叶酸受体结合配体-药物偶联物制造技术

本发明专利技术提供了一种叶酸受体结合配体‑药物偶联物，该偶联物由维生素受体结合部分(F)n、接头(L)和药物或其类似物或衍生物(D)组成，其中n为2～4的整数。维生素受体结合部分优选叶酸或蝶酸，接头(L)包含多价接头L1和至少含有一个可释放接头的L2，(F)n共价连接到多价接头L1上，药物或其类似物或衍生物(D)与L2的可释放接头共价连接，L1与L2共价连接。本发明专利技术提供的偶联物对叶酸受体阳性的肿瘤细胞亲和力极大的提高，并且具有显著的抗肿瘤活性，而副作用明显降低。

Folate receptor binding ligand-drug conjugates

The invention provides a folic acid receptor binding ligand drug conjugate, which consists of vitamin receptor binding part (F) n, junction (L) and drug or its analogues or derivatives (D), where n is an integer of 2 to 4. The vitamin receptor binding part is preferred folic acid or butterfly acid. The junction (L) contains a multivalent junction L1 and a L2 containing at least one releasable junction, (F) n covalently connected to the multivalent junction L1, drug or its analogues or derivatives (D) covalently connected to the releasable junction of L2, and L1 covalently connected to L2. The conjugate provided by the invention has great affinity to folic acid receptor positive tumor cells, significant anti-tumor activity and obvious decrease of side effects.

