一种检验柠檬黄染色蒲黄的检测方法技术

一种检验柠檬黄染色蒲黄的检测方法，属于药品检测技术领域，通过多次实验探索研究之后筛选出来的能够达到准确度高、精密度高、检出限低、稳定性好等目的。本发明专利技术扩大了对中药蒲黄的非法染色检测范围，可以更好地保证中药的质量安全，为蒲黄非法染色的检测提供技术储备；同时采用薄层色谱、高效液相色谱、液质联用技术，操作简单、检测效率高、准确度高、精密度高，且具有良好的稳定性和重现性；便于中药生产企业，中药检验部门能够准确判断蒲黄是否存在柠檬黄染色问题。

A test method for testing citrus yellow cattail pollen

The invention relates to a detection method for Typhae dyed with lemon yellow, which belongs to the field of drug detection technology, and can achieve the purposes of high accuracy, high precision, low detection limit and good stability after many experiments and explorations. The invention enlarges the detection range of illegal dyeing of Typha Typhae, can better guarantee the quality and safety of traditional Chinese medicine, and provides technical reserves for the detection of illegal dyeing of Typhae Typhae; at the same time, TLC, high performance liquid chromatography, liquid chromatography-mass spectrometry technology is adopted, which has the advantages of simple operation, high detection efficiency, high accuracy and high precision. It has good stability and reproducibility. It is convenient for Chinese medicine manufacturers and Chinese medicine inspection departments to accurately determine whether there is lemon yellow dyeing problem in Typha.

