一种基于HPLC-MSMS法测定氰霜唑及其代谢物残留量的方法技术

本发明专利技术所述基于HPLC‑MSMS法测定氰霜唑及其代谢物残留量的方法，利用分散固相萃取技术，建立了简便、快速并能有效避免样品中基质干扰的样品前处理方法，将此前处理方法结合HPLC‑MS/MS应用于马铃薯和土壤中氰霜唑及其代谢物CCIM的定性确证和定量检测中，能够快速的进行氰霜唑及其代谢物CCIM残留量的检测，整个方法的回收率较高，重复性好，且平均回收率达到86.1‑98.2％，平均相对标准偏差(RSD)为2.0‑6.9％，检出限低于1.5μg/kg，具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点；并且能满足美国、日本、欧盟、国际食品法典委员会(CAC)等相对应食品安全检测的0.02、0.05、0.01、0.01mg/kg残留限量，将为保障我国人民食品安全及对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。

A method for determination of cyanoprazole and its metabolites residues based on HPLC-MSMS method

Based on the method of determining cyanofrozen azole and its metabolite residues by HPLC MSMS, a simple, rapid and effective sample pretreatment method was established by using dispersed solid phase extraction technology. The method combined with HPLC MS/MS was applied to potato and soil cyanofrozen azole and its metabolism. In the qualitative confirmation and quantitative detection of CCIM, the method can rapidly detect the residues of cyanfrozole and its metabolite CCIM. The recovery rate of the whole method is high, the repeatability is good, and the average recovery rate is 86.1 98.2%, the average relative standard deviation (RSD) is 2.0 6.9%, and the detection limit is less than 1.5 ug/kg. The method is simple, easy to operate and has good repeatability. It has the advantages of rapidity, accuracy, high sensitivity and good repeatability, and can meet the 0.02, 0.05, 0.01 and 0.01mg/kg residue limits of food safety detection in the United States, Japan, the European Union and the International Codex Alimentarius Commission (CAC), which will provide powerful technology for guaranteeing the food safety of our people and the healthy development of export trade. Support.