【技术实现步骤摘要】
叶酸受体结合配体-药物偶联物本申请是申请人为博瑞生物医药(苏州)股份有限公司，申请号为201410024349.9，申请日为2014.01.20，专利技术名称为“叶酸受体结合配体-药物偶联物”的分案申请。
本专利技术涉及用于靶向递药的药物化合物及其制备方法。具体涉及叶酸受体结合配体-药物偶联物，更具体的，本专利技术涉及两个或两个以上叶酸受体结合配体(F)通过接头(L)与药物或其类似物或衍生物(D)偶联，形成(F)nLD偶联物，本专利技术也涉及，所述偶联物用于治疗由病原性细胞群体引起的疾病状况，以及涉及这样的偶联物的制备方法和其药物组合物。专利技术背景尽管癌症的治疗方法和抗癌药物的研究已经取得了很大进展，但癌症仍是严重威胁人类健康的主要疾病之一，在美国，癌症是继心脏病之后第二大导致死亡的原因。现在治疗癌症的代表性方法包括外科疗法、放射线疗法、化学疗法、免疫疗法及以上治疗方法联合应用对抗癌症。最经常地，利用高强效药，例如丝裂霉素、紫杉醇和喜树碱，通过化疗法治疗癌症。其中化疗药物的主要缺点在于抑制肿瘤细胞生长的同时，也严重抑制了正常细胞的增殖，这些不可避免的副作用使得新的特异性抗癌药物的开发显得尤为重要。目前已经进行许多努力通过将抗癌药物结合到配位体如激素、抗体、或维生素来发展肿瘤选择性药物。例如，将低分子量维生素化合物(如叶酸)用作肿瘤靶向剂。叶酸(FA)也称维生素B9，是所有活细胞维持一碳途径正常代谢和核苷酸生物合成所需的必须营养物。叶酸受体(FR)是一种跨膜单链糖蛋白，含有3种亚型：α-FR、β-FR、γ-FR。叶酸(FA)对叶酸受体(FR)的细胞表面定向的糖蛋白表现出极高的亲和力(KD～100pM)，该糖蛋白是从细胞外环境中捕捉其配体(叶酸)的糖基磷脂酰肌醇连接的蛋白。叶酸受体(FR)是与叶酸(FA)结合的肿瘤相关膜蛋白且能够在细胞内通过胞吞机制转运与叶酸结合的分子。结合之后，包围FR-配体复合物的质膜将立即内陷以形成内部囊泡，称作内体。囊泡腔的pH通过共定位内体膜中的质子泵的作用稍微变低，且这种酸化作用可能介导着FR蛋白中的构象改变以释放其所结合的配体从而允许进入胞质。研究表明在90％的卵巢癌、晚期乳腺癌、宫颈癌、子宫内膜癌、结肠癌、肺癌、脉络膜癌、室管膜细胞瘤中出现高表达的α-FR；在恶性增殖的白细胞(白血病)表面及类风湿关节炎等自身免疫性疾病患者体内激活的巨噬细胞表面有高表达的β-FR，而叶酸受体在正常组织中几乎不表达。因此叶酸和叶酸受体在靶向治疗技术中具有很好的研究前景，尤其是在肿瘤和自身免疫性疾病的治疗方面，FR作为抗肿瘤药物的靶点受到极大的关注，成为新型抗肿瘤药物研究的热点之一(Hilgenbrink,A.andP.Low(2005).Folatereceptormediateddrugtargeting:Fromtherapeuticstodiagnostics.JournalofPharmaceuticalSciences94(10):2135-2146.)。国际上已经在尝试利用叶酸-放射性核显像剂偶联物，如叶酸与125I、67Ga、111In的偶联物能非侵入性的探测人体高表达叶酸受体的肿瘤组织。同时，目前国际上已广泛就叶酸-蛋白毒素、叶酸-小分子化疗药物、叶酸-脂质体(脂质体内包化疗药物或基因药物)及叶酸-免疫治疗剂等展开了深入研究(参考文献：Hilgenbrink,A.andP.Low(2005).Folatereceptormediateddrugtargeting:Fromtherapeuticstodiagnostics.JournalofPharmaceuticalSciences94(10):2135-2146。WO2012065085、WO2012065079、US2012022245A1)。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种对致病细胞具有特异性并对正常细胞毒性小的叶酸受体结合配体-药物偶联物，其制备方法以及其在制备治疗肿瘤药物中的应用。在本专利技术的一个说明性实施方式中，描述了具有以下化学式的化合物：(F)nLD的叶酸受体结合配体-药物偶联物，其中n为2、3或4；F是叶酸受体结合配体，选自叶酸或蝶酸；(F)n中每个F独立的选自叶酸和蝶酸；D是药物或其类似物或衍生物；L是包含以下结构的接头：L1-L2其中，L1是多价接头，L2包含至少一个可释放接头，L1与L2共价连接；应当理解的是，本专利技术中所述(F)n是指每个F分别与多价接头L1共价连接，D与L2共价连接。在另一实施方式中，描述了具有以下结构的叶酸受体结合配体-药物偶联物：其中F1、F2独立的选自叶酸和蝶酸；D是药物或其类似物或衍生物；L是包含以下结构的接头：L1-L2其中，L1是多价接头，L2包含至少一个可释放接头，L1与L2共价连接；所述的F1、F2分别与多价接头L1共价连接，D与L2共价连接。所述的多价接头(L1)可含有相互共价连接的多个接头，包括一种或多种间隔接头、可释放接头、杂原子接头及其以任何次序排列的组合。在一可变化方式中，可释放接头和任选的间隔接头互相共价结合为形成接头L1；在另一个可变化方式中，配体F通过一个或多个间隔接头共价连接到多价接头L1；在另一个可变化方式中2个或2个以上配体F直接相互附着或通过多个间隔接头和/或可释放接头共价附着；在另一可变化方式中，两个或更多个可释放接头相互共价连接，并且其中一个或多个可释放接头通过杂原子接头和/或间隔接头相互隔开。应当理解的是，一种或多种可释放接头和任选的间隔接头的排列的可变性很大。所述的杂原子接头中的杂原子为氮、氧、硫、磷、硅等。进一步的，所述杂原子接头(氧除外)可为不同氧化态，如N(OH)、S(O)、S(O)2、P(O)、P(O)2、P(O)3等。在另一可变化方式中，所述杂原子接头为羟胺、肼、腙、磺酸酯、亚瞵酸酯、瞵酸酯等。在一个实施方案中，多价接头L1包含至少一个由氨基酸形成的肽间隔接头，所述的氨基酸独立的选自天然氨基酸和非天然α-氨基酸。在另一个实施方案中，所述多价接头L1包括含有1～40个氨基酸形成的肽间隔接头，所述氨基酸优选天然氨基酸，进一步的，所述多价接头L1包括含有1～20个氨基酸形成的肽间隔接头；更进一步的，所述L1优选包括含有10～15个氨基酸形成的肽间隔接头。更进一步的，L1包括至少2个选自下组的氨基酸：天冬氨酸、精氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、天冬酰胺、精氨酸、苏氨酸、谷氨酸、丝氨酸、瓜氨酸、缬氨酸和谷氨酰胺。更进一步的，所述L1优选包括一个或多个由选自天冬氨酸、精氨酸、半胱氨酸、瓜氨酸、缬氨酸和赖氨酸及其组合的氨基酸形成的二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、十肽、十一肽及十二肽的间隔接头。在一个示例性的实施方式中，由氨基酸形成的肽间隔接头与杂原子接头组合在一起形成如下式的多价接头L1：其中，*表示开放价。所述的多价接头L1任选的包括选自如下的间隔接头：聚醚、糖、硫代羰基、亚烷基、1-亚烷基琥珀酰亚胺-3-基、1-(羰基烷基)琥珀酰亚胺-3-基、羰基烷基羰基、1-(羰基四氢-2H-吡喃基)琥珀酰亚胺-3-基和1-(羰基四氢呋喃基)琥珀酰亚胺-3-基，其中所述每个间隔接头任选被一个或多个取代基取代；其中所述的取代基独立的选自是烷基、烷氧基、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有以下通式的化合物：(F)nL1‑L2D其中，n为2、3或4；F是叶酸或蝶酸；(F)n中每个F独立的选自叶酸和蝶酸；D是药物部分，所述的药物为环丙基苯并吲哚酮类及其衍生物、吡咯并苯并二氮杂卓二聚体类、7‑乙基‑10‑羟基喜树碱、多拉司他汀、膜海鞘素B、美登素及其衍生物、紫杉醇类、柔红霉素、多柔比星、表柔比星、埃斯波霉素、放线菌素、欧瑞抑制素类、管溶解素类、偶氮丝氨酸类、博来霉素、长春碱类、他莫昔芬或伊达比星；L1是多价接头，包含至少一个由10～15个氨基酸形成的肽间隔接头；L2包含至少一个可释放接头，L1与L2共价连接；所述(F)n是指每个F分别与L1的多价接头共价连接，D与L2共价连接。

