞识别并结合存在于癌细胞表面上的表位，从而允许癌细胞而不是非癌细胞的结合。该结合导致T细胞中细胞溶解机制的活化，其特异性杀死结合的癌细胞。在本专利技术之前，包含THD的CAR优于包含CHD的CAR不为人所知。因此，本专利技术满足了对用于治疗癌症的新型和改进疗法存在的未满足的需求。本专利技术的一方面是编码嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)的分离的多核苷酸，其包含(i)抗原结合分子，(ii)共刺激结构域，和(iii)活化结构域。所述共刺激结构域可以包含细胞外结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，其中所述细胞外结构域包含截短铰链结构域，所述截短铰链结构域基本上由以下各项组成或由以下各项组成：(i)与SEQIDNO：1的氨基酸123至152至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列，和任选地(ii)一至六个氨基酸。在一些实施方案中，所述一至六个氨基酸为异源的氨基酸。在一些实施方案中，所述截短铰链结构域基本上由以下组成或由以下组成：与SEQIDNO：1的氨基酸123至152至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述氨基酸序列由以下核苷酸序列编码：与SEQIDNO：2至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述跨膜结构域为以下各项的跨膜结构域：4-1BB/CD137、T细胞受体的alpha链、T细胞受体的beta链、CD3epsilon、CD4、CD5、CD8alpha、CD9、CD16、CD19、CD22、CD33、CD37、CD45、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154或T细胞受体的zeta链，或它们的任何组合。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包含与SEQIDNO：5至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述跨膜结构域由以下核苷酸序列编码：与SEQIDNO：4至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述细胞内结构域包含以下各项的信号传导区：4-1BB/CD137、活化性NK细胞受体、B7-H3、BAFFR、BLAME(SLAMF8)、BTLA、CD100(SEMA4D)、CD103、CD160(BY55)、CD18、CD19、CD19a、CD2、CD247、CD27、CD276(B7-H3)、CD29、CD3delta、CD3epsilon、CD3gamma、CD30、CD4、CD40、CD49a、CD49D、CD49f、CD69、CD7、CD84、CD8alpha、CD8beta、CD96(Tactile)、CD11a、CD11b、CD11c、CD11d、CDS、CEACAM1、CRTAM、细胞因子受体、DAP-10、DNAM1(CD226)、Fcgamma受体、GADS、GITR、HVEM(LIGHTR)、IA4、ICAM-1、ICAM-1、Igalpha(CD79a)、IL2Rbeta、IL2Rgamma、IL7Ralpha、免疫球蛋白样蛋白质、诱导性T细胞共刺激分子(ICOS)、整合素、ITGA4、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB2、ITGB7、ITGBl、KIRDS2、LAT、LFA-1、LFA-1、与CD83特异性结合的配体、LIGHT、LIGHT(肿瘤坏死因子超家族成员14；TNFSF14)、LTBR、Ly9(CD229)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1(CD1la/CD18)、MHCI类分子、NKG2C、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80(KLRF1)、OX-40、PAG/Cbp、程序性死亡-1(PD-1)、PSGL1、SELPLG(CD162)、信号传导淋巴细胞活化分子(SLAM蛋白)、SLAM(SLAMF1；CD150；IPO-3)、SLAMF4(CD244；2B4)、SLAMF6(NTB-A；Lyl08)、SLAMF7、SLP-76、TNF受体蛋白、TNFR2、Toll配体受体、TRANCE/RANKL、VLA1或VLA-6，或它们的组合。在一些实施方案中，所述细胞内结构域包含4-1BB/CD137信号传导区。在一些实施方案中，所述细胞内结构域包含与SEQIDNO：7至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸编码嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)，其包含(i)抗原结合分子，(ii)共刺激结构域，和(iii)活化结构域，其中所述共刺激结构域包含细胞外结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，其中所述细胞外结构域包含截短铰链结构域，所述截短铰链结构域基本上由以下各项组成或由以下各项组成：(i)与SEQ ID NO:1的氨基酸123至152至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列，和任选地(ii)一至六个氨基酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.01 US 62/317,2581.