【技术实现步骤摘要】
一种氧化聚蔗糖修饰环氧化物水解酶及应用(一)
本专利技术涉及一种同时提高环氧化物水解酶比酶活和热稳定性的方法，尤其是一种利用聚蔗糖修饰环氧化物水解酶的化学修饰方法。(二)
技术介绍
手性环氧化物是一类重要的手性合成砌块，在医药、化工、材料、农药等其领域应用广泛。化学法生产手性环氧化物存在金属催化剂成本高、副产物多、环境污染严重等问题。生物催化法具有选择性高、成本较低、副产物少和绿色环保等优点，具有良好的发展前景和应用价值。环氧化物水解酶(Epoxidehydrolase,EH,EC3.3.2.3)能立体选择性地水解拆分外消旋环氧化合物，从而获得具有光学性质的环氧化物和相应的1,2-二醇。该酶来源广，普遍存在于大自然中，在许多生物体内都能找到，如植物、昆虫、哺乳动物和细菌等。但是，环氧化物水解酶普遍存在活力低、易变性、稳定性差等问题，直接影响到该酶在工业上的应用的生产效率和生产成本。化学修饰是提高酶稳定性的一种非常有效的方法，糖基的存在会增加蛋白质的刚度，并影响蛋白质的正确折叠及其构象。糖基还会对蛋白质的药理学性质，如生物学活性、免疫原性、受体结合能力等。由于糖类是...
【技术保护点】
1.一种氧化聚蔗糖修饰环氧化物水解酶，其特征在于所述酶按如下方法制备：(1)氧化聚蔗糖：将聚蔗糖溶于0.25M NaIO4水溶液中，37℃、150rpm避光反应6h，加入乙二醇终止反应，将反应液在蒸馏水中透析，将透析后的截留液冻干，获得氧化聚蔗糖；所述NaIO4水溶液体积用量以聚蔗糖质量计为5‑50mL/g；(2)将氧化聚蔗糖和环氧化物水解酶溶于0.2M、pH8.0磷酸盐缓冲液中，混匀后于0‑15℃、600rpm反应3‑30h，用蒸馏水透析，取截留液用体积浓度50％乙醇水溶液沉淀，取沉淀，获得聚蔗糖修饰的环氧化物水解酶；所述氧化聚蔗糖和环氧化物水解酶质量比为0.5‑500:1。
【技术特征摘要】
1.一种氧化聚蔗糖修饰环氧化物水解酶，其特征在于所述酶按如下方法制备：(1)氧化聚蔗糖：将聚蔗糖溶于0.25MNaIO4水溶液中，37℃、150rpm避光反应6h，加入乙二醇终止反应，将反应液在蒸馏水中透析，将透析后的截留液冻干，获得氧化聚蔗糖；所述NaIO4水溶液体积用量以聚蔗糖质量计为5-50mL/g；(2)将氧化聚蔗糖和环氧化物水解酶溶于0.2M、pH8.0磷酸盐缓冲液中，混匀后于0-15℃、600rpm反应3-30h，用蒸馏水透析，取截留液用体积浓度50％乙醇水溶液沉淀，取沉淀，获得聚蔗糖修饰的环氧化物水解酶；所述氧化聚蔗糖和环氧化物水解酶质量比为0.5-500:1。2.如权利要求1所述氧化聚蔗糖修饰环氧化物水解酶，其特征在于步骤(1)所述聚蔗糖的分子量为70-700kDa。3.如权利要求1所述氧化聚蔗糖修饰环氧化物水解酶，其特征在于步骤(1)所述透析时间为24h，间隔12h更换一次透析液，所述透析袋截留分子量为14000Da。4.如权利要求1所述氧化聚蔗糖修饰环氧化物水解酶，其特征在于步骤(2)所述环氧化物水解酶酶活为10～1000U/mg。5.如权利要求1所述氧化聚蔗糖修饰环氧化物水解酶，其特征在于步骤(2)所述环氧化物水解酶是由含环氧化物水解酶基因的菌株经发酵培养获得的湿菌体分离提取的纯酶；所述菌株包括黑曲霉(Aspergillusniger)、放射性土壤农杆菌(Agrobacteriumradiobacter)或粘红酵母菌(Rhodotorulaglutinis)。6.如权利要求5所述氧化聚蔗糖修饰环氧化物水解酶，其特征在于所述环氧化物水解酶基因的核苷酸序列为SEQIDNO.2所示。7.如权利要求1所述氧化聚蔗糖修饰环氧化物水解酶，其特征在于步骤(2)所述磷酸盐缓冲液体积用量以环氧化物水解酶质量计为0.1-10mL/mg。8.如权利要求5所述氧化聚蔗糖修饰环氧化物水解酶，其特征在于所述环氧化物水解酶按如下方法制备：(1)湿菌体：将含环氧化物水解酶基因的菌株接种至斜面培养基，在37℃培养12h，获得斜面菌体；所述斜面培养基终浓度组成...
【专利技术属性】
技术研发人员：邹树平，郑裕国，轩秀玲，王之见，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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