使用了质谱分析的认知功能障碍疾病生物标记物的定量方法和质谱分析装置制造方法及图纸

本发明专利技术为使用了质谱分析的认知功能障碍疾病生物标记物的定量方法和质谱分析装置。本发明专利技术提供在短时间内、特异性地且高灵敏度地检测生物试样中的认知功能障碍疾病的生物标记物的技术。本发明专利技术中，对于生物试样中包含的作为认知功能障碍疾病生物标记物的选自由14种肽组成的组中的至少一种肽，使用能进行MS/MS测定的质谱分析装置来进行MRM(多反应监测)测定，并基于其结果对前述肽进行定量。在此情况下，对于各肽而言，作为MRM测定的测定条件预先将作为前体离子的质荷比与产物离子的质荷比的组合的MRM转变存储在质谱分析装置的存储部中，对认知功能障碍疾病生物标记物进行检测时利用该MRM转变。

Quantitative methods and mass spectrometry devices for biomarkers of cognitive impairment diseases using mass spectrometry

The present invention provides a quantitative method and a mass spectrometry analysis device for biomarkers of cognitive dysfunction diseases using mass spectrometry analysis. The invention provides a technique for detecting biomarkers of cognitive impairment diseases in biological samples in a short time, specificity and high sensitivity. In the present invention, at least one of the 14 selected free peptides contained in the biological sample as a biomarker of cognitive impairment disease is determined by mass spectrometry analysis device capable of MS/MS determination, and the aforementioned peptide is quantified based on the results. In this case, for each peptide, the MRM transformation as a combination of the mass-charge ratio of the precursor ion and the mass-charge ratio of the product ion is stored in the storage unit of the mass spectrometry analyzer in advance as a condition for the determination of MRM. The MRM transformation is used for the detection of biomarkers of cognitive impairment diseases.

【技术实现步骤摘要】
使用了质谱分析的认知功能障碍疾病生物标记物的定量方法和质谱分析装置
本专利技术涉及通过使用质谱分析对多种肽进行定量来对认知功能障碍疾病的生物标记物进行检测、定量的方法和质谱分析装置。
技术介绍
以阿尔茨海默病为首的认知功能障碍疾病是引起患者的记忆能力、认知能力降低的疾病，病情经过10～20年而逐渐且连续地发展。在病情加剧的严重度高的认知功能障碍疾病中，不仅会出现记忆功能、认知功能的丧失而且会导致人格的崩溃，使患者丧失社会生活功能，因此期望开发出有效的治疗药。日本在1999年作为阿尔茨海默型认知症的治疗药批准的作为乙酰胆碱酯酶抑制药的盐酸多奈哌齐(donepezil)，以该药为首开发并使用了一些治疗药，但任何治疗药均用于延缓症状的加剧，而并非用于恢复已降低了的功能。因此，为了使现状的治疗药更有效，期望在早期阶段发现认知功能障碍疾病。作为用于诊断认知功能障碍疾病的主要方法，可列举出以下3种。(1)基于问诊的诊断其是临床医生对定向力(现在的年月、时刻、自己在哪之类的基本情况把握)、记忆力、计算能力、语言能力进行问诊，并基于其结果进行诊断的方法。有简易精神状态检查(mini-MentalStateExamination：MMSE)、长谷川式简易智力评价尺度(HSD-R)、魏氏成人智力测验第三版(WAIS-III)等。