一种磁性纳米材料分离xy精子的方法技术

本发明专利技术公开了一种磁性纳米材料分离XY精子方法，包括：配比精液分离液、人工采集精液、精液检测、精液稀释、XY精子分离、精液保存，其中XY精子分离通过使用直径50纳米、带负电荷的氧化铁核纳米硅材料，利用XY精子本身所带电荷不同，其中Y精子电荷与纳米材料电荷相近，接触后可形成复合体，并在磁力作用下Y精子‑纳米材料复合体与试管壁发生粘附，没有形成复合体的X染色体悬浮于液体中，进而实现对精子进行分离。本发明专利技术达到了精液分离效率高、操作简便、成本低、效果显著，对动物影响小的优点。

A method of separating XY sperm with magnetic nanomaterials

The invention discloses a method for separating XY sperm by magnetic nano-materials, which includes: mixing semen separation fluid, manual collection of semen, semen detection, semen dilution, XY sperm separation and semen preservation. XY sperm separation uses iron oxide nano-silicon material with negative charge and XY sperm has different charge, in which Y sperm charge is different from that of nano-materials. The charge of the material is similar, the complex can be formed after contacting, and Y sperm nano-material complex adheres to the tube wall under magnetic force. X chromosome of the complex is not suspended in the liquid, and sperm can be separated. The invention has the advantages of high semen separation efficiency, simple operation, low cost, remarkable effect and little influence on animals.

