本发明专利技术公开了一种UHPLC法检测复方甘草片中化学成分的方法，所述的UHPLC法检测复方甘草片中化学成分的方法包括检测复方甘草片化学成分和检测复方甘草片血浆代谢成分。本发明专利技术检测方法运行时间短，且对复方甘草片样品中的众多组分具有良好的分离度。进一步，该方法具有良好的精密度、重复性和稳定性，适用于复方甘草片的化学成分检测，且同时适用于复方甘草片血浆代谢成分的检测。能够对复方甘草片样品中的成分进行迅速、全面地检测，对复方甘草片样品中的众多组分具有良好的分离度；尤其是能够检测到第二供试品溶液中复杂的微量的入血成分，且分离度良好。因此，采用本发明专利技术的方法进行检测，有利于对复方甘草片样品中的组分进行全面阐述。
【技术实现步骤摘要】
一种UHPLC法检测复方甘草片中化学成分的方法
本专利技术属于医药
，进一步属于医药检测
，具体涉及一种UHPLC法检测复方甘草片中化学成分的方法。
技术介绍
复方甘草片是由甘草浸膏粉、阿片粉、樟脑、八角茴香油、苯甲酸钠等组成的复方制剂，收载于中国药典2015年版二部，为保护性祛痰镇咳药，临床上用于一般性咳嗽及上呼吸道感染、急性气管炎初期等的咳嗽治疗，能有效缓解症状。现代研究表明，复方甘草片中的主要成分是生物碱类、黄酮类及萜类成分，能够预防全身麻醉气管插管后咽喉痛和咳嗽的作用，也可能通过调节树突细胞的成熟状态减轻了气道的反应，从而达到镇咳祛痰的作用。建立合适的化学成分的检测方法是对药物进行质量控制的重要方面。目前已公开了多种复方甘草片的化学成分的检测方法，但尚未见针对复方甘草片的血浆中代谢物的检测方法。关于复方甘草片的化学成分的检测方法，孙国祥等公开了用HPLC指纹图谱对复方甘草片实施全质量控制方法（HPLC指纹图谱对复方甘草片实施全质量控制方法，中南药学，2008年03期），采用双定性双定量相似度作为评价指标,建立了复方甘草片HPLC指纹图谱的全质量控制方法。该方法采用RP-HPLC法以CenturySILC18BDS柱(200mm×4.6mm,5μm);以色谱指纹图谱相对指数Fr为指标优化选择指纹图谱检测条件,确定流动相为1%醋酸水-1%醋酸乙腈低压梯度洗脱,紫外检测波长:254nm,柱温:(30.00±0.15)℃,进样量:5μL。该方法所建立HPLC指纹图谱具有较好的精密度和重现性,适用于复方甘草片的质量控制，并认为双定性双定量相似度法是宏观定性定量评价中药制剂质量的最合理、最客观的指纹图谱评价技术。杨红娟等公开了RP-HPLC同时测定复方甘草片中4个成分含量的方法（杨红娟等，RP-HPLC同时测定复方甘草片中4个成分的含量，药物分析杂志，2013年01期），其采用高效液相色谱法同时测定复方甘草片中吗啡、磷酸可待因、甘草苷和甘草酸的含量，具体采用PhenomenexLuna-C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.02mol·L-1磷酸二氢钾溶液(磷酸调pH至4.0)为流动相,梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,检测波长为220nm(0～23min,检测吗啡和可待因)、254nm(23～50min,检测甘草苷和甘草酸),柱温为35℃。赵月然等公开了HPLC法同时测定复方甘草片中甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸的方法（HPLC法同时测定复方甘草片中甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸，中成药，2014年04期）。该方法采用DikmaDiamonsilC18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液,梯度洗脱;检测波长为276nm(0~16min)、360nm(16~24min)、276nm(24~28min)、254nm(28~38min);体积流量1.0mL/min;柱温30℃。建立合适的化学成分的检测方法对于药物的质量控制、药理、药效、体内代谢及药效物质基础等方面研究和应用具有重要意义。现有的复方甘草片的化学成分检测方法多为高效液相色谱法，保留时间较长，至少需要四十分钟，甚至一百分钟。