(2)图像诊断法其是通过正电子发射断层显像(PET：PositronEmissionTomogoraphy)、单光子发射断层显像(SPECT：SinglePhotonEmissionCT(ComputedTomography))等来调查脑的血流量、糖代谢，并基于其结果进行诊断的方法。(3)生物标记物检查其是调查脑脊髄液中的总tau(t-tau)、淀粉样β肽的存在量、存在比率，并基于其结果进行诊断的方法。(1)的方法通常出于对认知功能障碍疾病进行筛查的目的而使用，无法达到确定性的诊断。另外，HSD-R、MMSE的情况无法诊断分类为严重程度的认知功能障碍疾病的患者(非专利文献1)。(2)的方法需要使用特殊且昂贵的设备，难以在所有的医疗机构实施。进而，(1)和(2)的方法均根据担当医师不同而使诊断结果存在差异，缺乏客观性。(3)的方法虽然诊断灵敏度高、且能进行客观的诊断，但采取脑髓液在技术上较难，目前现状是尚未得以普及。相对于此，已经发现：作为能相对容易地取得的生物试样的血液(包含血清、血浆)中包含的多种特定的蛋白质或由该蛋白质产生的肽的含量在认知功能障碍疾病的患者(认知功能障碍疾病受检者)与未患有认知功能障碍疾病的人(非认知功能障碍受检者)之间存在差异，并且研究了将这些蛋白质或肽作为生物标记物来检测认知功能障碍疾病的方法(专利文献1～6)。在这些生物标记物中，包括不仅认知功能障碍疾病受检者与非认知功能障碍受检者之间存在差异、而且根据认知功能障碍疾病的进展程度不同含量也存在差异的生物标记物，因此可以期待该生物标记物的含量的测定可作为对于认知功能障碍疾病的早期诊断、该疾病的症状的进展程度的判定的有效方法。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特开2010-271078号公报专利文献2：日本特开2012-037349号公报专利文献3：日本特开2012-132808号公报专利文献4：日本特开2016-028243号公报专利文献5：日本特开2016-028244号公报专利文献6：国际公开WO2014/207888非专利文献非专利文献1：中野今治、水泽英洋编辑《易于理解的阿尔茨海默病——为了实际上涉及的人(日文：よくわかるアルツハイマー病-実際にかかわる人のために)》永井书店、2004年4月
技术实现思路
专利技术要解决的问题为了提高认知功能障碍疾病的早期诊断、进展程度判定的精度，需要特异性地且高灵敏度地对生物试样中包含的多种生物标记物进行检测。另外，伴随高龄化的发展而预期认知功能障碍疾病的患者数增加，考虑到用于诊断认知功能障碍疾病的样品数(生物试样的数量)增加，则需要尽可能地缩短检测1种生物标记物所需的时间。上述专利文献1～6中，作为检测认知功能障碍疾病生物标记物的方法公开了利用了抗原抗体反应的测定方法、利用了底物与酶的反应的酶活性测定法、或使用了质谱分析法的测定方法。然而，利用了抗原抗体反应的测定方法、酶活性测定法是单独测定1种蛋白质、1种肽的方法，为了测定多种生物标记物而花费时间、精力。另一方面，使用了质谱分析法的测定方法的情况下，虽然能一次性地测定多种生物标记物，但为了提高检测灵敏度而必须分别对多种生物标记物适宜地设定测定条件，而专利文献1～6中未进行有关测定条件的研究。由此，目前的现状是尚未建立满足上述需求的认知功能障碍疾病的生物标记物的检测方法。本专利技术要解决的课题在于提供在短时间内、特异性地且高灵敏度地检测生物试样中的认知功能障碍疾病的生物标记物的技术。用于解决问题的方案为了解决上述课题而完成的本专利技术的特征在于，其是使用能进行MS/MS测定的质谱分析装置来进行以该认知功能障碍疾病生物标记物作为对象的MRM(多反应监测)测定，并基于其结果对该认知功能障碍疾病生物标记物进行定量的方法，前述认知功能障碍疾病生物标记物包含选自由下述肽组成的组中的至少1种肽：由序列号1所示的氨基酸序列组成的源自补体C4-A的肽AD1008、由序列号2所示的氨基酸序列组成的源自转录因子AP-2γ的肽AD1025、由序列号3所示的氨基酸序列组成的源自催产素受体的肽AD1042、由序列号4所示的氨基酸序列组成的源自HERCE3泛素连接酶的肽AD1046、由序列号5所示的氨基酸序列组成的源自凝血素的肽AD1048、由序列号6所示的氨基酸序列组成的源自补体C4的肽AD1049、由序列号7所示的氨基酸序列组成的源自肿瘤坏死因子受体超家族成员16的肽ADPEP109315、由序列号8所示的氨基酸序列组成的源自凝溶胶蛋白的肽ADPEP421488、由序列号9所示的氨基酸序列组成的源自神经连接蛋白-2-β前体的肽ADPEP1315、由序列号10所示的氨基酸序列组成的源自神经连接蛋白-1-β的肽ADPEP12neu、由序列号11所示的氨基酸