文冠果扦插枝条及其愈伤组织的石蜡制片方法技术

本发明专利技术公开了一种文冠果扦插枝条及其愈伤组织的石蜡制片方法，包括：取材固定，冲洗，软化，脱水，透明，浸蜡和包埋，切片、粘片和展片，脱蜡和染色，以及封固；冲洗的具体方法为：将取材固定后的茎段用50％的乙醇反复冲洗三次；软化的具体方法为：将冲洗后的茎段依次在质量分数为5％的氢氟酸、50℃的质量分数为50％的丙三醇和软化液中浸泡处理一定时间；其中，软化液为质量分数为50％的酒精与质量分数为100％丙三醇等体积混合。本发明专利技术方法，易操作、结果稳定性好、便于做大量的基础研究、切片完整、厚度均匀、组织结构清晰、染色对比度好、细胞形态完整、获得的文冠果愈伤组织切片具有很好的连续性，可永久保存。

Paraffin Sectioning Method for Cutting Branches and Callus of Xanthoceras sorbifolia

The invention discloses a paraffin slicing method for Xanthoceras sorbifolia cuttings and their callus, which includes: fixing, washing, softening, dehydration, transparency, wax dipping and embedding, slicing, sticking and displaying, dewaxing and dyeing, and sealing; the specific method of flushing is: flushing the fixed stem segments of Xanthoceras sorbifolia for three times with 50% ethanol; and the specific method of softening is as follows: After washing, stem segments were soaked in hydrofluoric acid with 5% mass fraction, glycerol with 50% mass fraction at 50 C and softening solution for a certain period of time. Among them, the softening solution consisted of alcohol with 50% mass fraction and glycerol with 100% mass fraction. The method has the advantages of easy operation, good stability of results, easy to do a large number of basic research, complete section, uniform thickness, clear structure, good dyeing contrast, complete cell morphology, good continuity of obtained callus sections of Xanthoceras sorbifolia, and permanent preservation.

【技术实现步骤摘要】
文冠果扦插枝条及其愈伤组织的石蜡制片方法
本专利技术涉及石蜡切片
，特别涉及一种文冠果扦插枝条及其愈伤组织的石蜡制片方法。
技术介绍
石蜡制片是观察植物组织结构的重要而最常用的一种方法，尤其是观察植物愈伤组织的重要技术手段之一，石蜡制片的主要优点，容易操作，切片均匀且极薄、蜡带的连续性易于做连续切片、可永久保存。文冠果(Xanthocerassorborifoliabunge)属无患子科文冠果属，落叶乔木或大灌木，其扦插繁殖属于难生根树种，利用石蜡制片的方法观察文冠果生根过程中愈伤组织和插穗基部茎组织结构变化，从理论上阐明不定根的发生部位及不定根的发育的机理和过程，为开发这类具有地方特色的种质资源，提供理论和实践指导。文冠果是高度木质化的材料，然而产生的愈伤组织属于较为幼嫩的部位，要想获得二者均完整的组织切片极其困难。高度木质化的组织试剂进入比较困难，但又不能以单纯延长试剂浸泡时间来达到目的，因为浸泡时间过长，容易造成愈伤组织发生形变和撕裂。浸泡时间过短往往脱水不彻底，制作过程中经常出现切片空洞的问题，浸泡时间过长容易造成材料变硬，要想获得完整的组织结构相当困难。鉴于上述描述，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种文冠果扦插枝条及其愈伤组织的石蜡制片方法，包括：取材固定，冲洗，软化，脱水，透明，浸蜡和包埋，切片、粘片和展片，脱蜡和染色，以及封固；其特征在于，所述冲洗的具体方法为：将取材固定后的茎段用50％的乙醇反复冲洗三次，一次冲洗时间30‑60秒，其中，茎段取自含有愈伤组织的文冠果扦插枝条；所述软化的具体方法为：将冲洗后的茎段在质量分数为5％的氢氟酸中浸泡处理3～5小时，之后转入50℃的质量分数为50％的丙三醇中浸泡4～6小时，最后转入软化液中浸泡24～48小时；其中，所述软化液为质量分数为50％的酒精与质量分数为100％丙三醇等体积混合。

