一种高通量快速筛选ERp57抑制剂的方法技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，具体公开了一种基于结合原理的高通量药物筛选方法，包括以下步骤：（1）制备带有组氨酸标签的目标蛋白：（2）将待筛选的样品与蛋白孵育；（3）将以上混合物与螯合镍的琼脂糖磁珠结合；（4）磁性分离磁珠，洗脱磁珠表面非特异性的结合物；（5）洗脱目标化合物，用质谱仪器鉴定与目标蛋白结合的小分子。（6）将与目标蛋白有结合作用的小分子进行进一步的生物活性验证。如果待测样品对该蛋白有生物调节的功能，则待测样品为阳性。该方法具有快速、成本低、节省样品量等特点，为发现靶标化合物提供新的筛选方法。

【技术实现步骤摘要】
一种高通量快速筛选ERp57抑制剂的方法
本专利技术涉及生物医药领域，涉及一种镍离子螯合琼脂糖磁珠亲和层析原理高通量筛选蛋白配体的方法。专利技术背景传统的小分子抑制剂药物筛选方法是，先将测试的化合物逐一进行生物活性评价。这样的方法所用时间较长，筛选效率低，工作量大，成本高；随后发展的明胶酶谱法、放射性同位素法、高效液相色谱（HPLC）测定法、分光光度法等，各种方法均有相应的缺陷，如放射性同位素法则耗时长，对环境产生污染；HPLC测定法需要大量的流动相和昂贵的色谱柱等。因此开发快速、有效、操作简单和高通量的筛选方法是实现小分子抑制剂的必然趋势。固定化金属螯合亲和层析技术是一种在近几年新发展起来的分离技术，原理是利用目标蛋白质表面的一些氨基酸，如组氨酸等均可以与金属离子之间发生特殊的相互作用，如配价键结合等，从而可以把目标蛋白吸附在固定载体上，分离出来，而一般所用到的金属离子有Ni2+，Co2+，Ca2+，Mg2+等，同时金属螯合亲和层析可能的抑制剂具有简单，吸附量大，分离条件温和等特点。磁珠的结构通常由具磁性的内核及核外包裹的高分子外壳两部分组成。由于磁核对外磁场的响应，磁珠可与磁本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高通量快速筛选ERp57抑制剂的方法，包括以下步骤：（1）制备带有组氨酸标签的目标蛋白；（2）将待筛选的样品与蛋白孵育；（3）将以上混合物与螯合镍的琼脂糖磁珠结合；（4）磁性分离，洗脱磁珠表面非特异性的结合物；（5）洗脱目标复合物，分子与蛋白结合的小分子，用质谱仪器鉴定与目标蛋白结合的小分子；（6）将与目标蛋白有结合作用的样品进行进一步的生物活性验证。

【技术特征摘要】
1.一种高通量快速筛选ERp57抑制剂的方法，包括以下步骤：（1）制备带有组氨酸标签的目标蛋白；（2）将待筛选的样品与蛋白孵育；（3）将以上混合物与螯合镍的琼脂糖磁珠结合；（4）磁性分离，洗脱磁珠表面非特异性的结合物；（5）洗脱目标复合物，分子与蛋白结合的小分子，用质谱仪器鉴定与目标蛋白结合的小...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔国祯，周鹤峰，师伟，邹佳，毛皓，李惠民，
申请(专利权)人：遵义医学院，
类型：发明
国别省市：贵州,52