【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于β-葡萄糖苷酶耐葡萄糖抑制筛选领域,涉及基于显色化合物平板培养基筛选的耐葡萄糖抑制的高通量筛选方法。
技术介绍
β-葡萄糖苷酶是纤维素糖化最关键的限速酶,广泛用于可再生生物质资源的能源应用领域以及食品工业领域。纤维素的降解主要涉及到三种纤维素酶,分别是纤维素外切酶、纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶,纤维素外切酶主要作用于微晶纤维素的还原端或非原端生成纤维二糖,而纤维素内切酶主要作用于不定形纤维素的内部产生纤维二糖和纤维寡糖,β-葡萄糖苷酶主要作用于纤维二糖和纤维寡糖生成葡萄糖。为了实现二代生物燃料的工业化生产,节约生产成本以及提高反应器容积效率是首要任务,因此,增加预处理纤维素浓度是一种很好的解决方案,在高浓度生物质降解过程中,β-葡萄糖苷酶会受到高浓度葡萄糖抑制而失去活性,造成大量纤维二糖积累,因为竞争性抑制和非竞争性抑制的影响,同时导致纤维素外切酶和纤维素内切酶活性的完全丧失,纤维素停止了酶解反应。很多研究团队已采用定向进化技术改造β-葡萄糖苷酶,但是主要用于获得高活性、高稳定性的β-葡萄糖苷酶的筛选,因此,为了解决β-葡萄糖苷酶受高浓度抑制的问题,采用定向进化技术是一种不错的选择,然而目前尚未发现类似报道,其中很可能最主要原因是没有找到一个合适的高通量筛选方法。
技术实现思路
基于以上所存在的问题,本专利技术提供了一种基于平板筛选技术用于获得耐高浓度葡萄糖的β-葡萄糖苷酶高通量筛选方法 ...
【技术保护点】
一种耐高浓度葡萄糖的β‑葡萄糖苷酶高通量筛选方法,其特征在于采用显色化合物平板培养基进行高通量筛选耐糖β‑葡萄糖苷酶,其特征是主要步骤:1)将β‑葡萄糖苷酶于含有七叶苷和枸橼酸铁铵的平板培养基上进行分泌表达;2)挑取阳性克隆子于普通平板培养基上生长;3)再将3‑10mL的七叶苷、枸橼酸铁铵和一定浓度葡萄糖的溶液加入到长有阳性克隆子的普通平板培养基上,于25‑70℃下反应1‑2h,获得能产生黑色光圈的突变酶。
【技术特征摘要】
2016.02.02 CN 20161007052511.一种耐高浓度葡萄糖的β-葡萄糖苷酶高通量筛选方法,其特征在于采用显色化合物
平板培养基进行高通量筛选耐糖β-葡萄糖苷酶,其特征是主要步骤:
1)将β-葡萄糖苷酶于含有七叶苷和枸橼酸铁铵的平板培养基上进行分泌表达;
2)挑取阳性克隆子于普通平板培养基上生长;
3)再将3-10mL的七叶苷、枸橼酸铁铵和一定浓度葡萄糖的溶液加入到长有阳性克隆...
【专利技术属性】
技术研发人员:赵喜华,易拾,涂宗财,
申请(专利权)人:江西师范大学,
类型:发明
国别省市:江西;36
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