The invention provides a method for eliminating acromion in chromatography, which uses ion exchange filler to purify protein in combination with elution, and eliminates acromion in UV detection when target protein is eluted. Among them, the ion exchange filler is Capto S ImpAct. The method includes the following steps: a) balancing: balancing the ion exchange filler with a balanced buffer before sampling; b) sampling: loading the protein sample onto the ion exchange filler, binding the target protein with the ion exchange filler; c) elution: eluting the ion exchange filler with the elution buffer; d) elution: eluting the purpose with the elution buffer. The protein was eluted from the packing. The method of the invention achieves the effect of acromion elution in the process of purifying protein by utilizing the differential balance buffer/elution buffer and the pH value of the elution buffer.
【技术实现步骤摘要】
一种消除层析中洗脱肩峰的方法
本专利技术涉及生物制药领域,特别是涉及层析步骤中一种消除层析中洗脱肩峰的方法一种消除层析中洗脱肩峰的方法。
技术介绍
离子交换层析,作为生物制药下游工艺中的精细纯化步骤,能够高效去除杂质,提高生物药蛋白质量。在结合洗脱模式的离子交换层析中,填料上结合的目的蛋白在盐浓度梯度或pH梯度洗脱过程中以单峰形式洗脱,但部分蛋白也会出现双峰形式的洗脱特征。在大规模生产中洗脱出现肩峰会影响样品的质量和生产操作复杂性。通过特殊地改变离子交换层析条件消除肩峰现象,有利于工艺的改进和样品质量的控制。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于,提供一种消除层析中洗脱肩峰的方法,能够消除离子交换层析中的目的蛋白洗脱出现肩峰的问题,提高生产的可控性和工艺文稳健性。为解决上述技术问题,本专利技术的一种消除层析中洗脱肩峰的方法,是使用离子交换填料以结合洗脱的方式进行蛋白纯化,同时消除目的蛋白洗脱时UV检测出现的肩峰。具体的,所述离子交换填料为CaptoSImpAct。具体的,所述方法包括以下步骤:a)平衡:上样前用平衡缓冲液对离子交换填料进行平衡;b)上样:将蛋白样品加载至离子交换填料上,目的蛋白与离子交换填料结合;c)淋洗:用淋洗缓冲液淋洗离子交换填料;d)洗脱:用洗脱缓冲液将目的蛋白从填料上洗脱下来。具体的,所述方法还包括步骤:e)结果评价:评估洗脱样品质量和层析图谱的特征。具体的,所述平衡缓冲液与所述淋洗缓冲液的pH值相同,且低于所述洗脱缓冲液的pH值。具体的,所述平衡缓冲液、淋洗缓冲液为50mMNaAc-HAc(pH5.0)。具体的,所述平衡缓冲 ...
【技术保护点】
1.一种消除层析中洗脱肩峰的方法,其特征在于,使用离子交换填料以结合洗脱的方式进行蛋白纯化,同时消除目的蛋白洗脱时UV检测出现的肩峰。
【技术特征摘要】
1.一种消除层析中洗脱肩峰的方法,其特征在于,使用离子交换填料以结合洗脱的方式进行蛋白纯化,同时消除目的蛋白洗脱时UV检测出现的肩峰。2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述离子交换填料为CaptoSImpAct。3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:a)平衡:上样前用平衡缓冲液对离子交换填料进行平衡;b)上样:将蛋白样品加载至离子交换填料上,目的蛋白与离子交换填料结合;c)淋洗:用淋洗缓冲液淋洗离子交换填料;d)洗脱:用洗脱缓冲液将目的蛋白从填料上洗脱下来。4.如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述方法还包括步骤:e)结果评价:评估洗脱样品质量和层析图谱的特征。5.如权利要求3所述...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈广勇,周茂志,王丹凤,孙李靖,罗明江,林世文,周伟昌,陈智胜,
申请(专利权)人:上海药明生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:上海,31
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