【技术实现步骤摘要】
一种磁性纳米材料分离xy精子的方法
本专利技术涉及一种磁性纳米材料分离XY精子的方法，属于繁殖领域。
技术介绍
目前市场上常见的XY精子分离方法主要有流式细胞仪分离和密度梯度离心分离两种方法。其中，流式细胞仪分离面临设备贵、分离慢，密度梯度离心分离效果不佳等问题。市场急需建立省时省力，适于规模化生产和应用且快速、简便、准确的分离体系来促进畜牧行业的发展；通过性别控制，不但可减少性连锁遗传疾病的发生，既帮助具有性连锁隐性遗传病的患者选择后代性别，避免遗传疾病的发生；也可挽救濒临灭绝的珍稀物种；更重要的是可使乳用家畜多产母畜，满足畜牧生产需要，大大提高畜牧生产的经济利益。同时，优质种公畜精液的分离不但能够提高家畜繁殖效率，也能够减少家畜遗传疾病的传播，这在家畜遗传育种中尤为重要。
技术实现思路
本专利技术为了解决上述现有技术中存在问题，提供一种磁性纳米材料分离XY精子的方法，以解决现在XY精子分离设备贵、分离慢的技术问题。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：采集精液离心后使用分离液重新悬浮、稀释，按比例缓慢加入纳米材料使其与Y精子充分混合，静止一定时间等待Y精子与管壁附着后，使用移液枪将悬浮精子移入新离心管中，即为分离的X精子。本专利技术提供了一种磁性纳米材料分离XY精子方法，包括以下步骤：(1)配比精液分离液，所述精液分离液配置质量比为：丙酮酸钠:硫酸镁:链霉素:磷酸二氢钾:青霉素:氯化钾:葡萄糖:碳酸氢钾:氯化钠:氯化钙:BSA：60％的乳酸钠＝3.65:4.93:5:5.04:7.5:34.96:50:210:593.75:60:400：0.342。(2)人工采集精液，采精前向假阴道内加入适量的温水，公畜阴茎勃起后，使用苏打水进行清洗，然后使用清水冲洗干净并擦干，临采精前涂抹润滑剂，根据种公畜阴茎的长短，粗细调节采精筒的压力，采精员站在公畜右后侧，调教师牵引种公畜令其爬跨假台畜，并将阴茎导入采精筒内，待公畜射精后，将采精器集精杯端向下倾斜，同时打开放气阀放气，然后缓慢取下采精器，拿回处理室。(3)精液检测：精液采集后，使用脱脂消毒纱布去除胶状物，用精子全自动分析系统(CASA：Computer-assistedspermanalysis)对其进行检测精液的活率、体积、密度，精液经过低速、常温离心。(4)精液稀释：精液的稀释倍数根据其密度要求来确定，离心后的精子使用精液分离液重新悬浮到100×106个/ml。(5)XY精子分离：使用纳米材料与精子数按3:1进行混合，即3个纳米材料与1个精子混合。(6)精液保存：根据采集精液中精子总数，用精液稀释液保存，用37℃预热稀释液对精液进行稀释，精液的稀释倍数根据其密度及输精要求来确定。另外，根据本专利技术实施例的磁性纳米材料分离XY精子方法还可以具有以下附加技术特征：分离精液体外保存。所述在保证精子活性的同时，可根据分离精子总数，密度及输精使用量要求，用精液低温保存稀释液将精子进行一定密度比例稀释，之后用脱脂棉包裹严密，放置于4度低温保存。这样，通过使用磁性纳米材料、利用XY精子特性对采集精子进行分离后的分离效率明显优于传统的分离方法。上述分离方法能够保证精子的活率和膜完整率，可使乳用家畜多产母畜，满足畜牧生产需要，大大提高畜牧生产的经济利益；本专利技术的分离液配制简单，使用方便，随用随取，省时省力，适于规模化生产和应用。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施例。本专利技术提供了一种磁性纳米材料分离XY精子方法，包括以下步骤：(1)配比精液分离液，所述精液分离液配置质量比为：丙酮酸钠:硫酸镁:链霉素:磷酸二氢钾:青霉素:氯化钾:葡萄糖:碳酸氢钾:氯化钠:氯化钙:BSA：60％的乳酸钠＝3.65:4.93:5:5.04:7.5:34.96:50:210:593.75:60:400：0.342。(2)人工采集精液，采精前向假阴道内加入适量的温水，公畜阴茎勃起后，使用苏打水进行清洗，然后使用清水冲洗干净并擦干，临采精前涂抹润滑剂，根据种公畜阴茎的长短，粗细调节采精筒的压力，采精员站在公畜右后侧，调教师牵引种公畜令其爬跨假台畜，并将阴茎导入采精筒内，待公畜射精后，将采精器集精杯端向下倾斜，同时打开放气阀放气，然后缓慢取下采精器，拿回处理室。(3)精液检测：精液采集后，使用脱脂消毒纱布去除胶状物，用精子全自动分析系统(CASA)对其进行检测精液的活率、体积、密度，精液经过低速、常温离心。(4)精液稀释：精液的稀释倍数根据其密度要求来确定，离心后的精子使用精液分离液重新悬浮到100×106个/ml。(5)XY精子分离：使用纳米材料与精子数按3:1进行混合，即3个纳米材料与1个精子混合。(6)精液保存：根据采集、分离精子数，使用37℃预热精液低温保存稀释液对精液进行稀释，精液的稀释倍数根据其密度及输精要求来确定，之后用脱脂棉包裹严密，放置于4度进行低温保存，并使用精子全自动分析系统(CASA)定时检测不同保存时间的精子活力，然后用SPSS软件进行统计分析。具体的，(1)人工采集精液：使用假阴道方法采集公畜精液，采精前，向假阴道内加入适量的温水，水温为42-45℃。公畜阴茎勃起后，使用苏打水进行清洗，然后使用清水冲洗干净并擦干。临采精前在一次性里衬内，其中深度为1/3处均匀地涂抹润滑剂，根据种公畜阴茎的长短，粗细调节采精筒的压力。采精器准备妥当后，采精员站在公畜右后侧，调教师牵引种公畜令其爬跨假台畜，并将阴茎导入采精筒内，待公畜射精后，将采精器集精杯端向下倾斜，同时打开放气阀放气，然后缓慢取下采精器，拿回处理室。(2)精液质量检测：将采集的精液滤除凝胶部分后置于38℃预热的量筒中，读取精液体积，用精子密度仪测量精子密度，先加入3mL生理盐水于比色皿中，归零，后于精液液面下中部取120μL原精液加入比色皿中，混合均匀，测量密度。同时，精液液面以下中间部位取7μL原精液置于预热的载玻片上，盖上盖玻片，置于带有38℃恒温板的显微镜下用计算机辅助精子活力分析仪(CASA)检测精液活力。每个样本检测5个视野，记录前进式活力和快速前进式活力。检测密度≥1.5×108个/ml，直线前进运动式活力≥0.7的精液用于以下操作。(3)精液稀释：精子500G离心10分钟后弃去上清，根据精子数使用分离液将精子重新悬浮到100×106个/ml。(4)XY精子分离：使用纳米材料与精子数按3:1进行混合，即3个纳米材料与1个精子混合。具体的为重新悬浮精子中添加纳米材料并缓慢混合5分钟，静止30分钟。然后使用移液枪将管中悬浮部分的液体转移到新的离心管中，即为分离的X精子。此外，对分离精液体外保存。根据采集、分离精子数，使用37℃预热精液低温保存稀释液对精液进行稀释，精液的稀释倍数根据其密度及输精要求来确定，之后用脱脂棉包裹严密，放置于4度进行低温保存，并使用精子全自动分析系统(CASA)定时检测不同保存时间的精子活力。所述精液分离液在保证精子活性的同时，可将精子进行一定比例密度稀释。此外，本专利技术还提供了一种精子分离液，具体的，精子分离液，包括：丙酮酸钠、硫酸镁、链霉素、磷酸二氢钾、青霉素、氯化钾、葡萄糖、碳酸氢钾、氯化钠、60％乳酸钠、氯化钙。其中每100ml的精子分离液中，各组分的质量比为：丙酮酸钠:硫酸镁:链霉素:本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种磁性纳米材料分离XY精子方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配比精液分离液，所述精液分离液配置质量比为：丙酮酸钠:硫酸镁:链霉素:磷酸二氢钾:青霉素:氯化钾:葡萄糖:碳酸氢钾:氯化钠:氯化钙:BSA：60％的乳酸钠＝3.65:4.93:5:5.04:7.5:34.96:50:210:593.75:60:400：0.342；(2)人工采集精液，采精前向假阴道内加入适量的温水，公畜阴茎勃起后，使用苏打水进行清洗，然后使用清水冲洗干净并擦干，临采精前涂抹润滑剂，根据种公畜阴茎的长短，粗细调节采精筒的压力，采精员站在公畜右后侧，调教师牵引种公畜令其爬跨假台畜，并将阴茎导入采精筒内，待公畜射精后，将采精器集精杯端向下倾斜，同时打开放气阀放气，然后缓慢取下采精器，拿回处理室；(3)精液检测：精液采集后，使用脱脂消毒纱布去除胶状物，用精子全自动分析系统(CASA)对其进行检测精液的活率、体积、密度，精液经过低速、常温离心；(4)精液稀释：精液的稀释倍数根据其密度要求来确定，离心后的精子使用精液分离液重新悬浮到100×106个/ml；(5)X Y精子分离：使用纳米材料与精子数按3:1进行混合，即3个纳米材料与1个精子混合；(6)精液保存：根据采集精液中精子总数，用精液稀释液低温保存，用37℃预热后对精液进行稀释，精液的稀释倍数根据其密度及输精要求来确定，之后用脱脂棉包裹严密，放置于4度低温保存，定时检测不同保存时间的精子活力，检测使用精子全自动分析系统(CASA)，再用SPSS软件进行统计分析。...

