一种抗体偶联纳米金探针检测CNN2的方法及应用技术

本发明专利技术公开一种抗体偶联纳米金探针检测CNN2的方法及应用，属于基因工程、免疫学和肿瘤学技术领域。这是一种采用基于纳米金探针的酶联免疫吸附试验用于抗CNN2抗体高灵敏检测的信号放大策略。此探针由HRP酶标记的羊抗人IgG抗体高负载于纳米金表面形成，且稳定性好，易制备。在检测进程中，首先利用基因工程菌表达纯化可溶性肝细胞癌相关抗原CNN2，并以此蛋白作为抗原，分别检测肝细胞癌、肝炎、肝硬化、肝良性肿瘤及正常人血清中抗CNN2抗体的水平。在肿瘤诊断、肿瘤预后与监测的评估中具有较广阔的应用前景。

An Antibody Coupled Nanogold Probe for Detection of CNN2 and Its Application

The invention discloses a method for detecting CNN2 with antibody-coupled nanogold probe and its application, which belongs to the technical field of genetic engineering, immunology and oncology. This is a signal amplification strategy for highly sensitive detection of anti-CNN2 antibodies by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) based on gold nanoprobe. The probe was formed by the sheep anti-human IgG antibody labeled by HRP enzyme, which was loaded on the surface of gold nanoparticles, and was stable and easy to prepare. In the process of detection, the soluble hepatocellular carcinoma-associated antigen CNN2 was expressed and purified by genetic engineering bacteria, and the level of anti-CNN2 antibody in serum of hepatocellular carcinoma, hepatitis, cirrhosis, benign liver tumors and normal persons was detected respectively. It has broad application prospects in the evaluation of tumor diagnosis, prognosis and monitoring.

【技术实现步骤摘要】
一种抗体偶联纳米金探针检测CNN2的方法及应用
本专利技术属于基因工程、免疫学和肿瘤学
，特别涉及一种抗体偶联纳米金探针检测CNN2的方法及应用。
技术介绍
肝癌是世界上最常见的癌症之一，已经严重威胁着人们的生命。肝癌可分为原发性与继发性两类。其中原发性肝癌是由肝脏的上皮组织或者间叶组织发展而来、危害甚大的恶性肿瘤。统计显示，有70%-90%的肝癌是肝细胞癌(HCC)。肝细胞癌作为最常见的原发性肝癌占癌症相关死亡原因的第三。尽管如此，肝癌在中国却是生存率最低的癌症。据统计，2015年中国有466100例新的肝癌病例和422100例肝癌死亡病例。如此高的患病率与死亡率迫使科学家们去寻求良策以控制与改善肝癌局势。随着科技的进步与医疗的发展，肝癌的诊断与治疗也相应取得了巨大的进步，但是还是未能找到有效治愈肝癌的途径。到目前，手术治疗依然是肝癌最有效同时也是首选的方法。不容乐观的是，如果一旦确诊，70%的肝癌患者只能接受姑息治疗。然而，超过75%的肝癌患者却不能手术切除。因此，肝癌治愈困难，目前的方案仅仅能够延长患者生存时间。此外，肝癌早期的症状无特异性，且不明显，中晚期肝癌症状较多。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体偶联纳米金探针检测CNN2的方法，其特征在于：所述探针的制备方法包括以下步骤：1）纳米金的合成：在 500 mL 三口烧瓶中加入 250 mL水，再加入 2.5 mL 1% HAuCl4，在电炉上加热至沸腾后，快速加入 4.4 mL 1%柠檬酸钠，溶液在 2～3 min 内其颜色由淡黄色—蓝色—酒红色逐渐变化，然后继续保持沸腾 10～15 min，移走热源，在室温下继续搅拌至冷却，最后定容到 200 mL，置 4 ℃冰箱冷藏备用，用该法制得的纳米金颗粒的直径为 13 nm 左右；2）探针的合成（1）用0.1M的K2CO3溶液将10 mL的新合成的AuNPs的pH调至9.0；（2）取...

【技术特征摘要】
1.一种抗体偶联纳米金探针检测CNN2的方法，其特征在于：所述探针的制备方法包括以下步骤：1）纳米金的合成：在500mL三口烧瓶中加入250mL水，再加入2.5mL1%HAuCl4，在电炉上加热至沸腾后，快速加入4.4mL1%柠檬酸钠，溶液在2～3min内其颜色由淡黄色—蓝色—酒红色逐渐变化，然后继续保持沸腾10～15min，移走热源，在室温下继续搅拌至冷却，最后定容到200mL，置4℃冰箱冷藏备用，用该法制得的纳米金颗粒的直径为13nm左右；2）探针的合成（1）用0.1M的K2CO3溶液将10mL的新合成的AuNPs的pH调至9.0；（2）取HRP酶标记的羊抗人IgG30μL并用适量的超纯水稀释后，在不断搅拌下逐滴加入到纳米金溶液中，并于室温下静置1h；（3）1h后，在搅拌下逐滴加入BSA水溶液，使反应体系中BSA的最终浓度达到1%，然后在高速离心机中13500rpm离心20min,弃上清；（4）用含1%BSA和0.05%NaN3的PB：pH7.4洗涤，再以13500rpm离心20min，弃上清，如此反复洗涤两次；（5）将洗涤后的离心沉淀物用5mL含5%BSA和0.05%NaN3的PB：pH7.4重悬，重悬后，经1000rpm离心5min，弃下层沉淀物，置4℃冰箱保存；3）IgG30检测步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵永祥，周素芳，张坤，黄勇，
申请(专利权)人：广西医科大学，
类型：发明
国别省市：广西,45