一种番石榴叶中化学成分的鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种番石榴叶中化学成分的鉴定方法，包括如下步骤：采用乙醇溶液对番石榴叶粉末进行浸提，用微孔滤膜滤去残渣后收集提取液；得到的提取液采用超高效液相色谱法进行分离，得到不同馏分；采用飞行时间质谱法采集数据，结合目标化合物的一级质谱、二级质谱、同位素分布和化合物裂解规律进行化学成分的鉴定。本发明专利技术的鉴定方法，采用有机溶剂沉淀法浸提提取番石榴叶中化学成分，处理简单，操作简便，无需繁琐的提取步骤；采用超高效液相色谱法对番石榴叶的化学成分进行分离，极大提高了化学成分的纯度和鉴定的效率，检测时间短，检测限、精密度和回收率方面的效果优良；采用质谱法采集数据，灵敏度高，准确性强。

A method for identification of chemical constituents in leaves of guava

The invention discloses a method for identifying chemical constituents in guava leaves, which comprises the following steps: extracting guava leaf powder with ethanol solution, collecting the extract after removing residue by microporous filter membrane, separating the extract by ultra-high performance liquid chromatography, and obtaining different fractions; and using time-of-flight quality. Data were collected by spectroscopy, and chemical components were identified by first-order mass spectrometry, second-order mass spectrometry, isotope distribution and decomposition rule of the target compounds. The identification method of the invention adopts the organic solvent precipitation method to extract the chemical constituents in guava leaves, which is simple to handle, simple to operate and does not need complicated extraction steps. The chemical constituents of guava leaves are separated by the ultra-high performance liquid chromatography method, and the purity and identification efficiency of the chemical constituents are greatly improved. Short time, good detection limit, precision and recovery. Data acquisition by mass spectrometry has high sensitivity and accuracy.

【技术实现步骤摘要】
一种番石榴叶中化学成分的鉴定方法
本专利技术属于番石榴叶加工领域，尤其涉及一种番石榴叶中化学成分的鉴定方法。
技术介绍
番石榴叶为桃金娘科番石榴属植物番石榴的干燥叶，其中化学成分以多酚类、黄酮和三萜类物质为主，药理研究表明具有降血糖、降血脂、抗病毒、抑菌等活性作用。这些化学活性成分具有抗氧化、预防或抑制肿瘤、抗菌、抗动脉粥样硬化、降血脂、预防或治疗冠心病和中风等心脑血管疾病的生理功效。因此，借助各种技术手段从番石榴叶中提取和鉴定生物活性物质已成为目前的研究热点。目前，植物多酚、黄酮和三萜类物质的测定方法主要有分光光度法(UV)、高效液相色谱(HPLC)、液质联用(LC-MS)、高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)。但是这些方法不能快速准确地测定所有的对象，都具有一定的局限性。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，克服以上
