The invention provides a method for identifying biomarkers of asthma and a detection kit. The biomarker is free mannose and glucose obtained by high performance liquid chromatography derived from pre-column PMP in serum and the ratio of glucose to mannose. The detection method of the invention is a high performance liquid chromatography method derived from pre-column 1 phenyl 5 methyl pyrazolone (PMP). The technical scheme of the present invention has the advantages of simple pretreatment, short analysis time, reasonable instrument price, conforming to conventional use, simple operation steps, high accuracy of detection results, simple blood collection can distinguish normal people from asthmatic patients, and little serum requirement, less than 1 mL blood collection, etc. The results show that this method can quantify the serum free mannose and glucose in asthmatic patients rapidly. It is very important to study the relationship between serum free mannose and glucose and asthma, and to find new clinical detection markers for asthma.
【技术实现步骤摘要】
一种鉴定哮喘生物标记物的方法及其检测试剂盒
本专利技术属于医药
,具体涉及一种鉴定哮喘的生物标记物的方法及其检测试剂盒。
技术介绍
哮喘又名支气管哮喘,是一种常见的呼吸系统疾病;是由多种细胞及细胞组份参与的气道慢性炎症性疾病。全世界约有3亿哮喘患者,已成为严重威胁公众健康的一种主要慢性疾病。在临床上,体检是检查哮喘的方式之一,临床上血液常规检查嗜酸性粒细胞增高、痰液检查嗜酸性粒细胞是否退化形成尖棱结晶,黏液栓和透明的哮喘珠、肺功能检查最大呼气流量以及呼气峰值流量是否减少都是哮喘的检验手段。此外,血气分析是否有呼吸性碱中毒,胸部X线检查患者两肺透亮度是否增加而呈过度充气状态也是常用的方法。上述方法在哮喘发作期都有着相应的检测优势,但在机体无异常体征的缓解期实现哮喘的检测,难度很大,都存在着一定的局限性,尤其是在患者最初尚未明确哮喘时,则更为明显。血液分析有着其方便快捷的独特优势,因此,开发出一种基于血液检测的哮喘生物标志物,对于解决哮喘检测技术的局限,意义重大。血清中还原性单糖似乎仅限于甘露糖和葡萄。文献报道,哮喘患者血清中,游离的葡萄糖和甘露糖水平比正常人高。人体血清游离单糖中葡萄糖的含量最高,正常人的范围为3.90~6.16mmol/L。目前,医院检验科可以直接通过测生化指标检测葡萄糖浓度,暂时不可以直接检测甘露糖浓度。健康成人血浆中游离甘露糖的浓度范围为20~80μmol/L。甘露糖的含量约为葡萄糖含量的1%。它大部分被认为是由细胞中的葡萄糖异构化而来。而近来有研究表明,细胞中流出的游离的甘露糖是哺乳动物血液中游离甘露糖的主要来源。这两部分来源的 ...
【技术保护点】
1.用于鉴定哮喘的生物标记物,其特征在于:所述生物标记物为血清经过柱前1‑苯基‑5‑甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱得到的游离甘露糖和葡萄糖以及葡萄糖与甘露糖的比值。
【技术特征摘要】
1.用于鉴定哮喘的生物标记物,其特征在于:所述生物标记物为血清经过柱前1-苯基-5-甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱得到的游离甘露糖和葡萄糖以及葡萄糖与甘露糖的比值。2.根据权利要求1所述的用于鉴定哮喘的生物标记物的定量分析方法,其特征在于:该方法为柱前PMP衍生的高效液相色谱法,包括以下具体步骤:(1)调节pH为7-14:取待检测的血清样品加超纯水于EP管中,加入氢氧化钠,涡旋混匀;(2)PMP衍生:每个样品加入PMP,涡旋混匀,离心后置于烘箱反应;(3)加酸中和反应:将烘箱内的样品取出,放置冷却,每个样品加入盐酸,涡旋混匀;(4)萃取:每管加入有机溶剂,涡旋,离心,移除下层有机溶剂,保留上清;(5)将样品离心,取上清液于装有内插管的棕色上样瓶中,盖紧盖子,离心,待用于高效液相分析;(6)制备甘露糖和葡萄糖的标准曲线;(7)将步骤(5)得到的色谱图与步骤(6)的标准曲线比对并分析计算,确定甘露糖、葡萄糖的浓度以及葡萄糖与甘露糖浓度的比值。3.根据权利要求2所述的用于鉴定哮喘的生物标记物的定量分析方法,其特征在于:所述高效液相色谱为Agilent1260高效液相系统,AgilentPoroshellEC-C18色谱柱(4.6mm×100mm,2.7μm),所述步骤(5)中的色谱条件为:检测波长:254nm,带宽4nm;参比波长:350nm,带宽100nm;柱温:37℃;流速:1mL/min;进样体积:20μL;流动相:A相为乙腈,B相为pH为5.5的0.1mol/L乙酸铵-乙酸...
【专利技术属性】
技术研发人员:张丽娟,窦怀乾,唐立岷,
申请(专利权)人:青岛大学附属医院,
类型:发明
国别省市:山东,37
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