一种负载漆酚的pH响应性两亲共聚物胶束的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种负载漆酚的pH响应性两亲共聚物胶束的制备方法。首先将一定量mPEG、疏水胺单体、5‑氨基‑1‑戊醇和1，4‑丁二醇二丙烯酸酯溶于DMSO配成一定浓度的反应液，聚合反应20～48h，然后加入一定量1，3‑戊二胺，继续反应24h，合成得到聚乙二醇‑聚β‑氨基酯两亲共聚物(mPEG‑PBAE)。然后取一定量mPEG‑PBAE和漆酚溶于DMF中，超声混合均匀后，经过透析、离心、过滤后，即得到负载漆酚的pH响应性两亲共聚物胶束。该载药胶束平均粒径为140～160nm，稳定性好，具有明显的pH响应性释药特性，生物相容性好，具有很好的靶向抗肿瘤活性，可应用于临床靶向抗肿瘤药物中，附加值极高，可以成为临床上开发漆酚靶向抗肿瘤药物的一种新技术。

Preparation of pH-responsive amphiphilic copolymer micelles loaded with urushiol

The invention relates to a preparation method of pH responsive amphiphilic copolymer micelles loaded with urushiol. Firstly, a certain amount of mPEG, hydrophobic amine monomers, 5 amino 1 pentanol and 1,4 butanediol diacrylate were dissolved in DMSO to form a certain concentration of reaction solution, and then a certain amount of 1,3 pentanediamine was added to the reaction for 20-48 hours, and then polyethylene glycol poly beta amino ester amphiphilic copolymer (mPEG PBAE) was synthesized. Then a certain amount of mPEG PBAE and urushiol were dissolved in DMF. After ultrasonic mixing was uniform, after dialysis, centrifugation and filtration, the pH-responsive amphiphilic copolymer micelles loaded urushiol were obtained. The drug-loaded micelles with average particle size of 140-160 nm have good stability, obvious pH-responsive drug release characteristics, good biocompatibility and good targeting anti-tumor activity. They can be used in clinical targeting anti-cancer drugs with high added value and become a new technology for clinical development of targeting anti-cancer drugs of urushiol.