【技术特征摘要】
1.一种文冠果扦插枝条及其愈伤组织的石蜡制片方法，包括：取材固定，冲洗，软化，脱水，透明，浸蜡和包埋，切片、粘片和展片，脱蜡和染色，以及封固；其特征在于，所述冲洗的具体方法为：将取材固定后的茎段用50％的乙醇反复冲洗三次，一次冲洗时间30-60秒，其中，茎段取自含有愈伤组织的文冠果扦插枝条；所述软化的具体方法为：将冲洗后的茎段在质量分数为5％的氢氟酸中浸泡处理3～5小时，之后转入50℃的质量分数为50％的丙三醇中浸泡4～6小时，最后转入软化液中浸泡24～48小时；其中，所述软化液为质量分数为50％的酒精与质量分数为100％丙三醇等体积混合。2.如权利要求1所述的文冠果扦插枝条及其愈伤组织的石蜡制片方法，其特征在于，所述冲洗的具体方法为：将取材固定后的茎段用50％的乙醇反复冲洗三次，一次冲洗时间50-60秒，其中，茎段取自含有愈伤组织的文冠果扦插枝条；所述软化的具体方法为：将冲洗后的茎段在质量分数为5％的氢氟酸中浸泡处理4.5～5小时，之后转入50℃的质量分数为50％的丙三醇中浸泡4～4.5小时，最后转入软化液中浸泡24～28小时；其中，所述软化液为质量分数为50％的酒精与质量分数为100％丙三醇等体积混合。3.如权利要求1所述的文冠果扦插枝条及其愈伤组织的石蜡制片方法，其特征在于，所述取材固定的具体方法为：自文冠果扦插枝条上切割含有愈伤组织的茎段，茎段的长度为0.4-0.6cm；将所述茎段浸于固定液中后抽真空至0.5～0.8个大气压后保持5分钟，再于4℃下静置24小时；所述固定液为：将质量分数为38％的甲醛、质量分数为100％的冰醋酸、质量分数为100％的丙三醇、质量分数为50％的乙醇按照体积比1∶1∶1∶12～1∶1∶1∶17充分混合后制得。4.如权利要求1所述的文冠果扦插枝条及其愈伤组织的石蜡制片方法，其特征在于，所述取材固定的具体方法为：自文冠果扦插枝条上切割含有愈伤组织的茎段，茎段的长度为0.5cm；将所述茎段浸于固定液中后抽真空至0.5～0.6个大气压后保持5分钟，再于4℃下静置24小时；所述固定液为：将质量分数为38％的甲醛、质量分数为100％的冰醋酸、质量分数为100％的丙三醇、质量分数为50％的乙醇按照体积比1∶1∶1∶16～1∶1∶1∶17充分混合后制得。5.如权利要求1所述的文冠果扦插枝条及其愈伤组织的石蜡制片方法，其特征在于，所述脱水的具体方法为：将经软化的茎段首先经质量分数为50％的乙醇反复冲洗三次；将经冲洗三次后的茎段转入质量分数为50％乙醇浸泡脱水60～120分钟；之后将所述茎段转入质量分数为70％乙醇浸泡脱水60～90分钟；之后将所述茎段转入质量分数为85％乙醇浸泡脱水60～80分钟；之后将所述茎段转入质量分数为95％乙醇浸泡脱水50～60分钟；最后将所述茎段依次转入质量分数为100％乙醇浸泡脱水2次，每次浸泡脱水30～40分钟，且2次浸泡脱水之间间隔5～10秒。6.如权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：宗建伟，杨雨华，杨军，王鹏，张馥郁，左金淼，胡华锋，程倩，李艳，刘策，王帅博，
申请(专利权)人：河南牧业经济学院，
类型：发明
国别省市：河南,41