技术介绍
中提到的不足和缺陷，提供一种快速测定番石榴叶中所有化学成分的鉴定方法。为解决上述技术问题，本专利技术提出的技术方案为提供一种番石榴叶中化学成分的鉴定方法，包括如下步骤：(1)采用乙醇溶液对番石榴叶粉末进行浸提，用微孔滤膜滤去残渣后收集提取液；(2)将所述步骤(1)后得到的提取液采用超高效液相色谱法进行分离，得到不同馏分；(3)将所述步骤(2)后得到的不同馏分采用飞行时间质谱法采集数据，结合目标化合物的一级质谱、二级质谱、同位素分布和化合物裂解规律进行化学成分的鉴定。超高效液相色谱与飞行时间质谱联用(UPLC/Q-TOF-MS/MS)技术作为一种新型的分析技术可以提供良好的分离效果，具有高分辨、高灵敏的定性能力和强大的结构表征能力。本专利采用UPLC/Q-TOF-MS/MS技术，鉴定了番石榴叶的化学成分及阐释其药效物质研究提供依据。与传统的测定方法相比较，这种技术具有无溶剂残留、不会分解和破坏番石榴叶中天然活性成分以及热不稳定成分等优点，还能快捷、准确、较全面地鉴定番石榴叶中的化学成分。相较于其他分离方法，准确度超高，分离范围广，它对番石榴叶中化合物的结构破坏性小。具有其他方法无可比拟的灵敏度，对于未知化合物的结构分析定性十分准确，对相应的标准样品要求也比较低。上述的鉴定方法，优选的，所述步骤(1)中，乙醇溶液与番石榴叶粉末的液固比为(10～50)mL∶1g，浸提温度为55-95℃，浸提时间为1.0-3.0h，乙醇溶液的体积浓度为50-90％，微孔滤膜的过滤孔径为0.20-0.24mm。乙醇作溶剂浸提番石榴叶化学成分时分离得到的峰数较多，而且相比甲醇，有更好地溶解性和挥发性等分离性质，有利于它的去除和后续的物质鉴定。优选的，所述步骤(1)中，乙醇溶液与番石榴叶粉末的液固比为10～30mL∶1g，浸提温度为60～90℃，浸提时间为1.0～3.0h，乙醇溶液的体积浓度为60～90％，微孔滤膜的过滤孔径为0.22mm。优选的，所述步骤(2)中，采用超高效液相色谱法进行分离的具体操作包括如下步骤：采用安捷伦SB-C8色谱柱，以体积浓度为0.1％的甲酸水溶液和甲酸甲醇为流动相进行梯度洗脱，体积流量为0.2～0.4mL/min，进样体积为4～6μL。优选的，所述安捷伦SB-C8色谱柱的规格为150mm×4.6mm，3.5μm。番石榴叶中的多酚、黄酮和三萜类物质主要为弱极性物质。C8色谱柱极性要强于C18，C18对弱极性物质保留能力不强，因此为了更好地分离番石榴叶化学成分，我们采用C8色谱柱。优选的，所述梯度洗脱是以0.1％甲酸水-甲酸甲醇为流动相，进行梯度洗脱：0～1.5min，5％的甲酸甲醇；1.5～5min，5％～20％的甲酸甲醇；5～15min，20％～40％的甲酸甲醇；15～30min，40％～70％的甲酸甲醇；30～34min，70％～90％的甲酸甲醇；34～37min，90％的甲酸甲醇；37～40min，90％～95％的甲酸甲醇。流动相中加入少量的酸，如0.1％甲酸水溶液能有效的改善峰形及离子化效果。优选的，所述步骤(3)中，采用飞行时间质谱法采集数据的具体操作包括如下步骤：采用电喷雾离子化源为离子源，在正离子模式下扫描不同馏分采集数据，质量数扫描范围为m/z100～1500，离子喷雾电压为(ESI+)+5000V，去簇电压为±100V，雾化气温度为600℃，气帘气为212.36KPa，雾化气为379.74KPa，辅助气为379.74KPa。更优选的，所述采集数据是采用超高效液相色谱仪联用数据非依赖采集串联飞行时间质谱(TOF-MS-IDA-MS/MS)方法采集数据，飞行时间质谱(TOF/MS)一级预扫描和触发的二级扫描飞行时间质谱联用(TOF/MS/MS)离子累积时间分别为200、100ms，碰撞能量为±70eV，碰撞能量叠加为±(70±15)eV，m/z80～1600。更优选的，触发二级的方法为数据非依赖采集(IDA)，多重质量亏损和动态背景扣除为触发二级的条件，满足该条件的优先进行二级扫描。优选的，所述目标化合物的一级质谱、二级质谱、同位素分布和化合物裂解规律通过番石榴的SciFinder数据库(或通过其他文献检索)得到。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术的鉴定方法，采用有机溶剂沉淀法浸提提取番石榴叶中化学成分，处理简单，操作简便，无需繁琐的提取步骤；采用超高效液相色谱法对番石榴叶的化学成分进行分离，极大提高了化学成分的纯度和鉴定的效率，检测时间短，检测限、精密度和回收率方面的效果优良；采用质谱法采集数据，灵敏度高，准确性强。