一种常染色体隐性遗传Kartagener综合征突变基因及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种常染色体隐性遗传Kartagener综合征突变基因及其应用。其优点表现在：本发明专利技术通过对一常染色体隐性遗传Kartagener综合征家系DANAF5基因PCR扩增及序列测定，以GRCh37/h19基因组序列为参照，发现本家系中该基因第5号外显子错义突变(T>G)+第9号外显子框移突变(CCA>C)为复合致病突变，属国内外首报，是Kartagener综合征的新发现致病突变。该突变可用于Kartagener综合征的产前诊断和遗传咨询，减少出生缺陷。基于此，可将检测DNAAF5基因第5、9号外显子的试剂用于制备诊断Kartagener综合征的试剂，开发诊断试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
一种常染色体隐性遗传Kartagener综合征突变基因及其应用
本专利技术涉及基因诊断
，具体地说，是一种Kartagener综合征(Kartagenersyndrome，KS)突变基因及其应用。
技术介绍
原发性纤毛运动障碍症是一种遗传异质性的常染色体隐性遗传疾病，它的致病原因是组装形成纤毛的不同部位功能丧失，最常见的异常是动力蛋白臂组成蛋白功能异常。KS是原发性纤毛运动障碍和内脏转位的组合，约占原发性纤毛运动障碍患者50％。在胚胎发育过程中，节纤毛正常运动是内脏转位所必需的，正常节纤毛运动缺失导致内脏转位异常。随机机会决定了胚胎发育过程中内脏是否占据正常或反向的位置。这就解释了为什么大约50％的患者，即使在同一个家庭，既有内脏正位也有内脏反位。KS出生患病率为1/2,000-1/20,000，由支气管扩张、慢性鼻窦炎或鼻息肉、内脏反位三联征组成，又称为内脏逆位－鼻窦炎－支气管扩张综合征，或称家族性支气管扩张，部分患者还可能会出现嗅觉异常、视觉异常等其它表现。该病属于先天性常染色体隐性遗传疾病，具有家族遗传倾向，可同代或隔代发病，其父母多有近亲婚配史。DNAI1是首个被发现的KS致病基因，其后导致KS发病的基因被不断发现，目前明确的致病基因有38个，其中DNAAF5为新近发现致病基因，人们对其研究报道还很少。DNAAF5(dyneinaxonemalassemblyfactor5,轴丝动力蛋白组装因子5)，基因身份编号为54919，别名为CILD18、HEATR2，位于7p22.3，它有13个外显子，其编码的蛋白含855个氨基酸。现有报道为DNAAF5第12号外显子与第13号外显子之间的剪切位点发生变异，导致DNAAF5蛋白功能减弱，引起KS发病。KS是一组遗传异质性疾病，可导致程度不同的出生缺陷，严重威胁患者的身心健康。反复肺部感染可继发支气管扩张症，严重者需接受肺部分切除术，久之，患者肺功能严重损毁可导致中年死亡。患者亦可发生慢性鼻窦炎、鼻息肉，严重影响呼吸及睡眠，需多次接受鼻息肉摘除手术，造成巨大身心痛苦。因此，及早诊断并采取相应措施有利于防止肺部感染发作，从而减少并发症，提高生存质量。因此，如何减少KS所致出生缺陷、如何减少该病死亡率是每一位科研及临床医务人员不可推卸的责任。随着种植前遗传学诊断(PGD)技术的进一步发展，将来可以利用基因芯片技术对现有KS家系提供分子学产前诊断，进一步提供遗传咨询，减少出生缺陷，为我国的优生优育作贡献。鉴于此，探索KS发生的遗传机制，发现更多KS的致病性突变将有利于KS产前诊断和遗传咨询的开展。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是，针对现有技术中的不足，提供DNAAF5基因的一种新用途。本专利技术的第二个目的是，提供一种诊断常染色体隐性遗传Kartagener综合征的试剂盒。为实现上述第一个目的，本专利技术采取的技术方案是：检测DNAAF5基因的试剂在制备诊断常染色体隐性遗传Kartagener综合征的产品中的应用。所述的产品为诊断试剂或诊断试剂盒。所述的产品检测DNAAF5基因第5号外显子和第9号外显子。所述的产品检测DNAAF5基因第5号外显子错义突变和第9号外显子框移突变。所述的产品采用了PCR技术，第5号外显子扩增的上游引物序列如SEQIDNO:1所示，第5号外显子扩增的下游引物序列如SEQIDNO:2所示，第9号外显子扩增的上游引物序列如SEQIDNO:3所示，第9号外显子扩增的下游引物序列如SEQIDNO:4所示。所述的产品检测DNAAF5基因第5号外显子c.T1148G突变和第9号外显子c.1808_1809del突变。为实现上述第二个目的，本专利技术采取的技术方案是：一种诊断常染色体隐性遗传Kartagener综合征的试剂盒，所述的试剂盒含有检测DNAAF5基因第5号外显子和第9号外显子的试剂。