一种人肌母细胞外泌体的制备方法、产品及其应用技术

本发明专利技术属于皮肤细胞损伤修护技术领域，更具体地，涉及一种人肌母细胞外泌体的制备方法、产品及其应用。通过在特定的温度以及分离条件下，采用多阶段递增离心的方式执行3次以上的离心去除沉淀，直至获得所需的人肌肉细胞外泌体产品，制备方法简单易行。本发明专利技术提供的人肌母细胞外泌体来源于人肌母细胞，含有脂质、蛋白质、mRNA及miRNA等多种生物活性物质，对皮肤日常维护和损伤具有明显促修复作用，肌母细胞外泌体制作成冻干粉，便于储存和运输，亦可制作成各种护肤品或药物制剂使用，为人肌母细胞外泌体对皮肤保养和皮肤损伤修复提供可能。

【技术实现步骤摘要】
一种人肌母细胞外泌体的制备方法、产品及其应用
本专利技术属于皮肤细胞损伤修护
，更具体地，涉及一种人肌母细胞外泌体的制备方法、产品及其应用。
技术介绍
皮肤老化和皮肤粘膜损伤在日常生活极为常见，创面可大可小，可深可浅，损伤部位各不相同。目前大面积的皮肤损伤治疗主要通过全身支持治疗、创面的清理及结痂切除和外科植皮等方法，传统的治疗方法虽然有一定效果但存在皮源紧张、易感染和巨大疤痕形成等问题。近年来，细胞治疗皮肤粘膜损伤的医学研究得到广泛关注，特别是干细胞可以通过分化为皮肤细胞、汗腺细胞和旁分泌促进皮肤创伤的修复，在皮肤粘膜损伤修复中具有临床应用前景。然而，干细胞植入体内后定向分化仍有许多问题需要解决，长期应用安全性(如癌变、骨化等)问题不容乐观，而且活细胞的使用存在储存和运输困难等问题，因此寻找能够替代干细胞在组织损伤修复中起作用的细胞制品或细胞因子显得十分迫切。外泌体最早发现于体外培养的绵羊红细胞上清液中，是细胞主动分泌的直径在40-100nm，密度在1.10-1.18g/ml的囊泡小体。不同细胞分泌的外泌体具有不同的组成成分和功能，因此外泌体在多种疾病中扮演生物标志物的角色。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人肌母细胞外泌体的制备方法，其特征在于，该方法采用人肌母细胞作为外泌体的来源，将人肌母细胞分化培养的上清液通过递增离心的方式执行3次以上的多步离心分离操作，直至获得所需的外泌体产品。

【技术特征摘要】
1.一种人肌母细胞外泌体的制备方法，其特征在于，该方法采用人肌母细胞作为外泌体的来源，将人肌母细胞分化培养的上清液通过递增离心的方式执行3次以上的多步离心分离操作，直至获得所需的外泌体产品。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，对于所述多步离心分离操作而言，其优选采用以下过程来实现：S10、在0℃～4℃的温度下，将人肌母细胞分化培养的上清液在300g～3000g的离心力条件下离心10min～30min，去除沉淀并收集获得第一上清液A；S20、在保持恒温的情况下，将该第一上清液A在10000g～12000g的离心力条件下继续离心60min～200min，去除沉淀并收集获得第二上清液B；S30、在保持恒温的情况下，将该第二上清液B在100000g～120000g的离心力条件下继续离心120min以上，然后收集沉淀且将其作为最终制备的人肌母细胞外泌体产品。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，对于所述多步离心分离操作而言，其进一步优选采用以下过程来实现：S101、在0℃～4℃的温度下，将人肌母细胞分化培养的上清液首先在300g～500g的第一离心力下离心5min～30min，去除沉淀并收集获得上清液A1；S102、接着将该上清液A1在2000g～3000g的第二离心力下离心10min～40min，去除沉淀并收集获得所述第一上清液A；S201、在保持恒温的情况下，将该上清液A在10000g～12000g的第三离心力条件下继续离心60min～100min，去除沉淀并收集获得上清液B1；S202、接着在保持温度和第三离心力条件不变的情况下，对该上清液B1继续离心60min～100min，去除沉淀并收集获得所述第二上清液B；S301、在保持恒温的情况下，首先将该第二上清液B采用孔径为0.22μm以下的无菌滤膜执行过滤；S302、接着在保持恒温的条件下，将执行过滤后的所述第二上清液B继续在100000g～120000g的第四离心力条件下离心60min～120min，弃上清液，收集沉淀；S303、向步骤S302...

【专利技术属性】
技术研发人员：敖明章，余龙江，谭强，刘伟图，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42