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是本专利技术实施例1中番石榴叶醇提成分(+)ESI-MS的质谱总离子流图。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下文将结合说明书附图和较佳的实施例对本专利技术做更全面、细致地描述，但本专利技术的保护范围并不限于以下具体实施例。除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本专利技术的保护范围。除非另有特别说明，本专利技术中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。实施例1：一种本专利技术的番石榴叶中化学成分的鉴定方法，包括如下步骤：(1)称取番石榴叶粉末分别置于150mL锥形瓶中，采用体积浓度为60％的乙醇溶液对番石榴叶粉末进行浸提，乙醇溶液与番石榴叶粉末的液固比为20mL∶1g，浸提温度为85℃，浸提时间为2.0h，用过滤孔径为0.22mm的微孔滤膜滤去残渣后收集提取液；在此工艺条件下，番石榴叶中多酚、黄酮及萜类物质的提取率分别是22.20％、6.54％和1.04％；(2)将所述步骤(1)后得到的提取液采用超高效液相色谱法进行分离，超高效液相色谱法是采用安捷伦SB-C8色谱柱(规格150mm×4.6mm，3.5μm)，以体积浓度为0.1％的甲酸水溶液和甲酸甲醇为流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱的程序如下：0～1.5min，5％的甲酸甲醇；1.5～5min，5％～本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种番石榴叶中化学成分的鉴定方法，包括如下步骤：(1)采用乙醇溶液对番石榴叶粉末进行浸提，用微孔滤膜滤去残渣后收集提取液；(2)将所述步骤(1)后得到的提取液采用超高效液相色谱法进行分离，得到不同馏分；(3)将所述步骤(2)后得到的不同馏分采用飞行时间质谱法采集数据，结合目标化合物的一级质谱、二级质谱、同位素分布和化合物裂解规律进行化学成分的鉴定。

【技术特征摘要】
1.一种番石榴叶中化学成分的鉴定方法，包括如下步骤：(1)采用乙醇溶液对番石榴叶粉末进行浸提，用微孔滤膜滤去残渣后收集提取液；(2)将所述步骤(1)后得到的提取液采用超高效液相色谱法进行分离，得到不同馏分；(3)将所述步骤(2)后得到的不同馏分采用飞行时间质谱法采集数据，结合目标化合物的一级质谱、二级质谱、同位素分布和化合物裂解规律进行化学成分的鉴定。2.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤(1)中，乙醇溶液与番石榴叶粉末的液固比为(10～50)mL∶1g，浸提温度为55-95℃，浸提时间为1.0-3.0h，乙醇溶液的体积浓度为50-90％，微孔滤膜的过滤孔径为0.20-0.24mm。3.根据权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤(1)中，乙醇溶液与番石榴叶粉末的液固比为10～30mL∶1g，浸提温度为60～90℃，浸提时间为1.0～3.0h，乙醇溶液的体积浓度为60～90％，微孔滤膜的过滤孔径为0.22mm。4.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤(2)中，采用超高效液相色谱法进行分离的具体操作包括如下步骤：采用安捷伦SB-C8色谱柱，以体积浓度为0.1％的甲酸水溶液和甲酸甲醇为流动相进行梯度洗脱，体积流量为0.2～0.4mL/min，进样体积为4～6μL。5.根据权利要求4所述的鉴定方法，其特征在于，所述安捷伦SB-C8色谱柱的规格为150mm×4.6mm，3.5μm。6.根据权利要求4所述的鉴定方法，其特征在于，所述梯度洗脱是以0.1％甲酸水-甲酸甲醇...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡芳，曾伟民，彭玙萍，周智广，吴学玲，李交昆，申丽，余润兰，刘元东，谢志国，邱冠周，
申请(专利权)人：中南大学湘雅二医院，中南大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43