【技术特征摘要】
1.一种磁性纳米材料分离XY精子方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配比精液分离液，所述精液分离液配置质量比为：丙酮酸钠:硫酸镁:链霉素:磷酸二氢钾:青霉素:氯化钾:葡萄糖:碳酸氢钾:氯化钠:氯化钙:BSA：60％的乳酸钠＝3.65:4.93:5:5.04:7.5:34.96:50:210:593.75:60:400：0.342；(2)人工采集精液，采精前向假阴道内加入适量的温水，公畜阴茎勃起后，使用苏打水进行清洗，然后使用清水冲洗干净并擦干，临采精前涂抹润滑剂，根据种公畜阴茎的长短，粗细调节采精筒的压力，采精员站在公畜右后侧，调教师牵引种公畜令其爬跨假台畜，并将阴茎导入采精筒内，待公畜射精后，将采精器集精杯端向下倾斜，同时打开放气阀放气，然后缓慢取下采精器，拿回处理室；(3)精液检测：精液采集后，使用脱脂消毒纱布去除胶状物，用精子全自动分析系统(CASA)对其进行检测精液的活率、体积、密度，精液经过低速、常温离心；(4)精液稀释：精液的稀释倍数根据其密度要求来确定，离心...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴帅帅，刘冰，于杰，嵇传良，周祥山，
申请(专利权)人：东阿阿胶股份有限公司，山东东阿黑毛驴牧业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37