【技术实现步骤摘要】
一种检验柠檬黄染色蒲黄的检测方法
本专利技术属于药品检测
，特别是涉及到一种中药材蒲黄中柠檬黄色素染色的检测方法。
技术介绍
柠檬黄，又称酒石黄、酸性淡黄、肼黄。化学名称为1-(4-磺酸苯基)-4-(4-磺酸苯基偶氮)-5-吡唑啉酮-3-羧酸三钠盐，为水溶性合成色素。呈鲜艳的嫩黄色，是单色品种。多用于食品、饮料、化妆品、饲料、烟草、玩具、食品包装材料等的着色，也用于羊毛、蚕丝的染色。用色素对中药蒲黄进行染色是近年来一些不法商贩常采用的对不合格样品处理的方法，由于利益的驱动，他们将蒲黄植物经的非药用部位粉碎成与蒲黄性状相似的粉末状，用色素染成黄色，或掺入淀粉、泥沙等再用色素染成黄色，冒充蒲黄进行销售。由于使用的色素成分不是蒲黄应有的成分，给广大患者用药安全带来一定风险。蒲黄染色过去多用化工原料金胺O，但由于近年来药监部门加大了中药非法染色的打击力度，金胺O染色现象有所减少，但仍有一些不法商贩将蒲黄伪品用柠檬黄非法染色。因此现有技术当中亟需要一种新型的技术方案来解决这一问题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是：提供一种检验柠檬黄染色蒲黄的检测方法，以便于中药生产企业，中药检验部门能够准确判断蒲黄是否存在柠檬黄染色问题。一种检验柠檬黄染色蒲黄的检测方法，其特征是：包括以下步骤，且以下步骤顺次进行，步骤一、取待测粉末2g，称定后加入浓度为70％的乙醇溶液20ml，超声处理20分钟，静止自然冷却，加入浓度为70％的乙醇溶液补足超声处理减失的重量，离心后取上清液作为供试品溶液；步骤二、取对照试剂柠檬黄2g，加入浓度为70％的乙醇溶液，制备为每1ml溶液含0.5mg对照试剂的溶液，作为照品溶液；步骤三、取供试品溶液10μl～20μl，照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，采用体积分数比为1：3：3：1：1的乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水溶液为展开剂展开，取出晾干，观察样品色谱中，在与对照试剂色谱相对应的位置上的斑点颜色；步骤四、斑点颜色相同，采用高效液相色谱法验证A、对照试剂溶液的制备称取对照试剂柠檬黄2g，加入浓度为70％的乙醇溶液，制备为每1ml溶液含25μg对照试剂的溶液，摇匀，作为对照试剂溶液；B、样品溶液的制备称取蒲黄药材粉末2g，加入浓度为70％的乙醇溶液20ml，超声处理20分钟，静止自然冷却，加入浓度为70％的乙醇溶液补足超声处理减失的重量，离心后取上清液作为样品溶液；C、测定结果分析分别取样品溶液和对照试剂溶液各10μl，注入液相色谱仪测定，测定结果中出现色谱峰与对照试剂保留时间不同，测定结束；测定结果中出现色谱峰与对照试剂保留时间相同，采用二极管阵列检测器对比相应色谱峰在200nm～600nm波长范围的紫外可见吸收光谱,光谱不同，测定结束；步骤五、采用高效液相色谱与质谱联用进行进一步测定选择250mm色谱柱，采用乙腈-0.02mol/L醋酸流动相系统，质谱检测结果通过吸收光谱在400nm～450nm为最大吸收峰判定。所述步骤四中高效液相色谱法的色谱条件为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇和0.02mol/L的乙酸铵溶液为流动相，仪器为二极管阵列检测器，检测波长为428nm。所述步骤五中质谱检测的扫描方式为二级质谱负离子模式，雾化气为氮气，雾化气压力为35.00psi，毛细管电压为-126.2volt，干燥气温度为350℃，干燥气流速为12.00l/min，母离子扫描范围为466.7m/z，子离子扫描范围170m/z～400m/z。通过上述设计方案，本专利技术可以带来如下有益效果：一种检验柠檬黄染色蒲黄的检测方法，能够达到准确度高、精密度高、检出限低、稳定性好等目的。本专利技术的进一步有益效果在于：1、本专利技术所述的一种柠檬黄染色蒲黄的检测方法，扩大了对中药蒲黄的非法染色检测范围，可以更好地保证中药的质量安全，为蒲黄非法染色的检测提供技术储备；2、本专利技术所述的一种柠檬黄染色蒲黄的检测方法，采用薄层色谱、高效液相色谱、液质联用技术，操作简单、检测效率高、准确度高、精密度高，且具有良好的稳定性和重现性。具体实施方式一种检验柠檬黄染色蒲黄的检测方法，包括以下步骤，a)样品溶液的制备：取蒲黄药材粉末2g，精密称定，精密加入70％乙醇20ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，用70％乙醇补足减失的重量，离心，取上清液作为供试品溶液。b)对照品溶液的制备：取柠檬黄对照试剂适量，加70％乙醇制成每lml各含0.5mg的溶液，作为对照试剂溶液。c)取样品溶液10～20μl，对照试剂溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水(1：3：3：1：1)为展开剂，展开，取出，晾干。样品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。若上述步骤结束后显现的斑点颜色相同，则采用下述高效液相色谱法验证：a)色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，0.02mol/L的乙酸铵溶液为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱：采用二极管阵列检测器，检测波长为428nm(柠檬黄)。理论塔板数按柠檬黄峰计算，应不低于2000。表1梯度洗脱流动相比例b)对照试剂溶液的制备：精密称取柠檬黄对照试剂适量，加70％乙醇制成每lml含25μg的溶液，摇匀，作为对照试剂溶液。c)样品溶液的制备：取蒲黄药材粉末2g，精密称定，精密加入70％乙醇20ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，用70％乙醇补足减失的重量，离心，取上清液作为供试品溶液。d)分别精密吸取样品溶液与对照试剂溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。e)样品色谱中，应不得出现与对照试剂保留时间相同的色谱峰。若出现保留时间相同的色谱峰，采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰在200～600nm波长范围的紫外一可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。若出现上述方法检验结果不易判断时，可采用高效液相色谱-质谱联用方法进一步验证：a)采用高效液相色谱-质谱联用方法进一步验证,建议采用乙腈-0.02mol/L醋酸流动相系统。b)因柠檬黄保留较弱，建议采用250mm规格色谱柱，DAD检测以吸收光谱在428nm附近是否出现最大吸收峰为主要判断依据。c)质谱检测参数：扫描方式：二级质谱负离子模式；雾化气：氮气；雾化气压力：35.00psi；毛细管电压：-126.2volt；干燥气温度：350℃；干燥气流速：12.00l/min；母离子m/z466.7；子离子扫描范围m/z170～400。对实施例中所述检测方法进行方法学验证试验如下：1、薄层色谱法(1)提取方法的选择通过对不同提取方法的考察得出，样品中加入甲醇、70％乙醇20ml，密塞，超声处理20分钟，均可以将柠檬黄提出，回流提取比超声提取得到的柠檬黄少，容易误判。因此我们采用正文所述的供试品溶液的制备方法即“取蒲黄药材粉末2g，加70％乙醇20ml，密塞，超声处理20分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。”的方法。(2)薄层板的选择通过对硅胶G薄层板与硅胶G高效薄层板的点样、展开，观察，均能得到很好的分离效果。(3)点样量的选择对照试剂溶液(0.2mg/ml)点样量采用5μl，供试品溶液分别点样5μl、10μl、20μl，展开，经过比较，确定供试品溶液点样量10～20本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检验柠檬黄染色蒲黄的检测方法，其特征是：包括以下步骤，且以下步骤顺次进行，步骤一、取待测粉末2g，称定后加入浓度为70％的乙醇溶液20ml，超声处理20分钟，静止自然冷却，加入浓度为70％的乙醇溶液补足超声处理减失的重量，离心后取上清液作为供试品溶液；步骤二、取对照试剂柠檬黄2g，加入浓度为70％的乙醇溶液，制备为每1ml溶液含0.5mg对照试剂的溶液，作为照品溶液；步骤三、取供试品溶液10μl～20μl，照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，采用体积分数比为1：3：3：1：1的乙酸乙酯‑正丁醇‑乙醇‑氨水‑水溶液为展开剂展开，取出晾干，观察样品色谱中，在与对照试剂色谱相对应的位置上的斑点颜色；步骤四、斑点颜色相同，采用高效液相色谱法验证A、对照试剂溶液的制备称取对照试剂柠檬黄2g，加入浓度为70％的乙醇溶液，制备为每1ml溶液含25μg对照试剂的溶液，摇匀，作为对照试剂溶液；B、样品溶液的制备称取蒲黄药材粉末2g，加入浓度为70％的乙醇溶液20ml，超声处理20分钟，静止自然冷却，加入浓度为70％的乙醇溶液补足超声处理减失的重量，离心后取上清液作为样品溶液；C、测定结果分析分别取样品溶液和对照试剂溶液各10μl，注入液相色谱仪测定，测定结果中出现色谱峰与对照试剂保留时间不同，测定结束；测定结果中出现色谱峰与对照试剂保留时间相同，采用二极管阵列检测器对比相应色谱峰在200nm～600nm波长范围的紫外可见吸收光谱,光谱不同，测定结束；步骤五、采用高效液相色谱与质谱联用进行进一步测定选择250mm色谱柱，采用乙腈‑0.02mol/L醋酸流动相系统，质谱检测结果通过吸收光谱在400nm～450nm为最大吸收峰判定。...