序列组成的源自凝血素前体的肽ADPEP1396、由序列号12所示的氨基酸序列组成的源自凝血素前体的肽ADPEP1039、由序列号13所示的氨基酸序列组成的源自凝血素前体的肽ADPEP1250、由序列号14所示的氨基酸序列组成的源自原钙粘蛋白γ的肽AD1089，作为前述MRM测定的测定条件之一的、作为前体离子的质荷比与产物离子的质荷比的组合的MRM转变如下：对于前述肽AD1008，为646.05/763.95、646.05/410.25、或646.05/615.35、对于前述肽AD1025，为538.95/534.25、538.95/484.75、或538.95/541.25、对于前述肽AD1042，为520.75/449.70、520.75/401.20、或520.75/801.40、对于前述肽AD1046，为856.90/720.25、856.90/993.55、或856.90/555.35、对于前述肽AD1048，为776.00/1061.50、776.00/1036.45、或776.00/1150.50、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种使用了质谱分析的认知功能障碍疾病生物标记物的定量方法，其使用能进行MS/MS测定的质谱分析装置来进行以生物试样中包含的认知功能障碍疾病生物标记物作为对象的MRM(多反应监测)测定，并基于其结果对该认知功能障碍疾病生物标记物进行定量，所述认知功能障碍疾病生物标记物包含选自由以下肽组成的组中的至少1种肽：由序列号1所示的氨基酸序列组成的源自补体C4‑A的肽AD1008、由序列号2所示的氨基酸序列组成的源自转录因子AP‑2γ的肽AD1025、由序列号3所示的氨基酸序列组成的源自催产素受体的肽AD1042、由序列号4所示的氨基酸序列组成的源自HERC E3泛素连接酶的肽AD1046、由序列号5所示的氨基酸序列组成的源自凝血素的肽AD1048、由序列号6所示的氨基酸序列组成的源自补体C4的肽AD1049、由序列号7所示的氨基酸序列组成的源自肿瘤坏死因子受体超家族成员16的肽ADPEP109315、由序列号8所示的氨基酸序列组成的源自凝溶胶蛋白的肽ADPEP421488、由序列号9所示的氨基酸序列组成的源自神经连接蛋白‑2‑β前体的肽ADPEP1315、由序列号10所示的氨基酸序列组成的源自神经连接蛋白‑1‑β的肽ADPEP12neu、由序列号11所示的氨基酸序列组成的源自凝血素前体的肽ADPEP1396、由序列号12所示的氨基酸序列组成的源自凝血素前体的肽ADPEP1039、由序列号13所示的氨基酸序列组成的源自凝血素前体的肽ADPEP1250、由序列号14所示的氨基酸序列组成的源自原钙粘蛋白γ的肽AD1089，作为所述MRM测定的测定条件之一的前体离子的质荷比与产物离子的质荷比的组合的MRM转变如下：对于所述肽AD1008，为646.05/763.95、646.05/410.25、或646.05/615.35、对于所述肽AD1025，为538.95/534.25、538.95/484.75、或538.95/541.25、对于所述肽AD1042，为520.75/449.70、520.75/401.20、或520.75/801.40、对于所述肽AD1046，为856.90/720.25、856.90/993.55、或856.90/555.35、对于所述肽AD1048，为776.00/1061.50、776.00/1036.45、或776.00/1150.50、对于所述肽AD1049，为512.30/516.30、512.30/629.35、或512.30/453.75、对于所述肽ADPEP109315，为518.25/642.85、518.25/586.30、或776.90/796.40、对于所述肽ADPEP421488，为725.40/378.15、725.40/917.45、或725.40/873.95、对于所述肽ADPEP1315，为744.35/885.45、744.35/757.40、或496.60/472.25、对于所述肽ADPEP12neu，为942.00/448.20、628.35/448.20、或942.00/547.25、对于所述肽ADPEP1396，为781.35/781.40、521.25/533.30、或781.35/1072.50、对于所述肽ADPEP1039，为638.80/1072.50、638.80/862.40、或638.80/747.35、对于所述肽ADPEP1250，为478.25/452.25、478.25/509.75、或478.25/351.20、对于所述肽AD1089，为458.25/331.20、458.25/602.35、或458.25/701.40。...

