【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物育种，具体涉及一种培育甜瓜单性花系的方法。
技术介绍
1、甜瓜(cucumis melo l.)为葫芦科黄瓜属一年生蔓性草本植物。早熟丰产、品质优良、商品性高的杂交甜瓜品种已成为种植者的首选目标。种子纯度直接影响农业生产的产量和质量，在种子生产、加工、贮藏和经营贸易中具有极其重要的意义。
2、目前在生产上所用的甜瓜种子大多都是杂种一代。甜瓜杂种一代具有明显的优势，产量一般比常规品种增加，并且在果实的可溶性固形物含量、品质、早熟性、抗病性和耐贮藏性等方面都有显著地提高。
3、杂交种的种子真实性和纯度是判断甜瓜种子质量的重要指标。在常规的杂种一代种子生产中采用蕾期去雄的制种方式，进行人工去雄造成费时费工和杂交成本高，同时还会因去雄不完全，导致种子的纯度降低，使优良杂交种的推广受到影响。若人工去雄时伤及雌蕊，会造成授粉率低，结实减少，影响杂交种产量。随着甜瓜杂种优势利用的发展，迫切需要能简化去雄步骤的单性花系甜瓜材料。
4、1-氨基环丙烷-1-羧酸合成酶(acs-7)基因是乙烯合成相关基因，甜瓜cmacs7基因有两种等位基因，分别控制甜瓜单性花和两性花性状。甜瓜cmacs7基因对应的genbank登录号为eu791279.1(a等位基因)和eu791280.1(a等位基因))。甜瓜单性花基因与两性花基因相比，基因编码的mrna在编码区第170个核苷酸和第1059个核苷酸都发生了由c到t的置换突变，也就是单性花基因在对应位置是c，而两性花基因在对应位置是t，导致了该基因编码的蛋白质的
5、cmacs7基因型检测方法目前有kasp标记、caps标记、scar标记、srap标记、rapd标记、indel标记等。
6、目前，报道的关于单性花转育体系中并没有运用上kasp检测技术。因此，建立单性花特异基因转育到优质母本中并使用它配制杂交种的一整套规范的转育体系，可以免除人工去雄、降低制种成本、提高杂交制种效率和提高制种纯度和产量，在生产制种、品种推广上具有非常广阔的应用前景。
7、甜瓜的优良单性花母本培育过程中，需要不断回交选育，必须等雌花开放才能拔除50％的完全花株，如果在苗期采用单性花的分子标记辅助选择，则可以节省50％的土地，按照目标性状进行定向精准育种，有效缩小育种群体，缩短育种时间并提高育种效率。
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术中存在的上述不足，提供了一种培育甜瓜单性花系的方法，建立单性花特异基因转育到优质母本中并使用它配制杂交种的一整套规范的转育体系，通过运用kasp检测技术可以在苗期进行基因型筛选，保留需要的基因型进行后续的研究，节省栽种面积和时间。
2、本专利技术首先提供了一种用于鉴别甜瓜(cucumis melo l.)单性花cmacs7基因型的序列，包括：
3、用于扩增单性花基因型的上游引物a_allele-f：gaaggtcgagtca acggattctggtgttattcaaatgggcttagc；
4、用于扩增两性花基因型的上游引物a_allele-f：gaaggtgaccaag ttcatgcttctggtgttattcaaatgggcttagt；
5、以及用于与上游引物a_allele-f或上游引物a_allele-f配对的下游引物a/a-r：cccaatctccttacaaagcaaaacaaaac，
6、其中，上游引物a_allele-f和上游引物a_allele-f分别使用不同的荧光标记。
7、优选的，上游引物a_allele-f和上游引物a_allele-f使用的荧光标记选自以下两种：fam、hex、tet、rox、tamra、joe、cy3、cy5。
8、本专利技术又提供了一种用于鉴别甜瓜单性花cmacs7基因型的kasp检测试剂盒，包括所述用于鉴别甜瓜单性花cmacs7基因型的序列。
9、本专利技术又提供了一种用于鉴别甜瓜单性花cmacs7基因型的方法，包括以下步骤：
10、(1)提取待检测甜瓜的基因组dna；
11、(2)以步骤(1)所得基因组dna作为模版，利用所述用于鉴别甜瓜单性花cmacs7基因型的序列进行kasp基因型检测；
12、(3)读取荧光信号得到基因分型图，并根据荧光颜色不同，输出基因型结果，
13、如果使用上游引物a_allele-f和下游引物a/a-r扩增有信号，则待检测甜瓜单性花cmacs7基因型为aa，为纯合的单性花单株；
14、如果使用上游引物a_allele-f和下游引物a/a-r扩增有信号，则待检测甜瓜单性花cmacs7基因型为aa，为两性花单株；
15、如果使用上游引物a_allele-f、上游引物a_allele-f分别与下游引物a/a-r扩增有信号均有信号，则待检测甜瓜单性花cmacs7基因型为aa，为杂合的单性花单株。
16、优选的，kasp基因型检测的体系为：
17、kasp mix，5μl；
18、模板50ng浓度，5μl；
