本发明专利技术提供一种脊髓性肌萎缩症相关基因突变检测方法，包括步骤：提取检测对象的基因组DNA；采用两套PCR引物对和Taqman?MGB荧光探针组合分别对基因组DNA进行荧光定量PCR，其中PCR引物对分别是SEQ?ID?NO:4与SEQ?ID?NO:5以及SEQ?ID?NO:7与SEQ?ID?NO:8所示的核苷酸序列，Taqman?MGB荧光探针具有的核苷酸序列分别是SEQ?ID?NO:6和SEQ?ID?NO:9所示的核苷酸序列；根据荧光定量PCR中收集的荧光信号而形成的实时扩增曲线，分析基因组DNA中的脊髓性肌萎缩症相关基因的两个位点是否存在突变。还涉及相关检测探针组合物及检测试剂盒、以及相关应用，本发明专利技术设计巧妙，采用闭管检测，可有效避免样本污染，且检测快速、准确、简便，从而可作为医师诊断、治疗和用药的参考依据，适于大规模推广应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及疾病相关基因突变检测
，更具体地，涉及脊髓性肌萎缩症相关基因突变检测
，特别是指一种脊髓性肌萎缩症相关基因突变检测方法、相关检测探针组合物及检测试剂盒、以及相关应用。
技术介绍
脊髓性肌萎缩症（spinal muscular atrophy,SMA）是一种常见的神经系统常染色体隐性遗传病，SMA的主要相关基因SMN1基因定位于5q13.1，本病患者主要是因为SMN1基因纯合性缺失所致。SMA可分为3型：SMA I型，又称婴儿重型、Werdnig-Hoffmann病，患儿出生后6个月内发病，全身性严重肌无力及肌张力减低，无倚托不能坐，常在2岁前死于呼吸肌麻痹；SMA II型，又称中间型，婴儿于出生后6～18个月发病，能坐，但不能无扶助站立，其生存时间依赖于呼吸肌受累麻痹的程度；SMA III型，亦即慢性型，又称Kugebug-Welander病，多于出生18个月后发病，婴儿可独立行走，病情进展缓慢，可存活至成年。本病群体发病率为1：6000－1：10000，居致死性常染色体隐性遗传病的第二位，该疾病的基因携带者频率为1：40－1：60。脊肌萎缩症目前尚无有效的治疗办法，预防患者出生是阻断该病遗传的最有效的手段，因此产前基因检测是避免再次生育患者的最佳选择。约95%的患者可以检测出SMN1基因有大片段缺失的情形发生（exon7和/或exon8缺失）。其中大部分SMA患者的SMN1基因发生了纯合子缺失突变(homozygous deletion)。至于少数未发现SMN1基因大片段缺失或转换的SMA患者，则可能在SMN1基因上发生一些小突变而致病。由DNA分子检测技术来检测SMN1基因的拷贝数，可以作为诊断是否为SMA患者或携带者的一项重要依据。在该背景条件下，现行的SMA诊断依据临床特点、肌电图和PCR-RFLP、PCR-DHPLC、毛细管电泳和测序分析等，需要特殊的生化分析仪与试剂，检测需要1周左右时间，且开管检测操作容易造成污染。因此，需要提供一种脊髓性肌萎缩症相关基因突变检测方法，其采用闭管检测，可有效避免样本污染，且检测快速、准确、简便。
技术实现思路
本专利技术的主要目的就是针对以上存在的问题与不足，提供一种脊髓性肌萎缩症相关基因突变检测方法、相关检测探针组合物及检测试剂盒、以及相关应用，该检测方法设计巧妙，采用闭管检测，可有效避免样本污染，且检测快速、准确、简便，从而可作为医师诊断、治疗和用药的参考依据，适于大规模推广应用。为了实现上述目的，在本专利技术的第一方面，提供了一种脊髓性肌萎缩症相关基因突变检测方法，其特点是，包括步骤：a.提取检测对象的基因组DNA；b.采用第一PCR引物对和第一Taqman MGB荧光探针对所述步骤a得到的基因组DNA进行荧光定量PCR，其中所述第一PCR引物对是SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列，所述第一Taqman MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列；采用第二PCR引物对和第二Taqman MGB荧光探针对所述步骤a得到的基因组DNA进行荧光定量PCR，其中所述第二PCR引物对是SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列，所述第二Taqman MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列；c.根据所述荧光定量PCR中收集的荧光信号而形成的实时扩增曲线，分析所述基因组DNA中的脊髓性肌萎缩症相关基因的两个位点是否存在突变。较佳地，在进行荧光定量PCR时，还采用内参PCR引物对和内参Taqman MGB荧光探针进行扩增，其中所述内参PCR引物对是SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11所示的核苷酸序列，所述内参Taqman MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ ID NO:12所示的核苷酸序列。在本专利技术的第二方面，提供了一种脊髓性肌萎缩症相关基因突变检测探针组合物，其特点是，包括第一PCR引物对、第一Taqman MGB荧光探针、第二PCR引物对和第二Taqman MGB荧光探针，其中所述第一PCR引物对是SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列，所述第一Taqman MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列，所述第二PCR引物对是SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列，所述第二Taqman MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列。