另外，现有方法多局限于对复方甘草片中一个或数个指标成分的含量测定，难以对复方甘草片中的化学成分进行全面阐述。此外，现有技术不能对复方甘草片的血浆代谢成分进行检测。因此开发一种能解决上述技术问题的检测方法是非常必要的。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种UHPLC法检测复方甘草片样品中化学成分的方法。本专利技术的目的是这样实现的，所述的UHPLC法检测复方甘草片中化学成分的方法包括检测复方甘草片化学成分和检测复方甘草片血浆代谢成分，具体包括以下步骤：A、供试品溶液制备：取复方甘草片进行制备得到第一供试品溶液；取复方甘草片代谢成分的血浆进行制备得到第二供试品溶液；制备方法具体为：1）第一供试品溶液：取复方甘草片，粉碎，加入复方甘草片重量10~40倍的有机溶剂提取，提取液过滤，滤液为第一供试品溶液；2）第二供试品溶液：将含有复方甘草片代谢成分的血浆上活化后的固相萃取柱，依次用水和甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，挥干，加入体积百分数10%的乙腈水溶液复溶，涡旋3~5min后离心10~30min，取上清液为第二供试品溶液；B、对照品溶液制备：对照品溶液为甘草素、异甘草素、甘草次酸、甘草苷、异甘草苷、甘草查尔酮B、芹糖甘草苷、甘草查尔酮A、光甘草定、芒柄花苷、次甘草查尔酮、芒柄花素和樟脑对照品中的一种或几种；制备方法是将各对照品精密称定，加溶剂制成每种对照品浓度为10~500μg•mL-1的对照品溶液；所述的溶剂为体积百分数50~100%甲醇水溶液、50~100%乙醇水溶液或50~100%乙腈水溶液；C、UHPLC测定：UHPLC色谱条件如下：色谱柱：C18柱；流动相：0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）；梯度洗脱：0min，5%B；10min，42%B；15min，46%B；20min，55%B；25min，65%B；30min，100%B。流速为0.3mL·min-1；进样量0.5-20μL。本专利技术检测方法运行时间短，且对复方甘草片样品中的众多组分具有良好的分离度。进一步，该方法具有良好的精密度、重复性和稳定性，适用于复方甘草片的化学成分检测，且同时适用于复方甘草片血浆代谢成分的检测。能够对复方甘草片样品中的成分进行迅速、全面地检测，对复方甘草片样品中的众多组分具有良好的分离度；尤其是能够检测到第二供试品溶液中复杂的微量的入血成分，且分离度良好。因此，采用本专利技术的方法进行检测，有利于对复方甘草片样品中的组分进行全面阐述。采用本专利技术UHPLC法能够将复方甘草片样品中的众多组分有效分离开来，而进一步采用上述质谱条件能够对UHPLC法分离的复方甘草片样品中的组分进行有效检测，检测灵敏度高，且获得的成分多级信息丰富，能够实现对成分进行准确地分析鉴定。采用本专利技术的UHPLC-MS检测方法，能够鉴定复方甘草片样品中的50个以上的化合物。在一个实施方式中，对第一供试品溶液进行检测，共鉴定了55个化合物，包括42个黄酮类成分、9个萜类成分以及4个生物碱类成分。在另一个实施方式中，对第二供试品溶液进行检测，共鉴定了26个化合物，包括20个原型成分和6个代谢产物。附图说明图1为正离子模式下UHPLC-LTQ-Orbitrap分析复方甘草片总离子流图：其中，A为13个对照品溶液，B为复方甘草片，C为血浆样品。具体实施方式下面结合实施例和附图对本专利技术作进一步的说明，但不以任何方式对本专利技术加以限制，基于本专利技术教导所作的任何变换或替换，均属于本专利技术的保护范围。