The invention discloses a BTLA which resists tumor immunosuppressive environment.
【技术实现步骤摘要】
一种抵抗肿瘤免疫抑制环境的BTLA-/-T淋巴细胞的制备方法与应用
本专利技术涉及生命科学与医学的交叉
，特别涉及基因编辑的免疫细胞，具体是指一种抵抗肿瘤免疫抑制环境的BTLA-/-T淋巴细胞的制备方法与应用。
技术介绍
T淋巴细胞在体外免疫系统能够识别肿瘤抗原并杀伤肿瘤细胞，T淋巴细胞本身应是人体内抗肿瘤的“斗士”，但因各种原因，导致免疫耐受和逃逸，在体内不能有效地杀伤肿瘤细胞。一个成型的肿瘤是一个复杂的组织，它不仅由肿瘤细胞组成，还包括也基质细胞，炎症细胞，脉管系统和细胞外基质，所有这些总和定义为肿瘤微环境。免疫治疗的抗性机制包括如下：(1)抑制性微环境或缺乏抗原刺激/协同刺激的免疫细胞，尤其是T细胞，可能会促使肿瘤的生长和免疫逃逸；(2)生物屏障对肿瘤组织的包裹可导致免疫细胞迁移进肿瘤部位的数量不足；(3)有限的抗原特异性T细胞群短暂激活或耗竭未能抑制肿瘤生长。B及T淋巴细胞弱化因子(BTLA)是免疫协同刺激分子中的一种免疫抑制性受体，其功能是通过传递抑制信号阻止淋巴细胞的活化。肿瘤细胞通过表达HVEM(herpesvirusentrymediator...
【技术保护点】
1.一种抵抗肿瘤免疫抑制环境的BTLA‑/‑T淋巴细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1.1设计并合成BTLA‑sgRNA序列；1.2构建BTLA‑sgRNA‑Cas9质粒，质粒含EF‑1α启动子驱动的人源化CAS9表达元件、人U6启动子驱动BTLA‑sgRNA表达元件以及PGK启动子驱动的PUROMYCIN抗性基因表达元件；1.3质粒的合成、验证和扩增；1.4将外周血细胞制备得到淋巴细胞和单核细胞；1.5制备得到CD3+T淋巴细胞；1.6将质粒转入CD3+T淋巴细胞；1.7将细胞放入含有2000IU/mL的IFN‑γ的X‑VIVO15培养基中，37℃，5％二氧化碳培...
【技术特征摘要】
1.一种抵抗肿瘤免疫抑制环境的BTLA-/-T淋巴细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1.1设计并合成BTLA-sgRNA序列；1.2构建BTLA-sgRNA-Cas9质粒，质粒含EF-1α启动子驱动的人源化CAS9表达元件、人U6启动子驱动BTLA-sgRNA表达元件以及PGK启动子驱动的PUROMYCIN抗性基因表达元件；1.3质粒的合成、验证和扩增；1.4将外周血细胞制备得到淋巴细胞和单核细胞；1.5制备得到CD3+T淋巴细胞；1.6将质粒转入CD3+T淋巴细胞；1.7将细胞放入含有2000IU/mL的IFN-γ的X-VIVO15培养基中，37℃，5％二氧化碳培养24h；1.8然后加入20μg/mL的CD3单抗、500IU/mLIL-2、50ng/mLIL-1α、100ng/mLIL-4、2000IU/mLGM-CSF、5μg/mLPuromycin；1.9培养3～5天后，添加500IU/mLIL-2的新鲜培养基，细胞浓度保持在1～2x106/mL；每隔2～3天对细胞进行计数，并添加含500IU/mLIL-2的新鲜培养基，继续培养10～15天，收获细胞，即为BTLA-/-T淋巴细胞制剂。2.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：贾远航，赵伟，
申请(专利权)人：北京中诚华科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11
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