【技术实现步骤摘要】
一种负载漆酚的pH响应性两亲共聚物胶束的制备方法
本专利技术属于生物医药
，涉及一种负载漆酚药物的pH响应性两亲嵌段共聚物聚乙二醇-聚β-氨基酯(mPEG-PBAE)胶束的制备方法。
技术介绍
漆酚是漆树(Toxicodendronverniciflum(Stokes)F.A.Barkl.)分泌物生漆中的一种天然活性成分，是我国重要的林特产品，世界上85％的生漆产自中国。漆酚是一种邻苯二酚结构的烷基酚类化合物，其侧链为不同饱和度的C15的烷烃。漆酚具有很好的抗肿瘤生物活性，其对人体9种器官29种肿瘤细胞均有抑制作用，作用机理包括诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤血管生成、核转录因子抑制、毒杀肿瘤细胞等。干漆作为中药辅助治疗肿瘤在我国已有数千年的历史。因此漆酚非常有希望开发成抗癌药物，然而，漆酚的水溶性非常差，生物相容性和对肿瘤组织的选择性也很差，严重降低其抗肿瘤疗效，限制了漆酚的抗肿瘤药物开发及临床应用。近年来针对传统肿瘤药物存在的水溶性差、非特异性分布、毒副作用大、生物利用度低以及肿瘤细胞的多重耐药性等问题，纳米靶向药物传递系统的发展为解决这些问题提供了新的途径，其中，两亲聚合物胶束具有载药范围广、结构稳定性好、体内滞留时间长、生物相容性及组织渗透性均良好等优点而成为靶向给药体系中备受青睐的一类。聚合物胶束是由亲水性和疏水性的单体组成的嵌段共聚物，两亲性嵌段共聚物可在水性介质中自组装形成稳定的壳-核结构的纳米递送系统，其疏水性内核可作为水难溶性药物的贮库，亲水性外壳赋予胶束良好的水溶性和空间稳定性。聚合物胶束作为靶向药物传递系统虽然具有很多优势，但也存在无法将药物定向输送到肿瘤细胞内并完成快速药物释放，不能控制药物的释放量为靶向位点提供有效的药物浓度等问题。刺激响应性胶束可根据内部刺激(如pH、氧化还原电位、溶酶体酶)或外部刺激(如温度、磁场、光)快速响应，从而达到在靶位或在合适时间释放药物的目的，提高治疗疗效。其中具有pH响应性胶束是近年来研究热点之一。与正常组织pH7.4相比，肿瘤组织内部呈弱酸性环境，其pH介于6.8～7.2内，此外，肿瘤细胞内的酸性细胞器(内涵体与溶酶体)具有更低的pH，其pH介于4.5～6.5内。基于这种pH差异，pH响应性胶束可控制药物在肿瘤间质或酸性细胞器内释放，从而有效提高药物对肿瘤组织或细胞的靶向性。研究表明将天然活性药物负载在纳米聚合物胶束载体上，不仅可明显提高药物的稳定性，而且可提高药物在体内的生物利用度及靶向释药性能等。但是目前国内外还没有将漆酚负载在共聚物胶束载体应用的相关研究报道，另外关于负载漆酚的pH响应性两亲嵌段共聚物胶束的制备与应用国内外也未见报道。针对以上不足，本专利技术提出合成具有pH响应性的两亲性嵌段共聚物聚乙二醇-聚β-氨基酯(mPEG-PBAE)作为载体材料，制备负载漆酚药物的PH响应性两亲共聚物胶束。该技术首先采用一锅法合成无规共聚物聚乙二醇-聚β-氨基酯(mPEG-PBAE)，用于抗肿瘤活性物漆酚的包载和输送，然后采用透析法制备了负载漆酚药物的pH响应性两亲共聚物胶束。制得的载药胶束外观圆整，具有规则的球形结构，大小均一，分散性良好，平均粒径为140～160nm，Zeta电位值为32～35mV，具有很好的稳定性；其对漆酚药物的包封率EE％为85～90％，载药量DLC％为23～28％；该载药胶束具有明显的pH响应性释药特性，72h内在pH＝5.0的酸性环境中，累计释放率为98％以上；对人体生物相容性好，具有很好的靶向抗肿瘤活性，可应用于临床靶向抗肿瘤药物中，附加值极高，可以成为临床上开发漆酚靶向抗肿瘤药物的一种新技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种制备负载漆酚的pH响应性两亲嵌段共聚物胶束的方法，该方法制备得到的负载漆酚的共聚物胶束，平均粒径为140～160nm，且大小均一，分散均匀，稳定性好，生物相容性好，不仅具有很好的pH响应性和释药性，且具有很好的靶向抗肿瘤活性，可应用于临床靶向抗肿瘤药物中，附加值极高。本专利技术是通过以下技术方案实现的。1.一种负载漆酚的pH响应性两亲共聚物胶束的制备方法，具体步骤如下：(1)两亲共聚物聚乙二醇-聚β-氨基酯(mPEG-PBAE)的合成分别取一定量的末端带氨基的甲氧基聚乙二醇、疏水胺单体、5-氨基-1-戊醇和1，4-丁二醇二丙烯酸酯溶于二甲基亚砜配成浓度为0.2mg/mL的反应液，置于聚合管中在60℃搅拌反应20～48h，然后加入一定量1，3-戊二胺，继续反应24h，反应结束后产物用二氯甲烷15～30mL稀释，去离子水洗涤三次，分离有机相，无水硫酸镁干燥过夜，有机相过滤，滤液旋转蒸发除去溶剂，40℃真空干燥20～48小时，即得到目标两亲嵌段共聚物。(2)负载漆酚的pH响应性两亲共聚物胶束制备准确称量聚乙二醇-聚β-氨基酯两亲共聚物和漆酚各40～100mg，将它们溶于4～10mLN，N’-二甲基甲酰胺中，超声混合均匀后倒入分子量为3000的透析袋内，用1.0～2.0L的去离子水透析20～30h，每1～2h换一次水；透析结束后将透析袋中胶束溶液在1000rpm下离心分离10～20min，上清液用孔径为0.45μm的水膜过滤，除去未包封的漆酚；最后将滤液在-40℃～-45℃冷冻干燥24h～36h，即可得到负载漆酚的pH响应性两亲共聚物胶束。所述的末端带氨基的甲氧基聚乙二醇，其数均分子量Mn为2000或5000。所述的末端带氨基的甲氧基聚乙二醇、疏水胺单体、5-氨基-1-戊醇、1，4-丁二醇二丙烯酸酯和1，3-戊二胺的摩尔比为0.08∶0.7∶0.3∶1.2∶1.4。所述的疏水胺单体为十二胺或十四胺。本专利技术采用一锅法合成了无规共聚物聚乙二醇-聚β-氨基酯(mPEG-PBAE)；分别取一定量的末端带氨基的甲氧基聚乙二醇(mPEG-NH2)、疏水胺单体、5-氨基-1-戊醇和1，4-丁二醇二丙烯酸酯溶于二甲基亚砜配成浓度为0.2mg/mL的反应液，置于聚合管中在60℃搅拌反应20～48h，然后加入一定量1，3-戊二胺，继续反应24h，反应结束后产物用二氯甲烷15～30mL稀释，去离子水洗涤三次，分离有机相，无水硫酸镁干燥过夜，有机相过滤，滤液旋转蒸发除去溶剂，40℃真空干燥20～48小时，即得到目标两亲共聚物(mPEG-PBAE)。所述的末端带氨基的甲氧基聚乙二醇，其数均分子量Mn为2000或5000；所述的末端带氨基的甲氧基聚乙二醇、疏水胺单体、5-氨基-1-戊醇、1，4-丁二醇二丙烯酸酯和1，3-戊二胺的摩尔比为0.08∶0.7∶0.3∶1.2∶1.4；所述的疏水胺单体为十二胺或十四胺。本专利技术通过选用不同分子量的mPEG-NH2(Mn＝2000或5000)和不同疏水碳链长度的胺单体(十二胺或十四胺)，分别合成了四种不同分子量的聚乙二醇-聚β-氨基酯共聚物，分别命名为mPEG2000-PBAE-C12、mPEG2000-PBAE-C14、mPEG5000-PBAE-C12和mPEG5000-PBAE-C14；采用凝胶色谱仪(GPC)测定了四种聚合物的分子量和分子量分布，结果表明四种共聚物分子量分别为7115，8245，10315，11445，分子量相对较为均一，与设计的理论分子量相差不本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种负载漆酚的pH响应性两亲共聚物胶束的制备方法，其特征在于，其步骤如下：(1)嵌段共聚物聚乙二醇‑聚β‑氨基酯(mPEG‑PBAE)的合成分别取一定量的末端带氨基的甲氧基聚乙二醇、疏水胺单体、5‑氨基‑1‑戊醇和1，4‑丁二醇二丙烯酸酯溶于二甲基亚砜配成浓度为0.2mg/mL的反应液，置于聚合管中在60℃搅拌反应20～48h，然后加入一定量1，3‑戊二胺，继续反应24h，反应结束后产物用二氯甲烷15～30mL稀释，去离子水洗涤三次，分离有机相，无水硫酸镁干燥过夜，有机相过滤，滤液旋转蒸发除去溶剂，40℃真空干燥20～48小时，即得到目标两亲嵌段共聚物。(2)负载漆酚的pH响应性两亲共聚物胶束制备准确称量聚乙二醇‑聚β‑氨基酯两亲共聚物和漆酚各40～100mg，将它们溶于4～10mLN，N’‑二甲基甲酰胺中，超声混合均匀后倒入分子量为3000的透析袋内，用1.0～2.0L的去离子水透析20～30h，每1～2h换一次水；透析结束后将透析袋中胶束溶液在1000rpm下离心分离10～20min，上清液用孔径为0.45μm的水膜过滤，除去未包封的漆酚；最后将滤液在‑40℃～‑45℃冷冻干燥24h～36h，即可得到负载漆酚的pH响应性两亲共聚物胶束。...