【技术实现步骤摘要】
一种基于HPLC-MSMS法测定氰霜唑及其代谢物残留量的方法
本专利技术属于农药残留量检测
，具体涉及一种基于HPLC-MSMS法测定氰霜唑及其代谢物(CCIM)残留量的方法。
技术介绍
近年来，以马铃薯疫病和葡萄霜霉病为代表的卵菌性病害迅速发展，给农业生产带来了巨大损失，另一方面，此类病原菌的抗性菌不断发展也成为妨碍其药性的一个大问题，使得常规药剂很难防治。氰霜唑(cyazofamid)，商品名为科佳，其化学名称为4-氯-2-氰基-N,N-二甲基-5-对甲苯基咪唑-1-磺酰胺，英文化学名称为4-chloro-2-cyano-n,n-dimethyl-5-p-tolylimidazole-1-sulfonamide，CAS登录号为120116-88-3，分子量为324.786，是由日本石原株式会社研制，并与BASF共同开发的新一代苯基咪唑类杀菌剂，主要用于防治晚疫病、霜霉病、疫病等病害。氰霜唑由于作用机理独特，且活性高、又无交互抗性，能有效阻碍病原菌孢子萌发至孢子囊形成的各个生育阶段，进而有效的抑制病原菌的基数，从而达到预防和控制病害蔓延的目的。研究发现，氰霜唑在使用后会迅速分解成4-氯-5-(4-甲苯基)-1H-咪唑-2-腈(CCIM)、4-氯-5-(4-甲苯基)-1H-咪唑-2-甲酰胺(CCIM-AM)和4-氯-5-(4-甲苯基)-1H-咪唑-2-羧酸(CCTA)等多个代谢产物。其中4-氯-5-(4-甲苯基)-1H-咪唑-2-腈(CCIM)是氰霜唑在植物体内的主要降解产物，并且与氰霜唑相比具有更高的毒性，其在农产品中的残留可能会带来更高的膳食摄入风险。因此，我国《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》(GB2763-2016)中规定，氰霜唑的残留定义为氰霜唑和CCIM残留量之和，并要求在进行市场监测时，应同时检测氰霜唑和CCIM的残留量，并基于此进行安全性评价。但由于目前尚缺乏对CCIM标准分析的方法，使得《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》(GB2763-2016)中只对其制订了临时限量。目前，国内尚无对于马铃薯和土壤中氰霜唑及其代谢物的残留量进行同时测定的方法。虽然现有文献报道中有过利用液相色谱法、电化学法和液质联用法的报道，但大多数都只测定了母体即氰霜唑的残留量，但并不能同时对其代谢产物CCIM进行测定。因此，亟需开发一种能够同时测定氰霜唑及其代谢物(CCIM)残留量的方法，尤其是马铃薯和土壤中氰霜唑及其代谢物的残留量的测定，对于马铃薯作物的种植而言，具有重要的意义。
技术实现思路
为此，本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种基于HPLC-MSMS法测定氰霜唑及其代谢物(CCIM)残留量的方法，以解决现有技术中无法同时对氰霜唑及其代谢物(CCIM)的残留量进行检测的问题。为解决上述技术问题，本专利技术所述的一种基于HPLC-MSMS法测定氰霜唑及其代谢物残留量的方法，包括如下步骤：(1)取待测样品加入提取溶剂进行涡旋提取，并进行盐析，固液分离并收集滤液，得到供试溶液；(2)取不含氰霜唑及其代谢物CCIM的同种类基质空白样品，加入所述提取溶剂和含氰霜唑及其代谢物CCIM的标准溶液，配制成至少3个浓度的含氰霜唑及其代谢物CCIM的对照溶液；(3)以高效液相色谱串联质谱仪对所述对照溶液和供试溶液进行检测，以外标法计算氰霜唑及其代谢物CCIM的含量。所述步骤(1)中，所述提取溶剂包括乙腈。所述步骤(1)中，所述盐析步骤为加入氯化钠进行处理。所述步骤(1)中，还包括将所得供试溶液过0.22μm滤膜进行净化处理的步骤。所述步骤(3)中，所述高效液相色谱的检测条件包括：色谱柱：Shim-packXR-ODSⅢ色谱柱，150mm×2.0mm，2.2μm；样品室温度：15℃；流动相：体积比为20：80的0.1％甲酸水溶液-乙腈；流速：0.4mL/min；进样量：5μL。所述步骤(3)中，所述质谱检测条件包括：离子源：电喷雾离子源(ESI)；毛细管电压：3.5kV；加热块温度：400℃；干燥气温度：250℃；干燥气流量：15.0L/min；雾化气流量：3.0L/min；反应气(Ar)压力：230kpa。所述步骤(3)中，所述检测步骤包括定性检测和/或定量检测的步骤。所述定性检测具体为：测定所述供试溶液和所述对照溶液时，若所述供试溶液中色谱峰保留时间与所述空白溶液中相应色谱峰保留时间相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且离子丰度比与所述对照溶液的离子丰度比相一致，则可判断所述供试溶液中存在氰霜唑及其代谢物CCIM残留；若上述两个条件不能同时满足，则判断不含氰霜唑及其代谢物CCIM残留。所述定量检测的步骤包括：将各浓度梯度的所述对照溶液进行HPLC-MS/MS测定，以所述对照溶液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；随后将所述供试溶液注入HPLC-MS/MS，在相同条件下测得所述供试溶液中氰霜唑及其代谢物CCIM的色谱峰面积，分别代入所述标准曲线，计算得到所述供试溶液中氰霜唑及其代谢物CCIM的含量。所述待测样品包括马铃薯和/或土壤。本专利技术所述基于HPLC-MSMS法测定氰霜唑及其代谢物残留量的方法，利用分散固相萃取技术，建立了简便、快速并能有效避免样品中基质干扰的样品前处理方法，将此前处理方法结合HPLC-MS/MS应用于马铃薯和土壤中氰霜唑及其代谢物CCIM的定性确证和定量检测中，能够快速的进行氰霜唑及其代谢物CCIM残留量的检测，整个方法的回收率较高，重复性好，且平均回收率达到86.1-98.2％，平均相对标准偏差(RSD)为2.0-6.9％，检出限低于1.5μg/kg，具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点；并且能满足美国、日本、欧盟、国际食品法典委员会(CAC)等相对应食品安全检测的0.02、0.05、0.01、0.01mg/kg残留限量，将为保障我国人民食品安全及对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。附图说明为了使本专利技术的内容更容易被清楚的理解，下面根据本专利技术的具体实施例并结合附图，对本专利技术作进一步详细的说明，其中，图1为氰霜唑(10μg/mL)及其代谢物CCIM(10μg/mL)马铃薯基质标液的HPLC-MS/MS选择离子色谱图；图2为不含氰霜唑及其代谢物CCIM的马铃薯空白样品的HPLC-MS/MS选择离子色谱图；图3为空白马铃薯添加氰霜唑(10μg/mL)其代谢物CCIM(10μg/mL)的HPLC-MS/MS选择离子色谱图；图4为实施例1中氰霜唑的标准工作曲线；图5为实施例1中氰霜唑代谢物CCIM的标准工作曲线；图6为了氰霜唑(10μg/mL)及其代谢物CCIM(10μg/mL)土壤基质标液的HPLC-MS/MS选择离子色谱图；图7为不含氰霜唑及其代谢物CCIM的土壤空白样品的HPLC-MS/MS选择离子色谱图；图8空白土壤添加氰霜唑(10μg/mL)及其代谢物CCIM(10μg/mL)的HPLC-MS/MS选择离子色谱图；图9为实施例2中氰霜唑的标准工作曲线；图10为实施例2中氰霜唑代谢物CCIM的标准工作曲线。具体实施方式本专利技术下述各实施例中使用的仪器与试剂包括：高效液相色谱质谱联用仪LCMS-8030，SHIMADU公本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于HPLC‑MSMS法测定氰霜唑及其代谢物残留量的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取待测样品加入提取溶剂进行涡旋提取，并进行盐析，固液分离并收集滤液，得到供试溶液；(2)取不含氰霜唑及其代谢物CCIM的同种类基质空白样品，加入所述提取溶剂和含氰霜唑及其代谢物CCIM的标准溶液，配制成至少3个浓度的含氰霜唑及其代谢物CCIM的对照溶液；(3)以高效液相色谱串联质谱仪对所述对照溶液和供试溶液进行检测，以外标法计算氰霜唑及其代谢物CCIM的含量。