【技术特征摘要】
1.一种具有以下通式的化合物：(F)nL1-L2D其中，n为2、3或4；F是叶酸或蝶酸；(F)n中每个F独立的选自叶酸和蝶酸；D是药物部分，所述的药物为环丙基苯并吲哚酮类及其衍生物、吡咯并苯并二氮杂卓二聚体类、7-乙基-10-羟基喜树碱、多拉司他汀、膜海鞘素B、美登素及其衍生物、紫杉醇类、柔红霉素、多柔比星、表柔比星、埃斯波霉素、放线菌素、欧瑞抑制素类、管溶解素类、偶氮丝氨酸类、博来霉素、长春碱类、他莫昔芬或伊达比星；L1是多价接头，包含至少一个由10～15个氨基酸形成的肽间隔接头；L2包含至少一个可释放接头，L1与L2共价连接；所述(F)n是指每个F分别与L1的多价接头共价连接，D与L2共价连接。2.如权利要求1所述化合物，其特征在于，所述L1包括一个或多个由选自天冬氨酸、精氨酸、半胱氨酸、瓜氨酸、缬氨酸和赖氨酸及其组合的氨基酸形成的二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、十肽、十一肽及十二肽的间隔接头。3.如权利要求1所述化合物，其特征在于，所述L1包括下式的结构：其中，*表示开放价。4.如权利要求3所述化合物，其特征在于，所述可释放接头包括二硫化物、碳酸酯、酰肼、酰胺、腙、氨基酸酯、脲或其组合。5.如权利要求3所述化合物，其特征在于，所述可释放接头包括一个或多个具有如下的结构：其中，n...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁建栋，宋云松，黄仰青，
申请(专利权)人：博瑞生物医药苏州股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32