【技术特征摘要】
2017.07.14 JP 2017-1377251.一种使用了质谱分析的认知功能障碍疾病生物标记物的定量方法，其使用能进行MS/MS测定的质谱分析装置来进行以生物试样中包含的认知功能障碍疾病生物标记物作为对象的MRM(多反应监测)测定，并基于其结果对该认知功能障碍疾病生物标记物进行定量，所述认知功能障碍疾病生物标记物包含选自由以下肽组成的组中的至少1种肽：由序列号1所示的氨基酸序列组成的源自补体C4-A的肽AD1008、由序列号2所示的氨基酸序列组成的源自转录因子AP-2γ的肽AD1025、由序列号3所示的氨基酸序列组成的源自催产素受体的肽AD1042、由序列号4所示的氨基酸序列组成的源自HERCE3泛素连接酶的肽AD1046、由序列号5所示的氨基酸序列组成的源自凝血素的肽AD1048、由序列号6所示的氨基酸序列组成的源自补体C4的肽AD1049、由序列号7所示的氨基酸序列组成的源自肿瘤坏死因子受体超家族成员16的肽ADPEP109315、由序列号8所示的氨基酸序列组成的源自凝溶胶蛋白的肽ADPEP421488、由序列号9所示的氨基酸序列组成的源自神经连接蛋白-2-β前体的肽ADPEP1315、由序列号10所示的氨基酸序列组成的源自神经连接蛋白-1-β的肽ADPEP12neu、由序列号11所示的氨基酸序列组成的源自凝血素前体的肽ADPEP1396、由序列号12所示的氨基酸序列组成的源自凝血素前体的肽ADPEP1039、由序列号13所示的氨基酸序列组成的源自凝血素前体的肽ADPEP1250、由序列号14所示的氨基酸序列组成的源自原钙粘蛋白γ的肽AD1089，作为所述MRM测定的测定条件之一的前体离子的质荷比与产物离子的质荷比的组合的MRM转变如下：对于所述肽AD1008，为646.05/763.95、646.05/410.25、或646.05/615.35、对于所述肽AD1025，为538.95/534.25、538.95/484.75、或538.95/541.25、对于所述肽AD1042，为520.75/449.70、520.75/401.20、或520.75/801.40、对于所述肽AD1046，为856.90/720.25、856.90/993.55、或856.90/555.35、对于所述肽AD1048，为776.00/1061.50、776.00/1036.45、或776.00/1150.50、对于所述肽AD1049，为512.30/516.30、512.30/629.35、或512.30/453.75、对于所述肽ADPEP109315，为518.25/642.85、518.25/586.30、或776.90/796.40、对于所述肽ADPEP421488，为725.40/378.15、725.40/917.45、或725.40/873.95、对于所述肽ADPEP1315，为744.35/885.45、744.35/757.40、或496.60/472.25、对于所述肽ADPEP12neu，为942.00/448.20、628.35/448.20、或942.00/547.25、对于所述肽ADPEP1396，为781.35/781.40、521.25/533.30、或781.35/1072.50、对于所述肽ADPEP1039，为638.80/1072.50、638.80/862.40、或638.80/747.35、对于所述肽ADPEP1250，为478.25/452.25、478.25/509.75、或478.25/351.20、对于所述肽AD1089，为458.25/331.20、458.25/602.35、或458.25/701.40。2.根据权利要求1所述的使用了质谱分析的认知功能障碍疾病生物标记物的定量方法，其中，所述质谱分析装置为三重四极杆型质谱分析装置。3.一种质谱分析装置，其基于对生物试样中包含的认知功能...

【专利技术属性】
技术研发人员：松原稔哉，川上大辅，
申请(专利权)人：株式会社岛津制作所，
类型：发明
国别省市：日本,JP