一种经热稳定性改造的角蛋白酶突变体制造技术

本发明专利技术公开了一种经热稳定性改造的角蛋白酶突变体，属于工业生物技术领域。本发明专利技术基于角蛋白酶三维结构模型，针对角蛋白酶的酶蛋白Loop区域上的8个关键氨基酸残基位点，采用一步反向PCR构建热稳定性突变重组菌，热稳定性研究结果显示突变体N218S角蛋白酶在60℃的热稳定性提高了3倍以上。利用角蛋白酶进行降解羽毛研究。观察到角蛋白酶处理48h后的羽毛表面呈现开叉、毛糙状，羽毛降解率达到25％，羽毛降解液中氨基酸总含量增加了1.82mg/mL。该研究为降解羽毛制备高质量饲料以及降解硬质角蛋白废弃物奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
一种经热稳定性改造的角蛋白酶突变体
本专利技术涉及一种经热稳定性改造的角蛋白酶突变体，属于工业生物

技术介绍
角蛋白结构复杂、刚性强，含有丰富的二硫键，因此难以被普通蛋白酶降解。角蛋白酶是能够特异性降解羽毛、羊毛、毛发、指甲等富含角蛋白的特殊的蛋白酶类。其首先通过二硫键还原作用打开角蛋白中复杂的二硫键，进而通过蛋白水解作用实现角蛋白的降解。角蛋白酶的特殊性使其能够广泛地运用于畜牧行业、饲料行业、制革行业、医药行业中。总结已有研究来看，角蛋白酶的酶活及热稳定性普遍较差。其中热稳定性不足的问题使得在实际应用中通常需要通过加热来加速反应，提高了能耗，且角蛋白酶粉制备时的喷雾干燥过程也需要加热，因此，热稳定的角蛋白酶在实际应用中非常重要。提高酶热稳定性的方法包括添加保护剂、酶的化学修饰、固定化以及蛋白质工程改造等。基于蛋白质三维结构的定点突变改造是改变酶热稳定性的有效方法，近年来，建立在分子信息学基础上的蛋白质工程技术获得了长足的发展，基于蛋白质的晶体结构或同源模型，利用计算机辅助设计能对角蛋白酶进行半理性或理性的蛋白质工程改造，为提高角蛋白酶的热稳定性提供可行的技术手段。美国国立本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种角蛋白酶突变体，其特征在于，以氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的角蛋白酶为亲本，将亲本角蛋白酶的第118位天冬酰胺、第218位的天冬酰胺、第236位的丝氨酸中至少一处突变为其他的氨基酸。

【技术特征摘要】
1.一种角蛋白酶突变体，其特征在于，以氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的角蛋白酶为亲本，将亲本角蛋白酶的第118位天冬酰胺、第218位的天冬酰胺、第236位的丝氨酸中至少一处突变为其他的氨基酸。2.根据权利要求1所述的角蛋白酶突变体，其特征在于，将亲本角蛋白酶的第118位天冬酰胺突变为丝氨酸。3.根据权利要求1所述的角蛋白酶突变体，其特征在于，将亲本角蛋白酶的第218位天冬酰胺突变为丝氨酸。4.根据权利要求1所述的角蛋白酶突变体，其特征在于，将亲本角蛋白酶的第236位丝氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚劲松，陶丽妍，苏畅，许正宏，史劲松，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32