The invention discloses the application of a stable expressed protein NW_006884764 1 in the genome of CHO cells. The site used for stable expression of protein in the genome of CHO cells is located at the 6645th base of the CHO cell gene NW_006884764.1, and the target sequence of 5'NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGG3'can be identified by CRISPR/Cas9 technology within the range of 66571_66691 near the site. The invention applies for a fixed position in the genome of CHO cells, introducing different protein genes and stably expressing them.
【技术实现步骤摘要】
一种CHO细胞基因组内NW_006884764-1稳定表达蛋白质的应用
本专利技术涉及基因
，尤其是涉及一种用于稳定表达蛋白质的CHO细胞重组基因。
技术介绍
中国仓鼠卵巢细胞(ChineseHamsterOvarycell,CHO)作为生物制药领域的主力细胞系，已经被开发出许多不同种类的CHO细胞系，包括可以用来扩大基因拷贝数的细胞系。然而，转基因拷贝数的增多与目的蛋白质产率提高并不是明确的正相关关系。且即使蛋白质表达增多，多数CHO细胞的表达水平不稳定。当前普遍使用的构建稳定转染细胞的方法耗时耗力，主要是因为需要重复大量的单克隆筛选过程，所以当前在细胞系构建领域普遍期待可以开发出一种能在短时间内，获得高表达及稳定表达的细胞的方法，并且能够确保构建出来的重组细胞系与传统方法相比，有相同的质量水平，以确保监管机构的批准。传统构建外源蛋白质表达细胞系的方法是通过外源基因随机整合到细胞基因组上，再经过系列的高表达单克隆细胞筛选，获得外源蛋白质高表达细胞系。由于位点效应差异的多样性，随机整合产生的重组细胞表达水平各异，因此需要后期花费很长的时间和很多的步骤，用于挑...
【技术保护点】
1.一种CHO细胞基因组内某位点稳定表达蛋白质的应用，其特征在于，所述CHO细胞基因组内用于稳定表达蛋白质的位点位于CHO细胞基因NW_006884764.1的第66645碱基处；所述位点附近66571‑66691范围内可被CRISPR/Cas9技术识别的5'NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGG3'为靶序列。
【技术特征摘要】
1.一种CHO细胞基因组内某位点稳定表达蛋白质的应用，其特征在于，所述CHO细胞基因组内用于稳定表达蛋白质的位点位于CHO细胞基因NW_006884764.1的第66645碱基处；所述位点附近66571-66691范围内可被CRISPR/Cas9技术识别的5'NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGG3'为靶序列。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述蛋白质为分子量小于160KDa的蛋白质。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述蛋白质为多肽、功能性蛋白质、抗体、融合蛋白质中的一种。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述靶序列为CHO细胞基因NW_006884764.1的第66645碱基处附近第66619-66641碱基处；所述靶序列为5’-AGCAGTGATCATTTATGCTGAGG-3’。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述靶序列为5’-AT-TAAGTTGGCACAGAGGGCTGG-3’。6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述靶序列为5’-ATCTGAAAAACAAATCCATATGG-3’。7....
【专利技术属性】
技术研发人员：金坚，李华钟，周松涛，陈蕴，段作营，龚笑海，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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