【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及一种α-烯醇化酶肿瘤抗原多肽及其肿瘤多肽疫苗及其应用。
技术介绍
1、肺癌是发病率和死亡率最高的癌症之一，其中非小细胞肺癌发病率占肺癌发病率的80％以上且总体预后较差。在非小细胞肺癌肿瘤疫苗临床研究方面，目前还没有开发出一个具有良好效果的肿瘤抗原，严重地阻碍肺癌肿瘤疫苗的研发，使得难以进行基于肿瘤疫苗的联合肿瘤疗法。
2、α-烯醇化酶(α-enloase，eno1)是一种参与丙酮酸合成的代谢酶。eno1在多种肿瘤中过度表达，包括乳腺癌、肺癌、宫颈癌等；研究表明eno1促进癌症侵袭与warburg效应相关，进而导致肿瘤细胞在体内的扩散和侵袭。现阶段普遍认为肿瘤的致病原因受遗传、免疫以及生活方式等因素的影响。肿瘤相关抗原的突变或者异常表达往往会促进肿瘤在体内的生长、扩散和侵袭。然而目前还没有开发出一种针对肺癌的免疫原性强，治疗效果佳的肿瘤相关抗原。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种α-烯醇化酶肿瘤抗原多肽，所述抗原同时包含b细胞表位、th细胞表位和ctl细胞表位序列，能够激发机体免疫应答产生eno1特异性抗体，可用于制备预防和治疗非小细胞肺癌的疫苗。
2、本专利技术提供了一种α-烯醇化酶肿瘤抗原多肽，氨基酸序列如seq id no：1所示。
3、本专利技术提供了一种肿瘤多肽疫苗，活性成分包括所述α-烯醇化酶肿瘤抗原多肽和载体蛋白连接形成的融合蛋白。
4、优选的，所述载体蛋白包括ag8
5、所述ag85b的氨基酸序列如seq id no：2所示。
6、优选的，氨基酸序列如seq id no：3所示。
7、优选的，所述肿瘤多肽疫苗的剂型为注射剂；
8、在所述注射剂中，所述融合蛋白的浓度为0.1～0.6mg/ml。
9、本专利技术提供了一种所述肿瘤多肽疫苗的制备方法，包括以下步骤：
10、将编码α-烯醇化酶肿瘤抗原多肽和载体蛋白连接形成的融合蛋白的基因序列克隆至质粒中，得到重组载体；
11、将所述重组载体转化至表达宿主中，得到重组菌株；
12、利用所述重组菌株重组表达融合蛋白，收集融合蛋白，得到肿瘤多肽疫苗。
13、优选的，所述α-烯醇化酶肿瘤抗原多肽和载体蛋白连接形成的融合蛋白的基因序列如seq id no：4所示。
14、优选的，所述质粒包括pet-30a；
15、所述表达宿主包括原核表达系统和/或真核表达系统。
16、优选的，当所述表达宿主为原核表达系统时，所述重组表达融合蛋白的方法为所述重组菌株在含卡那霉素的lb液体培养基中培养，当od值达到0.6～0.7时，添加iptg进行诱导培养，收集菌体，破碎，分离和纯化融合蛋白。
17、本专利技术提供了所述α-烯醇化酶肿瘤抗原多肽和载体蛋白连接形成的融合蛋白在制备预防和/或治疗肺癌的肿瘤多肽疫苗中的应用；
18、所述载体蛋白为氨基酸序列如seq id no：2所示的ag85b。
19、本专利技术提供了一种α-烯醇化酶肿瘤抗原多肽，氨基酸序列如seq id no：1所示。本专利技术首先以α-烯醇化酶蛋白为对象，分别预测和筛选富含b细胞表位、th细胞表位和ctl细胞表位的多肽片段，将筛选的多肽片段与载体蛋白融合表达免疫动物，来鉴定所述抗原的免疫活性，结果表明，免疫动物的血清中产生大量α-烯醇化酶多肽片段特异性抗体，且诱导细胞免疫，同时还具有安全无副作用的特点。
20、本专利技术还提供了一种肿瘤多肽疫苗，活性成分包括所述α-烯醇化酶肿瘤抗原多肽和载体蛋白连接形成的融合蛋白。实验表明，所述肿瘤多肽疫苗免疫接种肺癌实体瘤的小鼠，结果表明，所述肿瘤多肽疫苗能够通过增强t细胞免疫反应显著抑制小鼠肺癌肿瘤的生长，为目前肺癌的治疗提供新的靶标和途径。本专利技术提供的疫苗安全性高，具有重要的临床价值。
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1.一种α-烯醇化酶肿瘤抗原多肽，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一种肿瘤多肽疫苗，其特征在于，活性成分包括权利要求1所述α-烯醇化酶肿瘤抗原多肽和载体蛋白连接形成的融合蛋白。
3.根据权利要求2所述肿瘤多肽疫苗，其特征在于，所述载体蛋白包括Ag85B；
4.根据权利要求3所述肿瘤多肽疫苗，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。
5.根据权利要求2～4中任意一项所述肿瘤多肽疫苗，其特征在于，所述肿瘤多肽疫苗的剂型为注射剂；
6.一种权利要求2～5中任意一项所述肿瘤多肽疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于，所述α-烯醇化酶肿瘤抗原多肽和载体蛋白连接形成的融合蛋白的基因序列如SEQ ID NO：4所示。
8.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于，所述质粒包括pET-30a；
9.根据权利要求8所述制备方法，其特征在于，当所述表达宿主为原核表达系统时，所述重组表达融合蛋白的方法为所述重组菌株在含卡那霉
10.权利要求1所述α-烯醇化酶肿瘤抗原多肽和载体蛋白连接形成的融合蛋白在制备预防和/或治疗肺癌的肿瘤多肽疫苗中的应用；
...【技术特征摘要】
1.一种α-烯醇化酶肿瘤抗原多肽，其特征在于，氨基酸序列如seq id no：1所示。
2.一种肿瘤多肽疫苗，其特征在于，活性成分包括权利要求1所述α-烯醇化酶肿瘤抗原多肽和载体蛋白连接形成的融合蛋白。
3.根据权利要求2所述肿瘤多肽疫苗，其特征在于，所述载体蛋白包括ag85b；
4.根据权利要求3所述肿瘤多肽疫苗，其特征在于，氨基酸序列如seq id no：3所示。
5.根据权利要求2～4中任意一项所述肿瘤多肽疫苗，其特征在于，所述肿瘤多肽疫苗的剂型为注射剂；
6.一种权利要求2～5中任意一项所述肿瘤多肽疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
<...【专利技术属性】
技术研发人员：王韵阳，刘俸君，于忠杰，王斌，赵毅，黄欢，
申请(专利权)人：青岛大学附属医院，
类型：发明
国别省市：
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