本发明专利技术公开了一种鉴定香炉山鸡隐性白羽和有色羽纯合的引物及应用，所述引物为2对共3条，2条上游引物分别为F1、F2，1条下游引物R，上游引物F1与下游引物R为TYR基因ALV插入序列引物,上游引物F2与下游引物R为TYR基因非插入序列引物，其中，上游引物的引物序列F1为：5'CGTTAAGCGAGACGGATGAGG 3'，上游引物F2的引物序列为：5'AAGTTGTTGGAGGCTGGGTAT 3'；下游引物R的引物序列为:5'AGGCACAAGGAGTGGGACAGC 3'。该引物是用于鉴别香炉山鸡隐性白羽纯合和有色羽纯合。本发明专利技术的引物具有能够快速、准确鉴定香炉山鸡有色羽纯合、隐性纯合个体的特点。
【技术实现步骤摘要】
一种鉴定香炉山鸡隐性白羽和有色羽纯合的引物及其应用
本专利技术涉及一种鉴定香炉山鸡隐性白羽和有色羽纯合的引物及其应用，属于基因分子鉴定
技术介绍
香炉山鸡系凯里地区苗族人民从中原迁徙到西南后，在香炉山当地长期封闭的自然条件下形成的原始鸡种。母鸡主翼羽有片状黑色羽毛，尾部有黑色羽，大部分羽毛似葵花状，公鸡背部羽毛为棕红色，尾羽黑色并带绿色光泽。在香炉山鸡育种中，群体中有白羽鸡出现，育种发现它是一种隐性白羽，由于其与有色羽纯合鸡杂交不改变羽色，因此导致育种中淘汰比例大，选育进展慢。在中国，消费者对羽色有一定偏好，因而在香炉山鸡的纯种选育中建立隐性白羽纯合与有色羽纯合群尤为重要。常规鉴定隐性白羽纯合与有色羽纯合的方法是利用测交手段，将有色羽个体与隐性白羽纯合鸡进行交配观察后代个体羽色情况。一般用白羽母鸡与有色羽公鸡交配，要连续几个世代淘汰杂合子公鸡，来逐步降低群体内杂合子基因型频率，常常耗费数年也不能彻底淘汰杂合子个体，因此有必要建立纯合群。分子标记辅助育种较之常规育种方法，成本低廉、准确度高、省时省力，能有效缩短育种周期，加快纯种育种进展。隐性白羽形成的分子机制是：隐性白羽的形成是由于TYR（络氨酸酶基因）第四内含子区域插入了一段长7.7kp的内源性白血病病毒ALV序列，导致TYR基因转录物中缺少第五外显子编码的跨膜结构域无法正常转录。从而使络氨酸酶失去正常功能活性，致使无法合成黑色素，导致鸡白羽的形成。许多研究报告表明TYR基因第四内含子中ALV插入序列导致白羽的基因型cc（隐性白羽）能够作为隐性白羽的有效分子遗传标记。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种鉴定香炉山鸡隐性白羽和有色羽纯合的引物及其应用。本专利技术的引物具有能够快速、准确鉴定香炉山鸡有色羽纯合、隐性纯合个体的特点。本专利技术的技术方案：一种鉴定香炉山鸡隐性白羽和有色羽纯合的引物，所述引物为2对共3条，2条上游引物分别为F1、F2，1条下游引物R，上游引物F1与下游引物R为TYR基因ALV插入序列引物,上游引物F2与下游引物R为TYR基因非插入序列引物，其中，上游引物的引物序列F1为：5'CGTTAAGCGAGACGGATGAGG3'，上游引物F2的引物序列为：5'AAGTTGTTGGAGGCTGGGTAT3'；下游引物R的引物序列为:5'AGGCACAAGGAGTGGGACAGC3'。一种根据权利要求1所述的鉴定香炉山鸡隐性白羽和有色羽纯合的引物的应用，是用于鉴别香炉山鸡隐性白羽纯合和有色羽纯合。前述的鉴定香炉山鸡隐性白羽和有色羽纯合的引物的应用，其应用方法包括如下步骤：1）以待检测鸡的基因组DNA为模板，用F1引物和R引物扩增TYR基因白羽等位基因c,用F2引物和R引物扩增TYR基因有色羽等位基因C；2）通过引物组在同一PCR体系进行扩增反应，获得PCR扩增产物，根据PCR扩增产物在120V电压的0.5-1.5%琼脂糖凝胶中电泳20-40分钟；3）结束后,用凝胶成像系统对琼脂糖凝胶拍照,得出电泳图谱结果进行判型：如果只能够得到785bp的条带，则待测鸡的等位基因型为cc型隐性白羽纯合型；如果只能够得到1060bp的条带，则待测鸡的等位基因型为CC有色羽纯合型；如果同时得到785bp和1060bp的两条带，则待测鸡的等位基因型为Cc有色羽杂合型。前述的鉴定香炉山鸡隐性白羽和有色羽纯合的引物的应用，=步骤2）中，所述PCR扩增反应条件为：95℃预变性5min，95℃变性45s，65℃退火45s，72℃延伸35s，35个循环，72℃终延伸10min，4℃保存。前述的鉴定香炉山鸡隐性白羽和有色羽纯合的引物的应用，=步骤2）中，所述PCR扩增反应的体系为上游引物F12μL，上游引物F22μL；下游引物R2μL，2×PCRTaqmix12μL，ddH2O10μL，模板DNA2μL，总反应为30μL体系。前述的鉴定香炉山鸡隐性白羽和有色羽纯合的引物的应用，步骤2）中，所述琼脂糖凝胶为1%的琼脂糖凝胶；所述电泳的时间为30分钟。本专利技术的有益效果本专利技术通过引物设计合成的2对3条引物进行多重PCR扩增，对TYR基因白羽等位基因与有色羽等位基因进行扩增，从实验中得到鸡TYR基因隐性白羽纯合与有色羽纯合。并通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物进行鉴定待测鸡TYR基因隐性白羽纯合和有色羽纯合。