钙调磷酸酶调节蛋白1.4或其类似物在制备抑制肝癌的药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及钙调磷酸酶调节蛋白1.4(RCAN1.4)或其类似物在制备抑制肝癌的药物中的应用。本发明专利技术揭示了RCAN1.4本身或其上调剂能够用于抑制肝癌；RCAN1.4功能类似药物如环孢菌素A，也能够显著降低肝癌细胞的体内肺转移能力。

Application of Calmodulineurin Regulating Protein 1.4 or Its Analogues in the Preparation of Drugs Inhibiting Hepatocellular Carcinoma

The present invention relates to the application of calcineurin regulatory protein 1.4 (RCAN 1.4) or its analogues in the preparation of drugs for inhibiting liver cancer. The invention discloses that RCAN 1.4 itself or its up-regulator can be used to inhibit hepatocellular carcinoma, and that RCAN 1.4 can also significantly reduce the lung metastasis ability of hepatocellular carcinoma cells in vivo by functionally similar drugs such as cyclosporine A.

【技术实现步骤摘要】
钙调磷酸酶调节蛋白1.4或其类似物在制备抑制肝癌的药物中的应用
本专利技术属于生物医药领域，更具体地，本专利技术涉及钙调磷酸酶调节蛋白1.4或其类似物在制备抑制肝癌的药物中的应用。
技术介绍
原发性肝癌(HepatocellularCarcinoma，HCC，以下简称肝癌)是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一，全球范围内其死亡率在男性中高居第二，在女性中位居第五。肝癌也是我国目前最常见的四种肿瘤之一，全球约50％以上的原发性肝癌发生在中国，发病率位居世界首位。肝癌早期诊治较难，病情进展快且预后差，其中绝大多数肝癌患者都死于肿瘤的转移和复发。据临床研究资料显示：即使是根治性手术，肝癌患者术后5年转移复发率仍高达60-70％，而局部治疗转移复发率则更高。因此，深入研究肝癌发生、发展的分子机制，寻找新的治疗靶点并设计合理有效的干预治疗手段，一直是肝癌研究领域的重点和难点。钙调磷酸酶调节蛋白1(Regulatorofcalcineurin1，RCAN1)是钙调神经磷酸酶(Calcineurin，CaN)的一类内源性调节因子，最早发现于唐氏综合症关键区域1(DownSyndromeCriticalRegion，DSCR1)的q22.12区域。RCAN1基因组有7个外显子，分别被6个内含子隔开，其中外显子1-4可被选择性剪切产生4种不同的mRNA转录产物。研究发现，在哺乳动物组织中只能检测到其中三种选择性剪接体的mRNA表达产物，且绝大多数转录产物都是以外显子1(RCAN1.1)或外显子4(RCAN1.4)起始。RCAN1的表达具有组织特异性：RCAN1.1大量表达于心脏、大脑、肌肉和胰腺中；RCAN1.2只表达于胎儿肝脏和大脑中；而RCAN1.4主要表达于心脏、肝脏、肌肉、胎盘、胰腺和肾脏中。RCAN1.4蛋白包含197个氨基酸，主要通过与CaN的调节亚基结合，调节CaN的活性进而影响下游信号通路和靶基因的表达。CaN是目前已知的唯一受Ca2+和钙调素(Calmodulin，CaM)激活的磷酸酶，在免疫、神经、心血管和内分泌等系统中均发挥着重要的作用。RCAN1在细胞中能够通过与CaN结合而发挥抑制CaN活性的作用。CaN通过催化磷脂酰丝氨酸和磷脂酰苏氨酸脱磷酸化，活化底物蛋白T细胞核因子(nuclearfactorofactivatedTcells，NFATs)。在不同的生理状态和疾病类型中，胞浆中的NFAT家族成员受CaN脱磷酸作用后进入细胞核，结合到某些与免疫、神经、心血管和内分泌等系统相关基因的启动子和增强子区域，诱导一系列功能不重叠基因的转录。本领域中，目前尚不清楚CaN在原发性肝癌中的功能作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供钙调磷酸酶调节蛋白1.4或其类似物在制备抑制肝癌的药物中的应用。在本专利技术的第一方面，提供一种钙调磷酸酶调节蛋白1.4或其上调剂的用途，用于制备抑制肝癌的组合物。在一个优选例中，所述的肝癌是钙调磷酸酶调节蛋白1.4低表达的肝癌；或所述的肝癌是钙调神经磷酸酶/底物蛋白T细胞核因子1(CaN/NFAT1)信号通路激活的肝癌。在另一优选例中，所述的钙调磷酸酶调节蛋白1.4的上调剂包括：钙调磷酸酶调节蛋白1.4的表达载体。在另一优选例中，所述的表达载体包括：病毒载体，非病毒载体；较佳地，所述的表达载体包括(但不限于)：慢病毒载体，腺病毒载体。在本专利技术的另一方面，提供钙调磷酸酶调节蛋白1.4的功能类似物的用途，用于制备抑制肝癌的组合物。在一个优选例中，所述的钙调磷酸酶调节蛋白1.4的功能类似物包括(但不限于)：CaN外源性抑制剂环孢菌素A，FK506，匹美莫司。在另一优选例中，所述的肝癌是钙调磷酸酶调节蛋白1.4低表达的肝癌；或所述的肝癌是钙调神经磷酸酶/底物蛋白T细胞核因子1(CaN/NFAT1)信号通路激活的肝癌。在本专利技术的另一方面，提供一种用于抑制肝癌的药物组合物，所述的药物组合物中包括：钙调磷酸酶调节蛋白1.4或其上调剂，或钙调磷酸酶调节蛋白1.4的功能类似物；和学上可接受的载体。在一个优选例中，所述的钙调磷酸酶调节蛋白1.4的上调剂包括：钙调磷酸酶调节蛋白1.4的表达载体；或所述的钙调磷酸酶调节蛋白1.4的功能类似物包括(但不限于)：环孢菌素A，FK506，匹美莫司。在本专利技术的另一方面，提供一种筛选用于抑制肝癌的潜在物质的方法，所述的方法包括：(1)将候选物质与表达钙调磷酸酶调节蛋白1.4的体系接触；(2)检测候选物质对钙调磷酸酶调节蛋白1.4的影响；若所述候选物质可提高(优选显著提高，如提高5倍以上，较佳的提高10倍；更佳的提高20倍以上)钙调磷酸酶调节蛋白1.4的表达、活性，则表明该候选物质是可用于抑制肝癌的潜在物质。在一个优选例中，步骤(1)包括：在测试组中，将候选物质加入到表达钙调磷酸酶调节蛋白1.4的体系中；和/或步骤(2)包括：检测测试组的体系中钙调磷酸酶调节蛋白1.4的表达或活性，并与对照组比较，其中所述的对照组是不添加所述候选物质的表达钙调磷酸酶调节蛋白1.4的体系；如果测试组中钙调磷酸酶调节蛋白1.4的表达、活性在统计学上高于(优选显著提高，如提高5倍以上，较佳的提高10倍；更佳的提高20倍以上)对照组，就表明该候选物质是可用于抑制肝癌的潜在物质。在另一优选例中，所述的体系选自：细胞体系(或细胞培养物体系)、亚细胞体系(或亚细胞培养物体系)、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系。在另一优选例中，所述方法还包括：对获得的潜在物质进行进一步的细胞实验和/或动物试验，以从候选物质中进一步选择和确定对于抑制肝癌有用的组合物。在另一优选例中，所述的候选物质包括(但不限于)：针对钙调磷酸酶调节蛋白1.4或其片段或变异体或其编码基因设计的过表达构建体，活性促进分子等。本专利技术的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明图1、RCAN1.4在肝癌组织中表达下调。(A)定量PCR检测RCAN1三种选择剪接体RCAN1.1、RCAN1.2和RCAN1.4的mRNA在肝癌组织及配对癌旁肝组织中的表达水平(n＝108)；(B)108例肝癌病人RCAN1.4mRNA的倍数变化。其中，***代表p<0.001。图2、过表达RCAN1.4抑制肝癌细胞体外运动和侵袭能力。(A)CCK-8实验检测过表达RCAN1.4后肝癌细胞的增殖能力；(B)细胞迁移实验检测过表达RCAN1.4后肝癌细胞的迁移能力；(C)细胞侵袭实验检测过表达RCAN1.4后肝癌细胞的侵袭能力。其中，*代表p<0.05，**代表p<0.01，***代表p<0.001。图3、过表达RCAN1.4抑制肝癌细胞体内生长和转移。(A)裸鼠肝原位成瘤模型中各组裸鼠肿瘤照片和瘤体体积的统计图(MHCC97H-VectorvsMHCC97H-RCAN1.4；HCCLM3-VectorvsHCCLM3-RCAN1.4)；(B)裸鼠肝原位成瘤模型中各组裸鼠肺转移灶HE染色照片及肺转移灶数量统计图。其中，*代表p<0.05，**代表p<0.01。图4、抑制CaN磷酸酶活性可抑制肝癌体内转移。(A)过表达RCAN1.4抑制肝癌细胞中C本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种钙调磷酸酶调节蛋白1.4或其上调剂的用途，用于制备抑制肝癌的组合物。

