【技术实现步骤摘要】
本发涉及一种双酶分步转化法从马蓝叶中制备生物碱化合物的方法，属于植物活性物制备。
技术介绍
1、马蓝（baphicacanthus cusia (nees) bremek），是爵床科板蓝属多年生草本植物，主要分布于我国贵州、云南和福建等地区，现有种植面积100万亩以上。马蓝的根茎叶均可入药，其茎、叶可加工炮制成中药材青黛，根可作为南板蓝根入药。同时，马蓝叶可加工成蓝靛膏，是一种天然的染料，已有三千多年的历史。马蓝中的生物碱具有良好的生物功效，治疗慢性白血病，具有抗氧化、抗菌和消炎等作用。
2、现阶段国内大多采用传统工艺制备马蓝靛蓝，马蓝鲜叶采摘后，将茎叶放入水池中，用重物压入水低，浸泡。需要浸泡3～8天，当水变成深绿色时，将马蓝叶捞出弃去，慢慢倒入石灰乳，期间不停地搅动，直到液体变成深蓝色并且有许多紫色的泡沫漂浮在表面。最后静置，弃去上层清液，底部的沉淀即为马蓝靛蓝。该方法得到的靛蓝收率低，靛蓝的纯度不超过3%。而且劳动强度大，废水量大，且制备过程周期长。也有文献报道采用水酶法从南板蓝根中进行靛蓝的提取，但方法的提取得率低，仅为0.218%。王金坤等采用糖化酶从蓼蓝叶中制备精靛蓝，制备靛蓝的收率为0.348%，收率也较低。这两种方法，只采用一种酶进行靛蓝的制备，过程中也未对其它高生物活性的生物碱进行富集。针对原料中含有的吲哚 β-d-葡萄糖苷，该化合物是吲哚硫酸酯（尿毒症毒素）的前体物质，该化合物是否存在于化合物中，未进行检测和限定。本专利采用双酶分步转化法从马蓝叶中制备生物碱化合物，该方
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种双酶分步转化法从马蓝叶中制备生物碱化合物的方法。
2、为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、1. 一种双酶分步转化法从马蓝叶中制备生物碱化合物的方法，步骤在于：
4、（1）马蓝鲜叶（或干叶），采用90℃以上的水，浸泡提取，马蓝鲜叶（或干叶）与水的比例按g/ml为1:10~1:60，时间为10~60 min，浸泡1~3次，过滤，除去叶渣，得到提取液；
5、（2）在上述提取液中加入维生素c，维生素c与提取液的比例按mg/l为100:1~10:1，搅拌均匀后，用缓冲盐调节提取液的ph为4.5~6.0，加入1号酶，酶与提取液的比例按mg/l为5:1~250:1，搅拌均匀后，在温度30~60℃反应4~8h，得到反应液；
6、（3）在上述反应液中，加入2号酶，酶与反应液的比例按mg/l为1:1~100:1，搅拌均匀后，在温度30~60℃反应1~3h，离心得到沉淀ⅰ；
7、（4）将上述沉淀ⅰ，用蒸馏水浸泡，沉淀ⅰ与蒸馏水的比例按g/ml为1:20~1:100，离心，除去水得沉淀ⅱ，重复2~3次，将沉淀ⅱ干燥后即为生物碱化合物，计算得率，并采用高效液相色谱分析方法测定生物碱含量。
8、2. 缓冲盐为磷酸盐缓冲体系、柠檬酸盐缓冲体系、醋酸盐缓冲体系中的一种。
9、3. 1号酶为来自于黑曲酶的 β-葡萄糖苷酶、来自于杏仁的 β-葡萄糖苷酶、蜗牛酶、柚苷酶中的一种或几种。
10、4. 2号酶为来自于漆酶、酪氨酸酶、菌菇多酚氧化酶、茶多酚氧化酶中的一种或几种。
11、5. 生物碱化合物的得率为0.5%~5%。
12、6. 生物碱化合物主要包括靛蓝、靛玉红、青黛酮、indigodoles b、indigodolesc、色胺酮、靛红、异靛蓝。
13、7. 生物碱化合物中不包含吲哚 β-d-葡萄糖苷。
