贝母辛在制备抗白色念珠菌药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了贝母辛在制备抗白色念珠菌药物中的应用。本发明专利技术发明专利技术人以白色念珠菌为供试对象，筛选高效、低毒、不易产生耐药性的化合物，发现贝母辛对白色念珠菌的粘附性和致病性具有很好的抑制作用。而且，该化合物本身毒性较小，不影响人类细胞的生长；同时不影响白色念珠菌的正常生长，表明该化合物对白色念珠菌菌株的作用并不主要是依靠杀死白色念珠菌，而是通过抑制白色念珠菌的粘附性和致病性，因此不易产生耐药性。这在新型抗真菌药物的开发，尤其是抗白色念珠菌感染药物的开发方面具有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
贝母辛在制备抗白色念珠菌药物中的应用
本专利技术属于生物医药
，特别涉及贝母辛在制备抗白色念珠菌药物中的应用。
技术介绍
白色念珠菌(Candidaalbicans)是在人类中广泛传播的真菌疾病，是一种重要的条件致病真菌，通常会引起急性、亚急性或慢性感染，也是现在医院获得性感染最重要的病原之一。在健康人体黏膜表面，如口腔、肠道，白色念珠菌通常不会引起病害，但在免疫系统受到损害或抑制的病人体内，如化疗病人、器官移植病人或艾滋病人中，会引起严重的系统性感染，其致死率高达40％。目前在临床上抗真菌药物种类有限，其中唑类药物(氟康唑)应用广泛，氟康唑是通过抑制真菌复制起到抑菌的作用，但是随着抗生素的滥用，耐药性的现象越来越严重。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供贝母辛在制备抗白色念珠菌药物中的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：贝母辛在制备抗白色念珠菌药物中的应用。所述的贝母辛的CAS号为19773-24-1，其结构式如下所示：具体地，所述抗白色念珠菌是指抑制白色念珠菌的粘附性、致病性(对白色念珠菌的毒力作用)。所述的抗白色念珠菌药物包括用于预防和/或治疗白色念珠菌感染的药物，以及用于预防和治疗白色念珠菌引起的感染性疾病药物。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术在前期工作中针对性地筛选高效、低毒、不易产生耐药性的化合物。然后以白色念珠菌(Candidaalbicans)为供试对象，考察了本专利技术筛选的贝母辛对白色念珠菌的粘附性以及细胞毒性的影响作用，目的是通过检测贝母辛对白色念珠菌毒力形成因素的干扰，进一步影响白色念珠菌的侵染作用。结果显示，贝母辛对白色念珠菌的粘附性和致病性具有很好的抑制作用。而且，贝母辛本身毒性较小，不影响人类细胞的生长；同时不影响白色念珠菌的正常生长，表明贝母辛对白色念珠菌菌株的作用并不主要是依靠杀死白色念珠菌，而是通过抑制白色念珠菌的粘附性、致病性，因此不易产生耐药性。这在新型抗真菌药物的开发，尤其是抗白色念珠菌感染药物的开发方面具有很好的应用前景。因此，贝母辛在制备抗白色念珠菌感染的药物中的应用，以及在制备预防和/或治疗白色念珠菌引起的感染性疾病的药物中的应用，均应在本专利技术的保护范围之内。附图说明图1是贝母辛对白色念珠菌在A549细胞致病性方面的影响结果图；其中，图(A)是终浓度为100μM的贝母辛对A549细胞的细胞毒性检测结果图；图(B)是不同浓度的贝母辛对白色念珠菌侵染细胞后的检测结果图；数据显示的是4个生物学重复的平均结果，误差棒反映了标准差。图2是贝母辛对白色念珠菌生长速率的影响结果图；其中，DMSO作为对照；数据显示的是3个生物学重复的平均结果，误差棒反映了标准差。图3是贝母辛对白色念珠菌粘附性的影响结果图；其中，DMSO、BDSF作为对照；数据显示的是4个生物学重复的平均结果，误差棒反映了标准差。具体实施方式下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。实施例1贝母辛抗菌活性检测1、试验方法：(1)白色念珠菌菌株的活化：将白色念珠菌标准菌株SC5314(名称亦为ATCCMYA-2876)于LB固体培养基活化(胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、NaCl10g/L、琼脂15g/L)，置于30℃培养箱培养过夜。