一种高直链淀粉各组分含量的分析方法技术

本发明专利技术公开了一种高直链淀粉各组分含量的分析方法，该方法包括淀粉溶液的制备、淀粉各组分的琼脂糖凝胶层析柱分离、各组分含量的测定等步骤。该测定方法简单、方便，结果重现性好，并能用少量淀粉同时定量测定淀粉中直链淀粉、中间组分和支链淀粉的含量，也能够分离和富集淀粉不同组分，为高直链淀粉分子结构的研究提供技术支持。

Method for analyzing content of each component of high amylose starch

The invention discloses a method for analyzing the content of each component of high amylose starch, which comprises the preparation of starch solution, the separation of starch components by agarose gel chromatography column and the determination of the content of each component. This method is simple and convenient, the reproducibility is good, the content and the simultaneous quantitative determination of amylose and amylopectin, intermediate component with a small amount of starch, can also set different separation and concentration of starch, high straight chain starch molecular structure to provide technical support.

【技术实现步骤摘要】
一种高直链淀粉各组分含量的分析方法
本专利技术属于淀粉组分检测
，具体涉及一种高直链淀粉各组分含量的分析方法。
技术介绍
淀粉主要由直链淀粉、中间组分和支链淀粉组成，其中中间组分主要存在于高直链淀粉中。直链淀粉主要是由α-1,4糖苷键相连的线性葡萄糖聚合物；支链淀粉除了α-1,4糖苷键外，还有α-1,6糖苷键形成的高度分支的葡萄糖聚合物；中间组分的分子量与直链淀粉相似，但有许多侧链，并且侧链长度比支链淀粉侧链长。淀粉各组分的含量和分子结构是评价淀粉品质的主要依据和重要指标，决定淀粉的用途。直链淀粉含量的提高影响淀粉的特性和用途，如高直链淀粉的作物籽粒富含抗性淀粉，而抗性淀粉可以促进人体胆固醇和血脂质的代谢、控制膳后血糖值、减少肠机能失调及结肠癌发病率、控制体重和能量平衡、促进矿物质的吸收、增加营养，能降低一些慢性病(如糖尿病、大肠癌、肥胖等)的发病风险，具有提高人体健康功能的特性。另外，高直链淀粉由于拥有难糊化、易老化和成膜性高等特点，也具有特殊的工业用途。因此高直链淀粉的研究受到人们的普遍关注。淀粉按各组分含量的不同分为糯性淀粉、普通淀粉和高直链淀粉，其中糯性淀粉主要含有支链淀粉组分；普通淀粉主要包含支链淀粉和直链淀粉，中间组分的含量较少；而高直链淀粉除了包含支链淀粉和直链淀粉外，还含有很高的中间组分，并且其含量和分子结构在不同来源的高直链淀粉中差异极大，对淀粉品质和用途也有显著影响。而目前现有的测定方法仅适用于对糯性淀粉和普通淀粉各组分的测定，而对高直链淀粉中的中间组分无法分析。鉴于高直链淀粉普遍受到人们的重视，因此亟需建立一种准确、快速，大多数实验室有能力完成的并且能够分离和分析高直链淀粉各组分含量的方法，为高直链淀粉各组分的含量测定和分子结构研究提供技术支持。
技术实现思路
本部分的目的在于概述本专利技术的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和专利技术名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和专利技术名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本专利技术的范围。鉴于上述和/或现有高直链淀粉各组分测定的技术空白，提出了本专利技术。因此，本专利技术目的是解决现有技术中的不足，提供一种高直链淀粉各组分含量的分析方法。为解决上述技术问题，本专利技术提供了如下技术方案：一种高直链淀粉各组分含量的分析方法，将高直链淀粉制备成溶液并冷却，过滤后上样到琼脂糖凝胶层析柱，用淋洗液清洗后，恒流速通入淋洗液并接样，通过蒽酮-硫酸法和碘比色法测定样品，计算其中支链淀粉组分、中间组分及直链淀粉组分的含量；所述淋洗液包括24～26mmol/LNaCl与0.8～1.2mmol/LNaOH的混合液。作为本专利技术所述高直链淀粉各组分含量的分析方法的一种优选方案，其中：所述高直链淀粉制备成溶液，其是取高直链淀粉向其中加入蛋白酶溶液，混匀后在35～40℃、300～400rpm条件下孵育25～35min，混匀离心，去除上清液后加入亚硫酸氢钠溶液，混匀后在37℃、300～400rpm条件下反应25～35min，混匀离心去除上清液，快速加入溴化锂/二甲基亚砜，混匀，在75～85℃、300～400rpm条件下8～10h，取出冷却至室温，离心8～12min，去除上清液加底物体积3～5倍的无水乙醇，离心8～12min后去除上清液，吸水纸干燥8～12min，用60～80℃的水溶解样品，制成0.1～0.3％浓度的溶液，沸水浴25～35min后，得到高直链淀粉溶液。作为本专利技术所述高直链淀粉各组分含量的分析方法的一种优选方案，其中：所述琼脂糖凝胶层析柱，其是将琼脂糖CL-2B作为填料，装柱后用所述淋洗液冲洗柱子20～28h，淋洗速度为0.4～0.6mL/min。作为本专利技术所述高直链淀粉各组分含量的分析方法的一种优选方案，其中：所述碘比色法，其中，淀粉的碘吸收光谱测定方法包括将样品、碘液及水混合，反应8～12min，用分光光度计测OD630nm处吸光度为淀粉碘吸收值，分析每管样品最大吸收峰的峰值对应的波长。作为本专利技术所述高直链淀粉各组分含量的分析方法的一种优选方案，其中：所述蛋白酶溶液pH为7.0～8.0，酶活为2.0～3.0U/mL，其添加量为每毫克所述高直链淀粉添加0.04～0.06mL。作为本专利技术所述高直链淀粉各组分含量的分析方法的一种优选方案，其中：所述蛋白酶溶液是用缓冲液溶解的，其中缓冲液的制作方法包括，将N-甘氨酸添加到水中，并将其pH调至7.0～8.0。作为本专利技术所述高直链淀粉各组分含量的分析方法的一种优选方案，其中：所述亚硫酸氢钠溶液其添加量为每毫克所述高直链淀粉添加0.04～0.06mL，其中，亚硫酸氢钠与溶液的质量体积比为0.004～0.005:1。作为本专利技术所述高直链淀粉各组分含量的分析方法的一种优选方案，其中：所述溴化锂/二甲基亚砜，其添加量为每毫克所述高直链淀粉添加0.12～0.18mL，其中，溴化锂占二甲基亚砜的质量分数为0.4～0.6％。作为本专利技术所述高直链淀粉各组分含量的分析方法的一种优选方案，其中：所述琼脂糖凝胶层析柱，其柱长为50cm，柱内径为1.6cm。作为本专利技术所述高直链淀粉各组分含量的分析方法的一种优选方案，其中：所述恒流速通入淋洗液，其通入流速为0.4～0.6mL/min。本专利技术所具有的有益效果：(1)整个操作和分析过程简单、方便，不需要复杂的仪器设备。(2)成本低廉、分离效果好，测量结果较准确。(3)所需样品量较小，比较适于微量样品的检测，结果重现性较好。(4)能够测得淀粉中直链淀粉、支链淀粉和中间组分的含量，也可以满足对淀粉各组分的富集和研究，为淀粉各组分含量测定和分子结构的研究提供技术支持。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：图1为实施例1中高直链玉米淀粉各组分分布。图2为实施例4中高直链水稻淀粉各组分分布。具体实施方式为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术，但是本专利技术还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似推广，因此本专利技术不受下面公开的具体实施例的限制。其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本专利技术至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。实施例1琼脂糖凝胶层析柱的制备，主要步骤为：(1)填料的选取：选取琼脂糖CL-2B(Sigma公司CL2B300)做为填料。(2)淋洗液的制备：称量2.925gNaCl和0.08gNaOH，用去离子水溶解并定容至2L，配成25mMNaCl和1mMNaOH的水溶液。(3)装柱：按常规琼脂糖凝胶层析柱的装柱方法装柱，其柱长为50cm，柱内径为1.6cm。(4)洗柱：淋洗液冲洗柱子24h(0.5mL/min)，以达到稳定的柱子条件本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高直链淀粉各组分含量的分析方法，其特征在于：将高直链淀粉制备成溶液并冷却，过滤后上样到琼脂糖凝胶层析柱，用淋洗液清洗后，恒流速通入淋洗液并接样，通过蒽酮‑硫酸法和碘比色法测定样品，计算其中支链淀粉组分、中间组分及直链淀粉组分的含量；所述淋洗液包括24～26mmol/L NaCl与0.8～1.2mmol/L NaOH的混合液。