分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸编码嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)，其包含(i)抗原结合分子，(ii)共刺激结构域，和(iii)活化结构域，其中所述共刺激结构域包含细胞外结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，其中所述细胞外结构域包含截短铰链结构域，所述截短铰链结构域基本上由以下各项组成或由以下各项组成：(i)与SEQIDNO:1的氨基酸123至152至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列，和任选地(ii)一至六个氨基酸。2.权利要求1的多核苷酸，其中所述一至六个氨基酸为异源的氨基酸。3.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述截短铰链结构域基本上由以下组成或由以下组成：与SEQIDNO:1的氨基酸123至152至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。4.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述氨基酸序列由以下核苷酸序列编码：与SEQIDNO:2至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。5.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述跨膜结构域为以下各项的跨膜结构域：4-1BB/CD137、T细胞受体的alpha链、T细胞受体的beta链、CD3epsilon、CD4、CD5、CD8alpha、CD9、CD16、CD19、CD22、CD33、CD37、CD45、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154或T细胞受体的zeta链，或它们的任何组合。6.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述跨膜结构域包含与SEQIDNO:5至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。7.权利要求6的多核苷酸，其中所述跨膜结构域由以下核苷酸序列编码：与SEQIDNO:4至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。8.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述细胞内结构域包含以下各项的信号传导区：4-1BB/CD137、活化性NK细胞受体、B7-H3、BAFFR、BLAME(SLAMF8)、BTLA、CD100(SEMA4D)、CD103、CD160(BY55)、CD18、CD19、CD19a、CD2、CD247、CD27、CD276(B7-H3)、CD29、CD3delta、CD3epsilon、CD3gamma、CD30、CD4、CD40、CD49a、CD49D、CD49f、CD69、CD7、CD84、CD8alpha、CD8beta、CD96(Tactile)、CDlla、CDllb、CDllc、CDlld、CDS、CEACAM1、CRTAM、细胞因子受体、DAP-10、DNAM1(CD226)、Fcgamma受体、GADS、GITR、HVEM(LIGHTR)、IA4、ICAM-1、ICAM-1、Igalpha(CD79a)、IL2Rbeta、IL2Rgamma、IL7Ralpha、免疫球蛋白样蛋白质、诱导性T细胞共刺激分子(ICOS)、整合素、ITGA4、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB2、ITGB7、ITGBl、KIRDS2、LAT、LFA-1、LFA-1、与CD83特异性结合的配体、LIGHT、LIGHT(肿瘤坏死因子超家族成员14；TNFSF14)、LTBR、Ly9(CD229)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1(CDlla/CD18)、MHCI类分子、NKG2C、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80(KLRF1)、OX-40、PAG/Cbp、程序性死亡-1(PD-1)、PSGL1、SELPLG(CD162)、信号传导淋巴细胞活化分子(SLAM蛋白)、SLAM(SLAMF1；CD150；IPO-3)、SLAMF4(CD244；2B4)、SLAMF6(NTB-A；Lyl08)、SLAMF7、SLP-76、TNF受体蛋白、TNFR2、Toll配体受体、TRANCE/RANKL、VLA1或VLA-6，或它们的组合。9.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述细胞内结构域包含4-1BB/CD137信号传导区。10.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述细胞内结构域包含与SEQIDNO:7至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。11.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述细胞内结构域包含由以下核苷酸序列编码的氨基酸序列：与SEQIDNO:6至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。12.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述抗原结合分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH包含3个互补决定区(CDR)并且所述VL包含3个CDR。13.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述抗原结合分子特异性结合选自由以下各项组成的组的抗原：5T4、甲...

【专利技术属性】
技术研发人员：J维尔特齐乌斯，
申请(专利权)人：凯德药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US