【技术特征摘要】
1.一种负载漆酚的pH响应性两亲共聚物胶束的制备方法，其特征在于，其步骤如下：(1)嵌段共聚物聚乙二醇-聚β-氨基酯(mPEG-PBAE)的合成分别取一定量的末端带氨基的甲氧基聚乙二醇、疏水胺单体、5-氨基-1-戊醇和1，4-丁二醇二丙烯酸酯溶于二甲基亚砜配成浓度为0.2mg/mL的反应液，置于聚合管中在60℃搅拌反应20～48h，然后加入一定量1，3-戊二胺，继续反应24h，反应结束后产物用二氯甲烷15～30mL稀释，去离子水洗涤三次，分离有机相，无水硫酸镁干燥过夜，有机相过滤，滤液旋转蒸发除去溶剂，40℃真空干燥20～48小时，即得到目标两亲嵌段共聚物。(2)负载漆酚的pH响应性两亲共聚物胶束制备准确称量聚乙二醇-聚β-氨基酯两亲共聚物和漆酚各40～100mg，将它们溶于4～10mLN，N’-二甲基甲酰胺中，超声混合均匀后倒入分子量为3000的透析袋内，用1.0～2.0L的去离子水透析20～...

【专利技术属性】
技术研发人员：王成章，周昊，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院林产化学工业研究所，
类型：发明
国别省市：江苏,32