一种酪胺的高效液相色谱检测方法技术

本发明专利技术公开了一种酪胺的高效液相色谱检测方法，涉及柱色谱法技术领域。色谱条件为：色谱柱：氨基键合硅胶柱；流动相：0.05mol/L磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为35：65；其中，磷酸盐缓冲液的pH值为2.5‑6.0；流速：0.7‑1.0mL/min；检测波长：205‑225nm；色谱柱柱温：25‑40℃；进行高效液相色谱分析，测定转化液中酪胺含量。本发明专利技术方法可快速，准确测定出酪胺的含量，确保其质量可控，减小误差，节约成本，操作简单，出峰时间快，缩短生产过程中的检测时间，准确度高，大大提高了生产效率。

A method for determination of tyramine by high performance liquid chromatography

The invention discloses a method for the detection of tyramine by high performance liquid chromatography, and relates to the technical field of column chromatography. The chromatographic conditions were as follows: column: amino-bonded silica gel; mobile phase: 0.05 mol/L phosphate buffer and acetonitrile volume ratio of 35:65; in which the pH value of phosphate buffer was 2.5 6.0; flow rate: 0.7 1.0 mL/min; detection wavelength: 205 225 nm; column temperature: 25 40; C; for high performance liquid chromatography analysis. The content of tyramine in the conversion solution was determined. The method of the invention can quickly and accurately determine the content of tyramine, ensure its quality controllable, reduce errors, save costs, simple operation, fast peak time, shorten detection time in production process, have high accuracy, and greatly improve production efficiency.