通过这样的方法可以快速、准确的鉴别香炉山鸡隐性白羽纯合和有色羽纯合。因此，TYR基因隐性白羽基因型cc和有色羽基因型CC能够作为香炉山鸡隐性纯合和有色羽纯合的有效分子遗传标记。附图说明附图1为本专利技术实施例4得出电泳图谱；附图2为含插入序列测序图；附图3为未含插入序列测序图。附图4为TYR基因有色羽等位基因扩增产物测序结果与目的片段序列对比；附图5为TYR基因隐性白羽等位基因扩增产物测序结果与目的片段序列对比。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的说明，但并不作为对本专利技术限制的依据。本专利技术的实施例实施例1：一种鉴定香炉山鸡隐性白羽和有色羽纯合的引物，所述引物为2对共3条，2条上游引物分别为F1、F2，1条下游引物R，上游引物F1与下游引物R为TYR基因ALV插入序列引物,上游引物F2与下游引物R为TYR基因非插入序列引物，其中，上游引物的引物序列F1为：5'CGTTAAGCGAGACGGATGAGG3'，上游引物F2的引物序列为：5'AAGTTGTTGGAGGCTGGGTAT3'；下游引物R的引物序列为:5'AGGCACAAGGAGTGGGACAGC3'。上述的鉴定香炉山鸡隐性白羽和有色羽纯合的引物的应用，是用于鉴别香炉山鸡隐性白羽纯合和有色羽纯合，其应用方法包括如下步骤：1）以待检测鸡的基因组DNA为模板，用F1引物和R引物扩增TYR基因白羽等位基因c,用F2引物和R引物扩增TYR基因有色羽等位基因C；2）通过引物组在同一PCR体系进行扩增反应，扩增反应条件为：95℃预变性5min，95℃变性45s，65℃退火45s，72℃延伸35s，35个循环，72℃终延伸10min，4℃保存，扩增反应的体系为上游引物F12μL，上游引物F22μL；下游引物R2μL，2×PCRTaqmix12μL，ddH2O10μL，模板DNA2μL，总反应为30μL体系，从而获得PCR扩增产物，根据PCR扩增产物在120V电压的1%琼脂糖凝胶中电泳30分钟；3）结束后,用凝胶成像系统对琼脂糖凝胶拍照,得出电泳图谱结果进行判型：如果只能够得到785bp的条带，则待测鸡的等位基因型为cc型隐性白羽纯合型；如果只能够得到1060bp的条带，则待测鸡的等位基因型为CC有色羽纯合型；如果同时得到785bp和1060bp的两条带，则待测鸡的等位基因型为Cc有色羽杂合型。实施例2：一种鉴定香炉山鸡隐性白羽和有色羽纯合的引物，所述引物为2对共3条，2条上游引物分别为F1、F2，1条下游引物R，上游引物F1与下游引物R为TYR基因ALV插入序列引物,上游引物F2与下游引物R为TYR基因非插入序列引物，其中，上游引物的引物序列F1为：5'CGTTAAGCGAGACGGATGAGG3'，上游引物F2的引物序列为：5'AAGTTGTTGGAGGCTGGGTAT3'；下游引物R的引物序列为:5'AGGCAC本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种鉴定香炉山鸡隐性白羽和有色羽纯合的引物，其特征在于：所述引物为2对共3条，2条上游引物分别为F1、F2，1条下游引物R，上游引物F1与下游引物R为TYR基因ALV插入序列引物,上游引物F2与下游引物R为TYR基因非插入序列引物，其中，上游引物的引物序列F1为：5'CGTTAAGCGAGACGGATGAGG 3'，上游引物F2的引物序列为：5'AAGTTGTTGGAGGCTGGGTAT 3'；下游引物R的引物序列为:5'AGGCACAAGGAGTGGGACAGC 3'。
【技术特征摘要】
1.一种鉴定香炉山鸡隐性白羽和有色羽纯合的引物，其特征在于：所述引物为2对共3条，2条上游引物分别为F1、F2，1条下游引物R，上游引物F1与下游引物R为TYR基因ALV插入序列引物,上游引物F2与下游引物R为TYR基因非插入序列引物，其中，上游引物的引物序列F1为：5'CGTTAAGCGAGACGGATGAGG3'，上游引物F2的引物序列为：5'AAGTTGTTGGAGGCTGGGTAT3'；下游引物R的引物序列为:5'AGGCACAAGGAGTGGGACAGC3'。2.一种根据权利要求1所述的鉴定香炉山鸡隐性白羽和有色羽纯合的引物的应用，其特征在于：是用于鉴别香炉山鸡隐性白羽纯合和有色羽纯合。3.根据权利要求2所述的鉴定香炉山鸡隐性白羽和有色羽纯合的引物的应用，其特征在于，其应用方法包括如下步骤：1)以待检测鸡的基因组DNA为模板，用F1引物和R引物扩增TYR基因白羽等位基因c,用F2引物和R引物扩增TYR基因有色羽等位基因C；2)通过引物组在同一PCR体系进行扩增反应，获得PCR扩增产物，根据PCR扩增产物在120V电压的0.5-1.5％琼脂糖凝胶中电泳20-...
【专利技术属性】
技术研发人员：李辉，李兴才，彭邦星，杨华婷，陈林，赵忠海，师新彩，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：贵州,52
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