14、8. 生物碱含量为42~80%，靛蓝的含量为20~68%。
15、有益效果
16、本专利技术所提供一种双酶分步转化法从马蓝叶中制备生物碱化合物的方法，还具有以下特点和效果：
17、（1）本专利技术路线简便，相比传统制靛方法，工艺时间缩短了7倍，过程环保无污染。
18、（2）传统制靛工艺，更倾向于靛蓝化合物的获得，过程中加入碱等化合物，这些化合物对其它活性生物碱具有破坏作用。而本方法所采用的双酶体系，过程温和，专一性强，获得的生物碱化合物，种类丰富，同时保留了有效生物碱的生物活性。
19、（3）吲哚 β-d-葡萄糖苷是马蓝叶原有的生物碱，该生物碱是吲哚硫酸酯的前体物质，可由吲哚 β-d-葡萄糖苷生物转化而成，吲哚硫酸酯是一种尿毒症毒素。通过本专利方法，可以将该化合物完全降解转化，使其在生物碱化合物中不保留。
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1.一种双酶分步转化法从马蓝叶中制备生物碱化合物的方法，所述方法的步骤在于：
2.根据权利要求1所述一种双酶分步转化法从马蓝叶中制备生物碱化合物的方法，其特征在于缓冲盐为磷酸盐缓冲体系、柠檬酸盐缓冲体系、醋酸盐缓冲体系中的一种。
3.根据权利要求1所述一种双酶分步转化法从马蓝叶中制备生物碱化合物的方法，其特征在于1号酶为来自于黑曲酶的β-葡萄糖苷酶、来自于杏仁的β-葡萄糖苷酶、蜗牛酶、柚苷酶中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述一种双酶分步转化法从马蓝叶中制备生物碱化合物的方法，其特征在于2号酶为来自于漆酶、酪氨酸酶、菌菇多酚氧化酶、茶多酚氧化酶中的一种或几种。
5.根据权利要求1所述一种双酶分步转化法从马蓝叶中制备生物碱化合物的方法，其特征在于生物碱化合物的得率为0.5%~5%。
6.根据权利要求1所述一种双酶分步转化法从马蓝叶中制备生物碱化合物的方法，其特征在于生物碱化合物主要包括靛蓝、靛玉红、青黛酮、Indigodoles B、Indigodoles C、色胺酮、靛红、异靛蓝。
7.根据权利要求1所述
8.根据权利要求1所述一种双酶分步转化法从马蓝叶中制备生物碱化合物的方法，其特征在于生物碱含量为42~80%，靛蓝的含量为20~68%。
...【技术特征摘要】
1.一种双酶分步转化法从马蓝叶中制备生物碱化合物的方法，所述方法的步骤在于：
2.根据权利要求1所述一种双酶分步转化法从马蓝叶中制备生物碱化合物的方法，其特征在于缓冲盐为磷酸盐缓冲体系、柠檬酸盐缓冲体系、醋酸盐缓冲体系中的一种。
3.根据权利要求1所述一种双酶分步转化法从马蓝叶中制备生物碱化合物的方法，其特征在于1号酶为来自于黑曲酶的β-葡萄糖苷酶、来自于杏仁的β-葡萄糖苷酶、蜗牛酶、柚苷酶中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述一种双酶分步转化法从马蓝叶中制备生物碱化合物的方法，其特征在于2号酶为来自于漆酶、酪氨酸酶、菌菇多酚氧化酶、茶多酚氧化酶中的一种或几种。
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【专利技术属性】
技术研发人员：王成章，陈虹霞，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院林产化学工业研究所，
类型：发明
国别省市：
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