一种血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒，包括磁微粒复合物试剂，酶结合物溶液，样本稀释液，SAA校准品以及发光底物；所述磁微粒复合物试剂中的磁微粒偶联有鼠抗人SAA单克隆抗体；所述酶结合物溶液为辣根过氧化物酶标记的鼠抗人SAA抗体溶液或碱性磷酸酶标记的鼠抗人SAA抗体溶液。本发明专利技术制备的试剂盒可以搭配全自动免疫检测仪，操作简便，结果更准确，线性更宽，灵敏度更高，并且可以直接检测全血。与比浊法相比，降低了血脂样本的干扰，能够更加准确地检测人血清、血浆、全血中的SAA；搭载自动化系统操作简单，通量大；采用磁微粒平台，使用面较广，成本低且受众广。

A Kit for Quantitative Detection of Serum Amyloid A

The invention discloses a quantitative detection kit for serum amyloid A, including magnetic particle complex reagent, enzyme conjugate solution, sample dilution solution, SAA calibration product and luminescent substrate; magnetic particle in the magnetic particle complex reagent is coupled with mouse anti-human SAA monoclonal antibody; the enzyme conjugate solution is horseradish peroxidase labeled rat anti-human SAA antibody solution or alkaline. Phosphatase labeled mouse anti-human SAA antibody solution. The kit prepared by the invention can be matched with an automatic immunoassay instrument, and has the advantages of simple operation, more accurate results, wider linearity, higher sensitivity and direct detection of whole blood. Compared with turbidimetric method, it reduces the interference of blood lipid samples, and can detect SAA in human serum, plasma and whole blood more accurately. It is easy to operate and has a large flux. It uses magnetic particle platform with a wide range of applications, low cost and wide audience.