【技术特征摘要】
1.一种钙调磷酸酶调节蛋白1.4或其上调剂的用途，用于制备抑制肝癌的组合物。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的肝癌是钙调磷酸酶调节蛋白1.4低表达的肝癌；或所述的肝癌是钙调神经磷酸酶/底物蛋白T细胞核因子1信号通路激活的肝癌。3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的钙调磷酸酶调节蛋白1.4的上调剂包括：钙调磷酸酶调节蛋白1.4的表达载体。4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的表达载体包括：病毒载体，非病毒载体；较佳地，所述的表达载体包括：慢病毒载体，腺病毒载体。5.钙调磷酸酶调节蛋白1.4的功能类似物的用途，用于制备抑制肝癌的组合物。6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的钙调磷酸酶调节蛋白1.4的功能类似物包括：CaN外源性抑制剂环孢菌素A，FK506，匹美莫司。7.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的肝癌是钙调磷酸酶调节蛋白1.4低表达的肝癌；或所述的肝癌是钙调神经磷酸酶/底物蛋白T细胞核因子1信号通路激活的肝癌。8.一种用于抑制肝癌的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物中包括：钙调磷酸酶调节蛋白1.4或其上调剂，或钙调磷酸酶调节蛋白1.4的功能类似物；和药学上可接受的...

【专利技术属性】
技术研发人员：覃文新，金浩杰，
申请(专利权)人：上海市肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：上海,31