一种鉴定红斑狼疮生物标记物的方法及其检测试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种鉴定系统性红斑狼疮的生物标记物的方法及其检测试剂盒。所述生物标记物为血清中经过柱前1‑苯基‑5‑甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱得到的游离葡萄糖、甘露糖和葡萄糖与甘露糖浓度的比值。本发明专利技术检测方法为柱前PMP衍生的高效液相色谱法。本发明专利技术的技术方案具有前处理简单，分析时间短，仪器价格合理，符合常规使用，操作步骤简单易学，检测结果准确性高，只需采血即可，所需血清量极少，采血量小于1mL等优点。所得结果显示此分析方法可以快速定量系统性红斑狼疮患者血清中游离甘露糖和葡萄糖，对于研究血清游离甘露糖及葡萄糖与红斑狼疮之间的关系、寻找新型红斑狼疮临床检测标志物有着非常重要的意义。

A Method for Identification of Biomarkers of Lupus Erythematosus and Its Detection Kit

The invention provides a method for identifying biomarkers of systemic lupus erythematosus and a detection kit. The biomarker is the ratio of free glucose, mannose and glucose to mannose concentration obtained by high performance liquid chromatography (HPLC) derived from pre-column 1 phenyl 5 methyl pyrazolone (PMP) in serum. The detection method of the invention is a high performance liquid chromatography method derived from pre-column PMP. The technical scheme of the present invention has the advantages of simple pretreatment, short analysis time, reasonable price of the instrument, conforming to conventional use, simple operation steps, high accuracy of detection results, only blood collection, little serum requirement, less than 1 mL blood collection, etc. The results show that this method can quantify the serum free mannose and glucose in patients with systemic lupus erythematosus rapidly. It is very important to study the relationship between serum free mannose and glucose and lupus erythematosus and to find new clinical markers for lupus erythematosus.

【技术实现步骤摘要】
一种鉴定红斑狼疮生物标记物的方法及其检测试剂盒
本专利技术属于医药
，具体涉及一种鉴定系统性红斑狼疮的生物标记物的方法及其检测试剂盒。
技术介绍
系统性红斑狼疮(SystemicLupusErythematosus，SLE)是一种致病性自身抗体所致自身免疫紊乱综合征，主要发病人群为育龄妇女，累积多系统、多器官，其活动期与缓解期交替出现，导致器官功能损伤，甚至死亡，严重影响人民身体健康。目前，SLE的诊断主要基于临床表现和实验室检查结果。SLE的临床体征和症状异质性巨大，并与其他结缔组织病重叠、表现难以区分，患者的个体差异以及低可预测性都增加了SLE早期诊断的难度。SLE的早期诊断对于控制炎症症状、改善患者生活质量、预防由疾病急性活动期引起的器官损伤以及最终降低医疗成本至关重要。因此，亟需更好的有助于SLE早期诊断、鉴别及预后判定的生物学指标。人体血清游离单糖中葡萄糖的含量最高，正常人的范围为3.90～6.16mmol/L。目前，医院检验科可以直接通过测生化指标检测葡萄糖浓度，暂时不可以直接检测甘露糖浓度。健康成人血浆中游离甘露糖的浓度范围为20～80μmol/L。甘露糖的含量约本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于鉴定系统性红斑狼疮的生物标记物，其特征在于：所述生物标记物为血清经过柱前1‑苯基‑5‑甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱得到的游离葡萄糖、游离甘露糖及葡萄糖与甘露糖浓度的比值(G/M浓度比)。

【技术特征摘要】
1.用于鉴定系统性红斑狼疮的生物标记物，其特征在于：所述生物标记物为血清经过柱前1-苯基-5-甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱得到的游离葡萄糖、游离甘露糖及葡萄糖与甘露糖浓度的比值(G/M浓度比)。2.根据权利要求1所述的用于鉴定系统性红斑狼疮的生物标记物的定量分析方法，其特征在于：该方法为柱前PMP衍生的高效液相色谱法，包括以下具体步骤：(1)调节pH为7-14：取待检测的血清样品加超纯水于EP管中，加入氢氧化钠，涡旋混匀；(2)PMP衍生：每个样品加入PMP，涡旋混匀，离心后置于烘箱反应；(3)加酸中和反应：将烘箱内的样品取出，放置冷却，每个样品加入盐酸，涡旋混匀；(4)萃取：每管加入有机溶剂，涡旋，离心，移除下层有机溶剂，保留上清；(5)将样品离心，取上清液于装有内插管的棕色上样瓶中，盖紧盖子，离心，待用于高效液相分析；(6)制备甘露糖和葡萄糖的标准曲线；(7)将步骤(5)得到的色谱图与步骤(6)的标准曲线比对并分析计算，确定甘露糖、葡萄糖的浓度以及G/M浓度比。3.根据权利要求2所述的用于鉴定系统性红斑狼疮的生物标记物的定量分析方法，其特征在于：所述高效液相色谱为Agilent1260高效液相系统，AgilentPoroshellEC-C18色谱柱(4.6mm×100mm，2.7μm)，所述步骤(5)中的色谱条件为：检测波长：254nm，带宽4nm；参比波长：350nm，带宽100nm；柱温：37℃；流速：1mL/min；进样体积：20μL；流动相：A相为乙腈，B相为pH为5.5的0.1mol/L乙酸铵-乙酸缓冲溶液。4.根据权利要求3所述的用于鉴定系统性红斑狼疮的生物标记物的定量分析方法，其特征在于：...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽娟，单鸣，刘斌，
申请(专利权)人：青岛大学附属医院，
类型：发明
国别省市：山东,37