【技术实现步骤摘要】
一种血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒
本专利技术涉及体外检测技术，尤其是涉及一种血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒。
技术介绍
血清淀粉样蛋白A（SAA）属于急性时相反应蛋白，炎症或感染急性期在48-72h内迅速升高，并在疾病的恢复期下降。目前在细菌、病毒感染，动脉粥样硬化，冠心病，急性移植排斥反应，肿瘤等疾病中均能检测到血清SAA升高。特别在某些疾病中，如病毒感染、移植排斥反应、冠心病等，SAA的敏感性高于CRP，故SAA的定量检测可为临床提供更好的参考价值。血清淀粉样蛋白A定量检测包含多种方法和平台，主要包括免疫比浊法、胶体金渗滤法、酶联免疫吸附法以及荧光免疫层析法。免疫比浊法由于对仪器要求高，以及在原理上存在缺陷，造成免疫比浊法的检测结果线性短，检测结果不准确，易受血脂的影响，并且不能检测全血；胶体金渗滤法适用于床旁检验，并且可以检测全血，但是该方法操作过程过于复杂，不利于工作人员大量处理；酶联免疫吸附法(ELISA)进行测定具有较高的灵敏度，但是操作过程繁琐，每次测值均需要绘制标准曲线，准确度误差大，测定时间较长，仪器昂贵且需要经过一定专业培训的人员进行操作，因此不符合临床快速检测的要求；荧光免疫层析法由于层析平台本身的局限性，精密性问题始终不能得到解决，并且成本相对较高，目前市场上已较少出现。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对上述现有技术所存在的缺陷，提供一种检测结果更准确，线性更宽，灵敏度更高的血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒。为实现上述目的，本专利技术可采取下述技术方案：本专利技术所述的血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒，包括磁微粒复合物试剂，酶结合物溶液，样本稀释液，SAA校准品以及发光底物；所述磁微粒复合物试剂中的磁微粒偶联有鼠抗人SAA单克隆抗体；所述酶结合物溶液为辣根过氧化物酶标记的鼠抗人SAA抗体溶液或碱性磷酸酶标记的鼠抗人SAA抗体溶液。所述磁微粒的粒径为0.5um-20um，其表面修饰有~COOH、~NH2、苯甲磺酰基或~SH基团。所述样本稀释液为Tris-HCl、Tris-NaCl、PBS缓冲液或者生理盐水。所述样本稀释液中包含有牛血清白蛋白或Casein蛋白质。所述发光底物包括A液和B液，其中A液的主要成分为双氧水，B液的主要成分为鲁米诺或者鲁米诺衍生物，使用时按照1:1混匀。所述发光底物也可以为AP发光底物或辣根过氧化物酶发光底物，如Lumi-Phos530、AMPPD等。本专利技术通过磁微粒化学发光方法，设计定量检测人血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，其主要原理为：通过磁微粒包被鼠抗人单克隆抗体，结合人血清、血浆、全血中的血清淀粉样蛋白A，再与辣根过氧化物酶（HRP）或者碱性磷酸酶（AP）标记的另一株鼠抗人单抗形成双抗体夹心法，辣根过氧化物酶在底物存在的情况下，催化底物发光，通过光检测系统进行定量检测。本专利技术制备的试剂盒可以搭配全自动免疫检测仪，操作简便，结果更准确，线性更宽，灵敏度更高，并且可以直接检测全血。与比浊法相比，降低了血脂样本的干扰，能够更加准确地检测人血清、血浆、全血中的SAA；搭载自动化系统操作简单，通量大；采用磁微粒平台，使用面较广，成本低且受众广。附图说明图1为本专利技术试剂盒的线性关系图。图2本专利技术试剂盒的高值HOOK图。图3是本专利技术试剂盒与西门子试剂盒临床数据相关性对比图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做更加详细的说明，以便于本领域技术人员的理解。如无特殊说明，本专利技术所用的试剂和实验仪器均为市售产品，采用的方法为本领域常规方法。实施例1制备血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒1、配制磁微粒复合物试剂取磁珠缓冲液30ul，反复吹打磁珠（粒径约1um），置于磁珠分离器上，吸取上清后，添加碳二亚胺活化液，室温反应30min~1h；然后加入鼠抗人SAA捕获抗体进行偶联2h或者过夜；偶联结束后，至于磁珠分离器上吸取上清，加入乙醇胺溶液进行封闭30min；磁珠也置于分离器上，吸取上清后，加入封保液（主要成分为Tris-Nacl缓冲液，BSA以及EDTA），混匀，置于磁珠分离器，弃上清，重复3-5次后，封保液定容至3ml。2、配制酶结合物溶液取适量的酶标记抗体，按1:2000的稀释比例加入到酶稀释液中，配制成酶结合物溶液；所用的酶稀释液为0.02MPBS缓冲液（pH7.4），其中含有2%BSA，0.2%Prolin-300。3、配制样本稀释液采用0.02MPBS缓冲液（pH7.4）作为样本稀释液，其中含有2%BSA,0.2%Prolin-300;使用时将样本进行200倍稀释。4、配制SAA校准品采用0.02MPBS缓冲液（pH7.4，其中含有2%BSA,0.2%Prolin-300）作为校准品稀释液，将重组抗原稀释至校准品中，目标浓度分别是200mg/l、100mg/l、50mg/l、25mg/l、5mg/l以及0mg/l。5、制备发光底物A液：主要成分为双氧水。B液：主要成分为鲁米诺或者鲁米诺衍生物。实施例2本专利技术试剂盒的检测方法1、取20ul样本稀释200倍；2、取20ul稀释后的样本，加入20ul的磁微粒复合物试剂，吹打混匀，再加入100ul的酶结合物溶液，37℃孵育10min；3、在以上混合液中加入0.02MPBS洗液，清洗5次，加入底物（A液、B液各50ul）然后在安图全自动免疫化学发光仪A2000进行检测。实施例3本专利技术试剂盒的性能检测1、线性范围：将高值样本（230mg/l）进行梯度稀释，结果见下表和图1：结论：根据上表和图1，本试剂盒的线性范围满足3mg/l-200mg/l。2、检验本专利技术试剂盒的HOOK风险将抗原高值进行梯度稀释，结果如下表和图2所示：结论：根据上表和图2，本试剂盒的可以做到3600mg/l且无明显“钩状”，HOOK拐点可至115200mg/l。3、本专利技术试剂盒的相关性试验将本专利技术试剂盒检测西门子试剂临床定值样本，其临床数据相关性如图3所示，结果表明，本专利技术试剂盒与西门子的临床相关性r>0.99以上。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒，其特征在于：包括磁微粒复合物试剂，酶结合物溶液，样本稀释液，SAA校准品以及发光底物；所述磁微粒复合物试剂中的磁微粒偶联有鼠抗人SAA单克隆抗体；所述酶结合物溶液为辣根过氧化物酶标记的鼠抗人SAA抗体溶液或碱性磷酸酶标记的鼠抗人SAA抗体溶液。

【技术特征摘要】
1.一种血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒，其特征在于：包括磁微粒复合物试剂，酶结合物溶液，样本稀释液，SAA校准品以及发光底物；所述磁微粒复合物试剂中的磁微粒偶联有鼠抗人SAA单克隆抗体；所述酶结合物溶液为辣根过氧化物酶标记的鼠抗人SAA抗体溶液或碱性磷酸酶标记的鼠抗人SAA抗体溶液。2.根据权利要求1所述的血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒，其特征在于：所述磁微粒的粒径为0.5um-20um，其表面修饰有~COOH、~NH2、苯甲磺酰基或~SH基团。3.根据权利要求1所述的血清淀粉样蛋白A定量检测试剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：董亚玲，李双法，于林，李奎，刘功成，付光宇，吴学炜，苗拥军，
申请(专利权)人：郑州安图生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41