The invention discloses a preparation of a culture medium for efficient expression of plasmid DNA of E. coli engineering bacteria, which comprises the following steps: (1) preparation of modified composite powder; (2) weighing of raw materials; (3) preparation of culture medium; (4) sterilization of culture medium. The improved composite powder added in the final culture medium of the invention has reasonable nutritional matching and can help improve the nutritional formulation of the culture medium, release negative ions, promote the growth of bacteria, increase the number of live bacteria, increase the total content of plasmids per unit volume, the content of plasmids per unit volume, the content of superhelix plasmids per unit mass plasmid, and has a good improvement effect on the purity of plasmids. It has great market promotion value.
【技术实现步骤摘要】
一种用于大肠杆菌工程菌高效表达质粒DNA的培养基的配制
本专利技术属于生物制剂
,具体涉及一种用于大肠杆菌工程菌高效表达质粒DNA的培养基的配制。
技术介绍
质粒具有自主复制能力,使其在子代细胞中也能保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。细菌质粒是DNA重组技术中常用的载体。载体是指把一个有用的外源基因通过基因工程手段,送进受体细胞中去进行增殖和表达的工具。将某种目标基因片段重组到质粒中,构成重组基因或重组体。然后将这种重组体经微生物学的转化技术,转入受体细胞(大肠杆菌)中,使重组体中的目标基因在受体菌中得以繁殖或表达,从而改变寄主细胞原有的性状或产生新的物质。研究发现,提取的质粒一般有超螺旋、线形和开环三种构象。进行琼脂糖凝胶电泳实验时三种构象的质粒电泳速度为超螺旋质粒>线形质粒>开环质粒,以超螺旋质粒电泳速度最快,线形质粒在中间,而开环质粒在最后。更重要的是,在用质粒转染时,超螺旋比例高时其转染效率及表达量较高,普遍认为超螺旋质粒DNA在基因治疗和DNA疫苗中是起主要作用的质粒载体形式。细菌的培养作为生产超螺旋质粒DNA的第一步,在整个生产过程中起着关键的作用。它兴驻直接影响到超螺旋质粒DNA的产量,而且也影响下续步骤的进行。因此,选择和优化菌体的生长条件,是产生大量稳定的超螺旋质粒DNA必要条件,特别是培养基的组成成分和浓度对细菌的生长和超螺旋质粒DNA的含量有较大的影响。《一种提高质粒DNA在大肠杆菌工程菌中比含量的培养基》(申请号为200910213725.8)中公开了一种提高质粒DNA在大肠杆菌工程菌中比含量的培养基,在优化培养基的基 ...
【技术保护点】
1.一种用于大肠杆菌工程菌高效表达质粒DNA的培养基的配制,其特征在于,包括如下步骤:(1)改性复合粉的制备:a. 将黄土石和碳酸镧按照重量比为2~3:1共同投入碱液中进行浸泡,浸泡时碱液内的温度控制为60~70℃,浸泡处理20~30min后滤出;b. 将操作a中滤出的黄土石和碳酸镧混合物投入酸液中进行浸泡,浸泡时酸液内的温度控制为50~56℃,浸泡处理16~18min后滤出;c. 将操作b中滤出的黄土石和碳酸镧混合物投入煅烧炉中进行煅烧处理,煅烧炉内的温度控制为920~980℃,煅烧处理5~7min后,将煅烧炉中的温度降至102~104℃,然后取出混合物立马投入改性液中进行浸泡,浸泡过程在微波炉中进行,浸泡处理12~18min后,过滤得滤渣;d. 将操作c所得的滤渣置于烘箱内进行干燥,烘箱内的温度控制为65~75℃,干燥至含水率为6~8%即得改性复合粉;(2)原料称取:称取相应重量份的甘油20~24份、胰蛋白胨12~16份、酵母提取物13~15份、氯化钠12~14份、微量元素0.6~0.7份、步骤(1)所得改性复合粉8~10份、无菌水450~550份备用;(3)培养基的配制:将步骤( ...
【技术特征摘要】
1.一种用于大肠杆菌工程菌高效表达质粒DNA的培养基的配制,其特征在于,包括如下步骤:(1)改性复合粉的制备:a.将黄土石和碳酸镧按照重量比为2~3:1共同投入碱液中进行浸泡,浸泡时碱液内的温度控制为60~70℃,浸泡处理20~30min后滤出;b.将操作a中滤出的黄土石和碳酸镧混合物投入酸液中进行浸泡,浸泡时酸液内的温度控制为50~56℃,浸泡处理16~18min后滤出;c.将操作b中滤出的黄土石和碳酸镧混合物投入煅烧炉中进行煅烧处理,煅烧炉内的温度控制为920~980℃,煅烧处理5~7min后,将煅烧炉中的温度降至102~104℃,然后取出混合物立马投入改性液中进行浸泡,浸泡过程在微波炉中进行,浸泡处理12~18min后,过滤得滤渣;d.将操作c所得的滤渣置于烘箱内进行干燥,烘箱内的温度控制为65~75℃,干燥至含水率为6~8%即得改性复合粉;(2)原料称取:称取相应重量份的甘油20~24份、胰蛋白胨12~16份、酵母提取物13~15份、氯化钠12~14份、微量元素0.6~0.7份、步骤(1)所得改性复合粉8~10份、无菌水450~550份备用;(3)培养基的配制:将步骤(2)称取的无菌水注入搅拌罐内,将搅拌罐内的温度升至98~102℃,然后将步骤(2)中称取的甘油、胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、微量元素、步骤(1)所得改性复合粉依次投入搅拌罐内,边搅拌边投入,持续搅拌50~60min,搅拌的同时进行超声波处理;(4)培养基灭菌:将步骤(3)中搅拌混匀的混合液置于高温高压锅内...
【专利技术属性】
技术研发人员:赵建阳,王世凯,韦小艳,
申请(专利权)人:安徽欣伯玉生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:安徽,34
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