所述的UHPLC法检测复方甘草片中化学成分的方法包括检测复方甘草片化学成分和检测复方甘草片血浆代谢成分，具体包括以下步骤：A、供试品溶液制备：取复方甘草片进行制备得到第一供试品溶液；取复方甘草片代谢成分的血浆进行制备得到第二供试品溶液；制备方法具体为：1）第一供试品溶液：取复方甘草片，粉碎，加入复方甘草片重量10~40倍的有机溶剂提取，提取液过滤，滤液为第一供试品溶液；2）第二供试品溶液：将含有复方甘草片代谢成分的血浆上活化后的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种UHPLC法检测复方甘草片中化学成分的方法，其特征在于所述的UHPLC法检测复方甘草片中化学成分的方法包括检测复方甘草片化学成分和检测复方甘草片血浆代谢成分，具体包括以下步骤：A、供试品溶液制备：取复方甘草片进行制备得到第一供试品溶液；取复方甘草片代谢成分的血浆进行制备得到第二供试品溶液；制备方法具体为：1）第一供试品溶液：取复方甘草片，粉碎，加入复方甘草片重量10~40倍的有机溶剂提取，提取液过滤，滤液为第一供试品溶液；2）第二供试品溶液：将含有复方甘草片代谢成分的血浆上活化后的固相萃取柱，依次用水和甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，挥干，加入体积百分数10%的乙腈水溶液复溶，涡旋3~5min后离心10~30min，取上清液为第二供试品溶液；B、对照品溶液制备：对照品溶液为甘草素、异甘草素、甘草次酸、甘草苷、异甘草苷、甘草查尔酮B、芹糖甘草苷、甘草查尔酮A、光甘草定、芒柄花苷、次甘草查尔酮、芒柄花素和樟脑对照品中的一种或几种；制备方法是将各对照品精密称定，加溶剂制成每种对照品浓度为10~500μg•mL‑1的对照品溶液；所述的溶剂为体积百分数50~100%甲醇水溶液、50~100%乙醇水溶液或50~100%乙腈水溶液；C、UHPLC测定：UHPLC色谱条件如下：色谱柱： C18柱；流动相：0.1%甲酸水溶液（A）‑乙腈（B）；梯度洗脱：0 min，5% B；10 min，42% B；15 min，46% B；20 min，55% B；25 min，65% B；30 min，100% B，流速为0.3 mL·min‑1；进样量0.5‑20μL。...
【技术特征摘要】
1.一种UHPLC法检测复方甘草片中化学成分的方法，其特征在于所述的UHPLC法检测复方甘草片中化学成分的方法包括检测复方甘草片化学成分和检测复方甘草片血浆代谢成分，具体包括以下步骤：A、供试品溶液制备：取复方甘草片进行制备得到第一供试品溶液；取复方甘草片代谢成分的血浆进行制备得到第二供试品溶液；制备方法具体为：1）第一供试品溶液：取复方甘草片，粉碎，加入复方甘草片重量10~40倍的有机溶剂提取，提取液过滤，滤液为第一供试品溶液；2）第二供试品溶液：将含有复方甘草片代谢成分的血浆上活化后的固相萃取柱，依次用水和甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，挥干，加入体积百分数10%的乙腈水溶液复溶，涡旋3~5min后离心10~30min，取上清液为第二供试品溶液；B、对照品溶液制备：对照品溶液为甘草素、异甘草素、甘草次酸、甘草苷、异甘草苷、甘草查尔酮B、芹糖甘草苷、甘草查尔酮A、光甘草定、芒柄花苷、次甘草查尔酮、芒柄花素和樟脑对照品中的一种或几种；制备方法是将各对照品精密称定，加溶剂制成每种对照品浓度为10~500μg•mL-1的对照品溶液；所述的溶剂为体积百分数50~100%甲醇水溶液、50~100%乙醇水溶液或50~100%乙腈水溶液；C、UHPLC测定：UHPLC色谱条件如下：色谱柱：C18柱；流动相：0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）；梯度洗脱：0min，5%B；10min，42%B；15min，46%B；20min，55%B；25min，65%B；30min，100%B，流速为0.3mL·min-1；进样量0.5-20μL。2.根据权利要求1所述的UHPLC法检测复方甘草片中化学成分的方法，其特征在于A步骤1）中所述的有机溶剂为体积百分数50~100%甲醇水溶液、50~100%乙醇水溶液或50~100%乙腈水溶液。3.根据权利要求1所述的UHPLC法检测复方甘草片中化学成分的方法，其特征在于A步骤1）中所述的有机溶剂为体积百分数60~80%甲...
【专利技术属性】
技术研发人员：李宁，高小惠，王洪静，段国蕾，董艳萍，
申请(专利权)人：昆药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：云南,53
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