19、引物mix，0.14μl，其中引物mix中含有上游引物a_allele-f、上游引物a_allele-f和下游引物a/a-r。
20、优选的，kasp基因型检测的反应程序：94℃预变性15min；94℃变性20s，61℃退火及延伸1min，共10个循环，每个循环退火及延伸温度降0.6℃；94℃变性20s，55℃退火及延伸1min，共26个循环；37℃延伸1min。
21、优选的，步骤(1)中，提取待检测甜瓜的基因组dna时，当甜瓜幼苗出现第一片真叶时采集部分该第一片真叶用于提取基因组dna。
22、本专利技术还提供了一种培育甜瓜单性花系的方法，包括以下步骤：
23、s1，将具有特定优良性状的甜瓜材料作为母本，将纯合的单性花基因型材料作为父本，进行杂交后获得单性花表型的杂交f1代，
24、其中母本的单性花cmacs7基因型为aa，父本的单性花cmacs7基因型为aa；
25、s2，以步骤s1所得杂交f1代作为母本，步骤s1中具有特定优良性状的甜瓜材料作为父本，进行回交获得bc1f1群体，使用所述用于鉴别甜瓜单性花cmacs7基因型的方法进行基因型鉴别，筛选出基因型为aa的材料；
26、s3，以步骤s2所得bc1f1群体中基因型为aa的材料作为母本，步骤s1中具有特定优良性状的甜瓜材料作为父本，进行回交获得bc2f1群体，使用所述用于鉴别甜瓜单性花cmacs7基因型的方法进行基因型鉴别，筛选出基因型为aa的材料；
27、s4，以步骤s3所得bc2f1群体中基因型为aa的材料进行连续自交，并使用所述用于鉴别甜瓜单性花cmacs7基因型的方法进行基因型鉴别，最终获得与步骤s1中具有特定优良性状的甜本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于鉴别甜瓜(Cucumis melo L.)单性花cmACS7基因型的序列，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述用于鉴别甜瓜单性花cmACS7基因型的序列，其特征在于，上游引物A_Allele-F和上游引物a_Allele-F使用的荧光标记选自以下两种：FAM、HEX、TET、ROX、TAMRA、JOE、Cy3、Cy5。
3.一种用于鉴别甜瓜单性花cmACS7基因型的KASP检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2任一所述用于鉴别甜瓜单性花cmACS7基因型的序列。
4.一种用于鉴别甜瓜单性花cmACS7基因型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述用于鉴别甜瓜单性花cmACS7基因型的方法，其特征在于，KASP基因型检测的体系为：
6.根据权利要求4所述用于鉴别甜瓜单性花cmACS7基因型的方法，其特征在于，KASP基因型检测的反应程序：94℃预变性15min；94℃变性20S，61℃退火及延伸1min，共10个循环，每个循环退火及延伸温度降0.6℃；94℃变性20S，55℃退火及延
7.根据权利要求4所述用于鉴别甜瓜单性花cmACS7基因型的方法，其特征在于，步骤(1)中，提取待检测甜瓜的基因组DNA时，当甜瓜幼苗出现第一片真叶时采集部分该第一片真叶用于提取基因组DNA。
8.一种培育甜瓜单性花系的方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.根据权利要求8所述培育甜瓜单性花系的方法，其特征在于，步骤S1中具有特定优良性状的甜瓜材料为甜瓜品种“绿乐”的母本材料。
...【技术特征摘要】
1.一种用于鉴别甜瓜(cucumis melo l.)单性花cmacs7基因型的序列，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述用于鉴别甜瓜单性花cmacs7基因型的序列，其特征在于，上游引物a_allele-f和上游引物a_allele-f使用的荧光标记选自以下两种：fam、hex、tet、rox、tamra、joe、cy3、cy5。
3.一种用于鉴别甜瓜单性花cmacs7基因型的kasp检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2任一所述用于鉴别甜瓜单性花cmacs7基因型的序列。
4.一种用于鉴别甜瓜单性花cmacs7基因型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述用于鉴别甜瓜单性花cmacs7基因型的方法，其特征在于，kasp基因型检测的体系为：
【专利技术属性】
技术研发人员：薛琴，叶立华，杨国志，顾掌根，
申请(专利权)人：嘉兴市农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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