【技术特征摘要】
1.一种高直链淀粉各组分含量的分析方法，其特征在于：将高直链淀粉制备成溶液并冷却，过滤后上样到琼脂糖凝胶层析柱，用淋洗液清洗后，恒流速通入淋洗液并接样，通过蒽酮-硫酸法和碘比色法测定样品，计算其中支链淀粉组分、中间组分及直链淀粉组分的含量；所述淋洗液包括24～26mmol/LNaCl与0.8～1.2mmol/LNaOH的混合液。2.如权利要求1所述高直链淀粉各组分含量的分析方法，其特征在于：所述高直链淀粉制备成溶液，其是取高直链淀粉向其中加入蛋白酶溶液，混匀后在35～40℃、300～400rpm条件下孵育25～35min，混匀离心，去除上清液后加入亚硫酸氢钠溶液，混匀后在37℃、300～400rpm条件下反应25～35min，混匀离心去除上清液，快速加入溴化锂/二甲基亚砜，混匀，在75～85℃、300～400rpm条件下8～10h，取出冷却至室温，离心8～12min，去除上清液加底物体积3～5倍的无水乙醇，离心8～12min后去除上清液，吸水纸干燥8～12min，用60～80℃的水溶解样品，制成0.1～0.3％浓度的溶液，沸水浴25～35min后，得到高直链淀粉溶液。3.如权利要求1或2所述高直链淀粉各组分含量的分析方法，其特征在于：所述琼脂糖凝胶层析柱，其是将琼脂糖CL-2B作为填料，装柱后用所述淋洗液冲洗柱子20～28h，淋洗速度为0.4～0.6mL/min。4.如权利要求1所述高直链淀粉各组分含量的分...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦存虚，林令尚，张龙，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32