【技术特征摘要】
1.一种检验柠檬黄染色蒲黄的检测方法，其特征是：包括以下步骤，且以下步骤顺次进行，步骤一、取待测粉末2g，称定后加入浓度为70％的乙醇溶液20ml，超声处理20分钟，静止自然冷却，加入浓度为70％的乙醇溶液补足超声处理减失的重量，离心后取上清液作为供试品溶液；步骤二、取对照试剂柠檬黄2g，加入浓度为70％的乙醇溶液，制备为每1ml溶液含0.5mg对照试剂的溶液，作为照品溶液；步骤三、取供试品溶液10μl～20μl，照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，采用体积分数比为1：3：3：1：1的乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水溶液为展开剂展开，取出晾干，观察样品色谱中，在与对照试剂色谱相对应的位置上的斑点颜色；步骤四、斑点颜色相同，采用高效液相色谱法验证A、对照试剂溶液的制备称取对照试剂柠檬黄2g，加入浓度为70％的乙醇溶液，制备为每1ml溶液含25μg对照试剂的溶液，摇匀，作为对照试剂溶液；B、样品溶液的制备称取蒲黄药材粉末2g，加入浓度为70％的乙醇溶液20ml，超声处理20分钟，静止自然冷却，加入浓度为70％的乙醇溶液补足超声处理减失的重量，离心后取上清液作为样品溶液；C、测定结果分...

【专利技术属性】
技术研发人员：耿代云，杨志伟，郑喜红，孙振学，范纯玲，石鑫磊，
申请(专利权)人：松原市食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：吉林,22