一种人唾液腺腺样囊性癌癌相关成纤维细胞系CAF-SA的建立方法及其应用技术

本发明专利技术构建了一种唾液腺腺样囊性癌癌相关成纤维细胞系，该细胞系的构建为唾液腺腺样囊性癌研究及抗肿瘤药物开发提供了研究基础。该细胞系的构建主要采用多次的有限稀释法筛选稳定细胞株，通过细胞免疫荧光鉴定，上皮细胞标记物Cytokeratin spectrum阴性，间质细胞标记物Vimentin阳性，同时高表达癌相关成纤维细胞的多种生物标记物FAP、FSP‑1。该细胞系被证明可连续传代培养40代以上。通过划痕实验、Transwell小室侵袭实验、微流控芯片诱导实验、小管形成实验及裸鼠皮下移植瘤实验验证该细胞系在唾液腺腺样囊性癌研究中的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种人唾液腺腺样囊性癌癌相关成纤维细胞系CAF-SA的建立方法及其应用
本专利技术属于细胞培养领域，具体提供一种人唾液腺腺样囊性癌来源的癌相关成纤维细胞系及其构建方法，并提出细胞系的应用价值。
技术介绍
1.唾液腺腺样囊性癌唾液腺腺样囊性癌(Salivaryadenoidcysticcarcinoma，简称SACC)占口腔颌面部恶性肿瘤的27％，好发于腮腺及舌下腺。SACC病程发展缓慢，主要致死原因为SACC的嗜神经侵袭及远端器官转移。2.肿瘤微环境肿瘤的发生发展受到多种因素的调控，其中肿瘤微环境作为重要的调控因素得到深入研究。肿瘤微环境指肿瘤细胞、间质细胞、可溶性细胞因子等及其周围的细胞外基质包裹共同形成的微环境。肿瘤微环境中存在多种类型的间质细胞，包括成纤维细胞、癌相关成纤维细胞、血管内皮细胞、骨髓来源的间充质干细胞及免疫细胞。其中癌相关成纤维细胞是较为重要的细胞类型。3.癌相关成纤维细胞的来源及研究现状3.1癌相关成纤维细胞(Carcinoma-associatedfibroblasts，简称CAFs)，通过激活自分泌及旁分泌信号，参与肿瘤的侵袭转移。CAFs来源广泛，主要包括本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人唾液腺腺样囊性癌癌相关成纤维细胞系CAF‑SA，其特征在于，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:C201745。

【技术特征摘要】
1.一种人唾液腺腺样囊性癌癌相关成纤维细胞系CAF-SA，其特征在于，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNO:C201745。2.一种人唾液腺腺样囊性癌癌相关成纤维细胞系CAF-SA的建立，其特征在于，包括以下步骤：(1)原代细胞CAF-A1传代培养至第10代时，通过多次有限稀释法筛选单细胞并克隆培养形成细胞系；(2)经过细胞免疫荧光实验检查人唾液腺腺样囊性癌来源的癌相关成纤维细胞标记物Vimentin、FAP、FSP-1、α-SMA的表达。3.如权利要求2所述人唾液腺腺样囊性癌癌相关成纤维细胞系CAF-SA的构建，其特征在于，步骤(1)的具体方法为：(a)原代提取细胞连续培养至第10代，消化并进行细胞计数，以200个细胞为初始接种至96孔板第一个孔；(b)通过有限稀释法，逐步将细胞等比稀释，依次接种至下一个孔内，以此类推；(c)等比稀释后标记单一细胞培养孔，并连续...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘婷姣，孔晶，
申请(专利权)人：大连医科大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21