较佳地，所述脊髓性肌萎缩症相关基因突变检测探针组合物还包括内参PCR引物对和内参Taqman MGB荧光探针，所述内参PCR引物对是SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11所示的核苷酸序列，所述内参Taqman MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ ID NO:12所示的核苷酸序列。在本专利技术的第三方面，提供了上述的脊髓性肌萎缩症相关基因突变检测探针组合物在检测脊髓性肌萎缩症相关基因突变中的应用。在本专利技术的第四方面，提供了一种脊髓性肌萎缩症相关基因突变检测试剂盒，其特点是，包括第一引物容器、第一荧光探针容器、第二引物容器和第二荧光探针容器，所述第一引物容器内具有第一PCR引物对干燥粉末或溶液，所述第一荧光探针容器内具有第一Taqman MGB荧光探针干燥粉末或溶液，所述第二引物容器内具有第二PCR引物对干燥粉末或溶液，所述第二荧光探针容器内具有第二Taqman MGB荧光探针干燥粉末或溶液，其中所述第一PCR引物对是SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列，所述第一Taqman MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列，所述第二PCR引物对是SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列，所述第二Taqman MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列。较佳地，所述脊髓性肌萎缩症相关基因突变检测试剂盒还包括内参引物容器和内参荧光探针容器，所述内参引物容器内具有内参PCR引物对干燥粉末或溶液，所述内参荧光探针容器内具有内参Taqman MGB荧光探针干燥粉末或溶液，其中所述内参PCR引物对是SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11所示的核苷酸序列，所述内参Taqman MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ ID NO:12所示的核苷酸序列。在本专利技术的第五方面，提供了上述的脊髓性肌萎缩本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种脊髓性肌萎缩症相关基因突变检测方法，其特征在于，包括步骤：
a.提取检测对象的基因组DNA；
b.采用第一PCR引物对和第一Taqman MGB荧光探针对所述步骤a得到的基因组
DNA进行荧光定量PCR，其中所述第一PCR引物对是SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5
所示的核苷酸序列，所述第一Taqman MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ ID
NO:6所示的核苷酸序列；采用第二PCR引物对和第二Taqman MGB荧光探针对所
述步骤a得到的基因组DNA进行荧光定量PCR，其中所述第二PCR引物对是SEQ ID
NO:7和SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列，所述第二Taqman MGB荧光探针具有的核
苷酸序列是SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列；
c.根据所述荧光定量PCR中收集的荧光信号而形成的实时扩增曲线，分析所述基因
组DNA中的脊髓性肌萎缩症相关基因的两个位点是否存在突变。
2.根据权利要求1所述的脊髓性肌萎缩症相关基因突变检测方法，其特征在于，在进行
荧光定量PCR时，还采用内参PCR引物对和内参Taqman MGB荧光探针进行扩增，其
中所述内参PCR引物对是SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11所示的核苷酸序列，所述内参
Taqman MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ ID NO:12所示的核苷酸序列。
3.一种脊髓性肌萎缩症相关基因突变检测探针组合物，其特征在于，包括第一PCR引物
对、第一Taqman MGB荧光探针、第二PCR引物对和第二Taqman MGB荧光探针，其
中所述第一PCR引物对是SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列，所述第一
Taqman MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列，所述第
二PCR引物对是SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列，所述第二Taqman
MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列。
4.根据权利要求3所述的脊髓性肌萎缩症相关基因突变检测探针组合物，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵翊均，周巍，
申请(专利权)人：上海五色石医学研究有限公司，
类型：发明
国别省市：
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