所述的试剂盒含有操作说明书，所述的操作说明书记载有以下内容：如果DNAAF5基因第5号外显子发生c.T1148G突变，同时DNAAF5基因第9号外显子发生c.1808_1809del突变，则检测对象为常染色体隐性遗传Kartagener综合征个体。所述的试剂盒包含PCR反应体系和如SEQIDNO:1～4所示的引物。本专利技术优点在于：1、本专利技术首次通过对一常染色体隐性遗传Kartagener综合征家系DANAF5基因PCR扩增及序列测定，以GRCh37/h19基因组序列为参照，发现本家系中该基因第5号外显子(DNAAF5:NM_017802:exon5:c.T1148G:p.L383R)错义突变(T>G)+第9号外显子(DNAAF5:NM_017802:exon9:c.1808_1809del:p.P603fs)框移突变(CCA>C)为复合致病突变，属国内外首次报道，是Kartagener综合征的新发现致病突变。该突变可用于Kartagener综合征的产前诊断和遗传咨询，减少出生缺陷。2、基于上述发现，将检测DNAAF5基因第5、9号外显子的试剂用于制备诊断试剂盒，用于诊断Kartagener综合征。附图说明附图1：先证者影像学表现。附图2：KS家系图。附图3：KS家系基因测序比对图。1代表先证者，2代表先证者妻子，3代表先证者弟弟，4代表先证者父亲，5代表先证者母亲，6代表先证者姐姐，7代表先证者妹妹。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术提供的具体实施方式作详细说明。实施例1一、资料与方法1.临床资料先证者(图2中II:3)：男性，汉族，30岁，因婚后3年未育来我院门诊就诊。先证者自幼出现长期慢性咳嗽、咯黄白色痰，痰量较多，易咳出，先后因“双侧肺囊肿伴感染”行左叶、右叶肺叶切除术；长期鼻塞，鼻音重，流黄脓色鼻涕，鼻涕量较多，鼻内镜检测是双侧鼻息肉，先后两次行鼻息肉摘除术，现鼻腔内仍有息肉残留。先证者父亲、母亲、姐姐、弟弟、妹妹均无类似表现。家族无遗传性疾病史，父母非近亲婚配。先证者无嗅觉、视觉、性功能异常，无工业毒物接触史及放射性物质照射史。2.方法2.1基因组DNA制备获得所有家庭成员知情同意后，采集患者及其家系其他健在成员外周静脉血，EDTA抗凝，Dzup基因组DNA抽提试剂盒(上海生工，B518201)提取全家系基因组DNA。TE缓冲液溶解，NanoDropND-1000紫外分光光度计定量备用。2.2PCR扩增DNAAF5基因的第5、9号外显子及临界区域进行引物设计(以GRCh37/h19序列为参考序列)。DNAAF5第5号外显子扩增引物：上游引物：5’TTGAAACTCACAGGTGTCCCTTAAATGTGATG3’(SEQIDNO:1)；下游引物：5’ACGGCCACTTACACTTTGGACC3’(SEQIDNO:2)。DANAF5第9号外显子扩增引物：上游引物：5’GCCCTGCCCTGGGAGAA3’(SEQIDNO:3)；下游引物：5’CCCTGGGAGTTGATGGTGTCC3’(SEQIDNO:4)。对5、9号外显子及其上下游100bp临界区域的DNA进行PCR扩增。反应体系50μl，含100ngDNA；10pmoldNTPs；各20pmol上下游引物；10×PCRBuffer5μl(200mMTris-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测DNAAF5基因的试剂在制备诊断常染色体隐性遗传Kartagener综合征的产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测DNAAF5基因的试剂在制备诊断常染色体隐性遗传Kartagener综合征的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的产品为诊断试剂或诊断试剂盒。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的产品检测DNAAF5基因第5号外显子和第9号外显子。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的产品检测DNAAF5基因第5号外显子错义突变和第9号外显子框移突变。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的产品采用了PCR技术，第5号外显子扩增的上游引物序列如SEQIDNO:1所示，第5号外显子扩增的下游引物序列如SEQIDNO:2所示，第9号外显子扩增的上游引物序列如SEQIDNO:3所示，第9号外显子扩增的下游引物序列如SEQIDNO:4所示。6.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：李铮，顾本宏，朱子珏，赵亮宇，汪小波，薛云婧，
申请(专利权)人：上海市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：上海,31