母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变检测的引物、探针、试剂盒及用途制造技术

本发明专利技术公开了一种母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变检测的引物、探针、试剂盒及用途。本发明专利技术的引物组包括：SMN1和SMN2基因第7外显子的共同引物对，其序列分别如SEQ ID NO.1～2所示；SMN1和SMN2基因第8外显子的共同引物对，其序列分别如SEQ ID NO.3～4所示。本发明专利技术的探针组包括：检测SMN1基因第7外显子的第一探针、检测SMN1基因第8外显子的第二探针、检测SMN2基因第7外显子的第三探针、检测SMN2基因第8外显子的第四探针。本发明专利技术所用荧光定量PCR检测平台更加普及，可对每份样本检测结果进行实时监控和评价，具有操作步骤少、成本低、无需开盖检测、灵敏度高和节省时间等优势。

【技术实现步骤摘要】
母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变检测的引物、探针、试剂盒及用途
本专利技术涉及分子生物学
，更具体地，特别是涉及一种母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变检测的引物、探针及相应试剂盒，以及利用该试剂盒检测母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变的方法。
技术介绍
脊髓性肌萎缩症是一种由于脊髓前角运动神经细胞退行性变而引起的疾病，属于常染色体隐性遗传病，临床上多见。它的主要症状表现为近端肢体和躯干进行性、对称性肌无力和肌肉萎缩。人群发病率为1/6000-1/100000,是第二常见的致死性常染色体隐性遗传性神经变性疾病。根据发病年龄和肌无力的严重程度不同，临床上将脊髓性肌萎缩症分为婴儿型、中间型及少年型等类型。脊髓性肌萎缩症的致病基因为SMN(SurvivalMotorNeurongene)基因，分别为SMN1和SMN2。SMN1和SMN2基因是2个高度同源的基因，都含有9个外显子：SMN1位于染色体端粒侧的和SMN2位于染色体着丝粒侧，两者仅在各自的3’端有5个碱基对的区别。SMN基因编码的蛋白在脊髓运动神经细胞中高度表达，与运动相关。目前产前诊断主要是以创伤性诊断为主，包括绒毛穿刺、羊水穿刺、脐带穿刺等，虽然技术比较成熟、准确性较高，但是存在宫内感染、流产、细胞培养失败等可能性，对于孕妇的心理造成一定的压力。因此现在利用母血去检测胎儿的DNA突变情况，逐渐应用于临床。近年来分子诊断技术发展迅速，脊髓性肌萎缩症相关分子诊断技术也日益成熟，但目前的检测技术还是以MLPA(多重连接探针扩增)为主，该技术主要检测的是中国人群脊髓性肌萎缩症的常见基因突变。在SMA基因诊断技术应用过程中，MLPA是一种稳定性的商品化解决方案，是当前比较常用的脊髓性肌萎缩症SMN基因检测方法，但其操作步骤较繁复、检测时间较长、对实验人员操作及分析能力要求较高，这些因素容易对检测结果的准确性性产生影响，同时MLPA检测试剂及分析耗材昂贵，较高的成本给其在脊髓性肌萎缩症疾病分子诊断及人群筛查中的应用推广带来不便。
技术实现思路
本专利技术的主要目的就是针对以上现状，提供一种母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变检测的引物、探针，以克服现有技术中的不足。本专利技术的另一主要目的在于提供一种母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变检测的试剂盒。本专利技术的另一目的还在于提供前述试剂盒在检测母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变中的用途。本专利技术的另一目的还在于提供一种检测母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变的方法。为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案包括：本专利技术实施例提供了一种母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变检测的引物组，其包括：SMN1和SMN2基因第7外显子的共同引物对，其包括第一引物和第二引物，且所述第一引物的序列如SEQIDNO.1所示，所述第二引物的序列如SEQIDNO.2所示；SMN1和SMN2基因第8外显子的共同引物对，其包括第三引物和第四引物，且所述第三引物的序列如SEQIDNO.3所示，所述第四引物的序列如SEQIDNO.4所示。本专利技术实施例还提供了一种母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变检测的探针组，其包括：检测SMN1基因第7外显子的第一探针，其序列如SEQIDNO.5所示；检测SMN1基因第8外显子的第二探针，其序列如SEQIDNO.6所示；检测SMN2基因第7外显子的第三探针，其序列如SEQIDNO.7所示；检测SMN2基因第8外显子的第四探针，其序列如SEQIDNO.8所示。本专利技术实施例还提供了一种母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变检测的试剂盒，其包括至少一引物组和至少一探针组，其中一引物组为前述的引物组，一探针组为前述的探针组。进一步地，所述的试剂盒还包括内参基因CFTR的PCR扩增引物对、内参基因CFTR的探针，其中所述内参基因CFTR的PCR扩增引物对包括第一扩增引物和第二扩增引物，所述第一扩增引物的序列如SEQIDNO.9所示，所述第二扩增引物的序列如SEQIDNO.10所示，其中内参基因CFTR的探针的序列如SEQIDNO.11所示。本专利技术实施例还提供了前述的试剂盒于制备检测母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变的产品中的用途。进一步地，应用所述产品检测母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变的方法包括：提供待检测的DNA样本；使所述待检测的DNA样本与所述试剂盒的PCR扩增检测的常规组件混合，形成混合液；之后利用所述试剂盒所包含的引物组与探针组对所述混合液进行PCR扩增；对PCR扩增产物进行检测，判断DNA样本是否包含突变的脊髓性肌萎缩症基因。本专利技术实施例还提供了一种包含前述试剂盒的产品，所述产品应用于检测母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变的方法，所述方法包括：提供待检测的DNA样本；使所述待检测的DNA样本与所述试剂盒的PCR扩增检测的常规组件混合，形成混合液；之后利用所述试剂盒所包含的引物组与探针组对所述混合液进行PCR扩增；对PCR扩增产物进行检测，判断DNA样本是否包含突变的脊髓性肌萎缩症基因。与现有技术相比，本专利技术的优点包括：本专利技术提供了用于脊髓性肌萎缩症基因荧光定量检测的引物、探针及试剂盒，并利用荧光定量PCR方法检测母血胎儿DNA中的脊髓性肌萎缩症突变。本专利技术所用荧光定量PCR检测平台更加普及，并可对每份样本检测结果进行实时监控和评价，并且结果判定方式更加直观，同时具有操作步骤少、成本低、无需开盖检测、灵敏度高和节省时间等诸多优势，在SMN基因拷贝数检测中应用前景广泛。具体实施方式下文将对本专利技术的技术方案作更为详尽的解释说明。但是，应当理解，在本专利技术范围内，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。本专利技术将根据具体事例做进一步的描述，但其仅为例证性的目的而不起到限制性作用。在对实例描述前，有必要提供一些备注说明：采用不同厂家、不同批次的试剂会造成实验结果的差异，属于正常现象。在进行小规模实验时，为保证平行实验间的重复性，建议配置试剂后，充分混匀并分装，以保证每次实验试剂的均一性。本专利技术实施例的一个方面提供了一种母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变检测的引物组，其包括：SMN1和SMN2基因第7外显子的共同引物对，其包括第一引物和第二引物，且所述第一引物的序列如SEQIDNO.1所示，所述第二引物的序列如SEQIDNO.2所示；SMN1和SMN2基因第8外显子的共同引物对，其包括第三引物和第四引物，且所述第三引物的序列如SEQIDNO.3所示，所述第四引物的序列如SEQIDNO.4所示。具体的，第一引物(即上游引物SMN-EXON7-F)为：5'CCCACCACCTCCCATAT3'；第二引物(即下游引物SMN-EXON7-R)为：5'TTCCCAAAGCATCAGCAT3'；第三引物(即上游引物SMN-EXON8-F)为：5'GGTTTCAGACAAAATC3'；第四引物(即下游引物SMN-EXON8-R)为：5'TCCTTAATTTAAGGAATG3'。本专利技术实施例的另一个方面还提供了一种母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变检测的探针组，其包括：检测SMN1基因第7外显子的第一探针，其序列如SEQIDNO.5所示；检测SMN1基因第8外显子的第二探针，其序列如SEQIDNO.6本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变检测的引物组，其特征在于包括：SMN1和SMN2基因第7外显子的共同引物对，其包括第一引物和第二引物，且所述第一引物的序列如SEQ ID NO.1所示，所述第二引物的序列如SEQ ID NO.2所示；SMN1和SMN2基因第8外显子的共同引物对，其包括第三引物和第四引物，且所述第三引物的序列如SEQ ID NO.3所示，所述第四引物的序列如SEQ ID NO.4所示。