【技术特征摘要】
1.一种基于HPLC-MSMS法测定氰霜唑及其代谢物残留量的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取待测样品加入提取溶剂进行涡旋提取，并进行盐析，固液分离并收集滤液，得到供试溶液；(2)取不含氰霜唑及其代谢物CCIM的同种类基质空白样品，加入所述提取溶剂和含氰霜唑及其代谢物CCIM的标准溶液，配制成至少3个浓度的含氰霜唑及其代谢物CCIM的对照溶液；(3)以高效液相色谱串联质谱仪对所述对照溶液和供试溶液进行检测，以外标法计算氰霜唑及其代谢物CCIM的含量。2.根据权利要求1所述的基于HPLC-MSMS法测定氰霜唑及其代谢物残留量的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述提取溶剂包括乙腈。3.根据权利要求1或2所述的基于HPLC-MSMS法测定氰霜唑及其代谢物残留量的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述盐析步骤为加入氯化钠进行处理。4.根据权利要求1-3任一项所述的基于HPLC-MSMS法测定氰霜唑及其代谢物残留量的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，还包括将所得供试溶液过0.22μm滤膜进行净化处理的步骤。5.根据权利要求1-4任一项所述的基于HPLC-MSMS法测定氰霜唑及其代谢物残留量的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述高效液相色谱的检测条件包括：色谱柱：Shim-packXR-ODSⅢ色谱柱，150mm×2.0mm，2.2μm；样品室温度：15℃；流动相：体积比为20：80的0.1％甲酸水溶液-乙腈；流速：0.4mL/min；进样量：5μL。6.根据权利要求5所述的基于HPLC-MSMS法测定氰霜唑及其代谢物残留量的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁林，冯义志，张爱娟，潘金菊，齐晓雪，任玉鹏，金杰，李文平，马新刚，韩济峰，
申请(专利权)人：山东省农药科学研究院，
类型：发明
国别省市：山东,37