(2)贝母辛对白色念珠菌菌株SC5314细胞毒力的影响：(a)人非小细胞肺癌细胞系A549细胞的复苏及培养：将冻融的A549细胞转移至含10％(v/v)FBS的DMEM培养基(Gibco公司)中，37℃、5％CO2条件下过夜培养。(b)A549细胞准备：A549细胞在含10％vol胎牛血清的高糖培养基DMEM中，以1.5×104个/孔的细胞浓度于96孔板中培养过夜。待细胞布满96孔板底部80％的时候，弃去培养液，用1×PBS清洗细胞3次。(c)白色念珠菌准备：挑取新鲜SC5314接种于GMM培养液(6.7g/LYNB，0.2％wt葡萄糖)中，于30℃、200rpm条件下振荡培养过夜；用细胞维持液(含1％volFBS的DMEM)调节至OD600＝1.0，再用细胞维持液稀释10倍(≈108cfu/mL)，得到含菌的细胞维持液。(d)细胞毒力测定：a)用DMSO溶解贝母辛，制备浓度为2mM的贝母辛母液。b)测定贝母辛本身对细胞的毒力作用：将贝母辛母液用DMSO稀释到1mM，加入细胞维持液中，贝母辛的终浓度为100μM，得到测试液A；同时，设置对照组，即以相同体积的DMSO取代贝母辛母液，得到测试液B。按100μL/孔，将测试液A和测试液B分别加入准备好的A549细胞中，置于37℃、5％CO2细胞培养箱内培养8h，每处理4个重复。c)测定贝母辛和白色念珠菌对细胞的毒力作用：将贝母辛母液用DMSO稀释成浓度为1mM、500μM、250μM、125μM的稀释药液，然后将贝母辛母液和贝母辛稀释液分别与含菌的细胞维持液按体积比1:9配比混合，得到测试液C，贝母辛在测试液C中的终浓度分别为200μM、100μM、50μM、25μM、12.5μM；同时设置只加DMSO(二甲基亚砜)、BDSF(cis-2-dodecenoicacid，顺2-十二碳烯酸，上海有德化工科技有限公司)和FLC(氟康唑)作为对照，其中，以DMSO和含菌的细胞维持液按体积比1:9配比混合，得到测试液D；以BDSF母液(用DMSO溶解得到，浓度为1mM)与含菌的细胞维持液按体积比1:9配比混合，得到测试液E；以氟康唑母液(用DMSO溶解得到，浓度为1mM)与含菌的细胞维持液按体积比1:9配比混合，得到测试液F。按100μL/孔，将测试液C～F分别加入准备好的A549细胞中，置于37℃、5％CO2细胞培养箱内培养8h，每处理4个重复。d)参照Promega公司CytoToxNonRadioactiveCytotoxicityAssay操作方法测定细胞LDH活性，随后用GraphPadPrism6处理数据。(3)贝母辛对白色念珠菌菌株SC5314生长影响测定：挑取菌株SC5314单菌落接种于GMM培养液(6.7g/LYNB，0.2％wt.葡萄糖)，30℃、200rpm振荡培养过夜，测定菌液OD600，用GMM将菌液稀释至OD600＝0.05。将该菌液与浓度为1mM的贝母辛药液按体积比9:1混合，按300μL/孔的量加入到100孔板中，每个处理设置3个重复，同时设置只加DMSO的处理。置于生长曲线测定仪中，30℃，200rpm，每2h测定一次OD600值，2d后观察实验结果，GraphPadPrism6处理数据。(4)贝母辛对白色念珠菌菌株SC5314粘附性的影响：(a)A549细胞的复苏及培养：将冻融的A549细胞转移至含10％volFBS的DMEM培养基(Gibco公司)中，37℃，5％CO2条件下过夜培养。(b)A549细胞准备：A549细胞在含10％vol胎牛血清的高糖培养基DMEM中，以0.5×103个/孔的细胞浓度于96孔板中培养过夜。待细胞布满96孔板底部80％的时候，弃去培养液，用1×PBS清洗细胞3次。(c)挑取L本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.贝母辛在制备抗白色念珠菌药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.贝母辛在制备抗白色念珠菌药物中的应用。2.根据权利要求1所述的贝母辛在制备抗白色念珠菌药物中的应用，其特征在于：所述的抗白色念珠菌药物是具有抑制白色念珠菌的粘附性、致病性的药物。3.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓音乐，孙秀云，宋施豪，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44