【技术特征摘要】
1.一种母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变检测的引物组，其特征在于包括：SMN1和SMN2基因第7外显子的共同引物对，其包括第一引物和第二引物，且所述第一引物的序列如SEQIDNO.1所示，所述第二引物的序列如SEQIDNO.2所示；SMN1和SMN2基因第8外显子的共同引物对，其包括第三引物和第四引物，且所述第三引物的序列如SEQIDNO.3所示，所述第四引物的序列如SEQIDNO.4所示。2.一种母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变检测的探针组，其特征在于包括：检测SMN1基因第7外显子的第一探针，其序列如SEQIDNO.5所示；检测SMN1基因第8外显子的第二探针，其序列如SEQIDNO.6所示；检测SMN2基因第7外显子的第三探针，其序列如SEQIDNO.7所示；检测SMN2基因第8外显子的第四探针，其序列如SEQIDNO.8所示。3.一种母血胎儿脊髓性肌萎缩症基因突变检测的试剂盒，其特征在于包括至少一引物组和至少一探针组，其中一引物组为权利要求1所述的引物组，一探针组为权利要求2所述的探针组。4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于还包括内参基因CFTR的PCR扩增引物对、内参基因CFTR的探针，其中所述内参基因CFTR的PCR扩增引物对包括第一扩增引物和第二扩增引物，所述第一扩增引物的序列如SEQIDNO.9所示，所述第二扩增引物的序列如SEQIDNO.10所示，其中内参基因CFTR的探针的序列如SEQIDNO.11所示。5.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于还包括PCR扩增检测的常规组件；优选的，所述PCR扩增检测的常规组件包括PCR反应用缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸混合液、氯化镁、DNA聚合酶和尿嘧啶-N-糖基化酶。6.如权利要求3所述的试剂盒，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：张惠丹，赵洪玉，李阳，
申请(专利权)人：苏州恩科金生物科技有限公司，苏州绘真生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32