【技术实现步骤摘要】
一种酪胺的高效液相色谱检测方法
本专利技术涉及柱色谱法
，尤其涉及一种酪胺的高效液相色谱检测方法。
技术介绍
酪胺是自然界中存在于一些檞寄生树，腐败的动物组织，裂开的干酪以及麦角菌中。它对子宫和血压的作用同肾上腺素相似，虽毒性和活性都比较小，但作用时间长为他的特点。现有的文献中，测定酪胺转化液中酪胺的含量为柱前衍生后，用C8柱进行液相检测，此方法需预先处理样品，步骤较为复杂。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种酪胺的高效液相色谱检测方法，该方法可快速，准确测定出酪胺的含量，确保其质量可控，减小误差，节约成本，操作简单，出峰时间快，缩短生产过程中的检测时间，准确度高，大大提高了生产效率。为解决上述技术问题，本专利技术所采取的技术方案是：一种酪胺的高效液相色谱检测方法：色谱条件为：色谱柱：氨基键合硅胶柱；流动相：0.05mol/L磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为35：65；其中，磷酸盐缓冲液的pH值为2.5-6.0；流动相流速：0.7-1.0mL/min；检测波长：205-225nm；色谱柱柱温：25-40℃；检测步骤为：(1)配制流动相，过滤，脱气；(2)调节高效液相色谱仪条件，平衡色谱柱；(3)对照品溶液和供试品溶液的配制：称取酪胺对照品和酪胺供试品，分别用流动相溶解定容，即得；(4)将对照品溶液、供试品溶液过滤后注入高效液相色谱仪，记录色谱图及峰面积，采用外标法计算酪胺的含量。优选的，磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钾缓冲液。优选的，流动相流速为0.7mL/min。优选的，检测波长为215nm。优选的，色谱柱柱温为30℃。优选的，磷酸盐缓冲液的pH值为4.0。优选的，步骤(3)中，对照品溶液的浓度为0.02mg/mL。优选的，步骤(3)中，供试品溶液的配制为：将含有酪胺的生物转化液0.5ml，用流动相稀释至25ml，再将摇匀后的溶液稀释50倍体积。优选的，色谱柱长度为250mm，内径为4.6mm，其填料粒径为5μm。优选的，步骤(4)中，对照品溶液和供试品溶液的色谱柱进样体积均为20μl。采用上述技术方案所产生的有益效果在于：(1)本专利技术方法可快速，准确测定出酪胺的含量，确保其质量可控，减小误差，节约成本，操作简单，出峰时间快，缩短生产过程中的检测时间，准确度高，大大提高了生产效率。(2)本专利技术方法可通过一次高效液相检测，准确测定出转化液中酪胺的含量，且与其他杂质峰达到很好的分离效果，节省了人工、时间和溶剂等成本。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是本专利技术实施例中酪胺对照品溶液的色谱图；图2是本专利技术实施例2中酪胺供试品溶液的色谱图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术实施例提供一种酪胺的高效液相色谱检测方法，步骤如下：步骤1、酪胺对照品溶于流动相中，按比例稀释，分别相当于每1ml中含18.9776μg、21.3498μg、23.722μg、26.0942μg、28.4664μg的标准溶液；步骤2、采用液相色谱仪分别对不同浓度的标准溶液进行液相色谱分析，记录分析得到的峰面积，并采用外标法绘制酪胺含量-峰面积的标准曲线，得出标准曲线回归方程为y＝72264965.0114x+41605.4，R2＝0.9999；步骤3、将含有酪胺的生物转化液0.5ml，用流动相稀释至25ml，再将摇匀后的溶液稀释50倍体积，利用液相色谱仪进行液相色谱分析，采用与标准溶液完全相同的测定条件，并记录峰面积，根据步骤2的标准曲线回归方程y＝72264965.0114x+41605.4，R2＝0.9999计算得出所述酪胺的含量为60.06g/L(外标法测得含量为59.91g/L)。检测方法的检测参数为：色谱柱：氨基键合硅胶柱；流动相：0.05mol/L磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为35：65；其中，磷酸盐缓冲液的pH值为2.5-6.0；流动相流速：0.7-1.0mL/min；检测波长：205-225nm；色谱柱柱温：25-40℃。本专利技术实施例提供的一种酪胺的高效液相检测方法，可通过一次高效液相检测，准确测定出转化液中酪胺的含量，且与其他杂质峰达到很好的分离效果，节省了人工、时间和溶剂等成本。以下实施例中，采用的高效液相色谱仪为日本岛津：LC-15C；色谱柱为安捷伦氨基键合硅胶柱5μm4.6*250mm；进样体积为20μl(定量环)。也可以采用其他厂家和型号的高效液相色谱仪、其他粒径和长度的氨基键合硅胶柱以及其他进样体积，都能达到本专利技术的目的。实施例1-31.色谱条件：流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH4.0)：乙腈＝35：65；(其中，磷酸二氢钾缓冲液的配制为：磷酸二氢钾4.76g溶于700ml超纯水中，用50％磷酸调pH值为4.0)；流动相流速：0.7ml/min；检测波长：215nm；色谱柱柱温：30℃。2.实验步骤(1)配制流动相，过滤，脱气；(2)调节高效液相色谱仪，平衡色谱柱；(3)对照品溶液和供试品溶液的配制，称取酪胺对照品51.93mg于25ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度摇匀后再稀释100倍；实施例1-3分别吸取不同生产批次含有酪胺的生物转化液0.5ml，用流动相稀释至25ml，再将摇匀后的溶液稀释50倍体积。(4)将对照品溶液、供试品溶液过滤后注入高效液相色谱仪，记录色谱图及峰面积，采用外标法计算结果。外标法计算酪胺生物转化液中酪胺的含量：X＝C供试品×对照品的稀释倍数＝(C对照品×A供试品/A对照品)×待测样品的稀释倍数；式中：C对照品为对照品溶液中酪胺的浓度，单位为mg/ml；A对照品为对照品溶液色谱图的峰面积或峰高；A供试品为供试品溶液色谱图的峰面积或峰高；C供试品为供试品溶液中酪胺的浓度，单位为mg/ml。具体数值见下表所示，3.实施例2供试品溶液色谱图见图2所示：5.572min为酪胺的峰，其余的为杂峰，主峰的出峰时间适宜、理论塔板数大于5000，且与杂峰分离度良好。对照品溶液色谱图见图1所示，5.564min为酪胺的峰。4.本专利技术的方法学考察(1)线性关系实验标准溶液的稀释步骤、浓度、峰面积见下表：由标准浓度及其对应的峰面积得出标准曲线回归方程为：y＝72264965.0114x+41605.4，R2＝0.9999。(2)重复性试验取标准溶液20μl注入高效液相色谱仪，重复6针，峰面积分别为1555197、1541136、1542358、1547220、1545632、1544277，平均值为1545970，RSD为0.32％。(3)转化液稳定性试验取一份酪胺转化液，于配制后6h、12h、24h进样，其峰面积分别为1939191、1961352、1951460，平均值为1950668，RSD为0.57％。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种酪胺的高效液相色谱检测方法，其特征在于：色谱条件为：色谱柱：氨基键合硅胶柱；流动相：0.05mol/L磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为35：65；其中，磷酸盐缓冲液的pH值为2.5‑6.0；流动相流速：0.7‑1.0mL/min；检测波长：205‑225nm；色谱柱柱温：25‑40℃；检测步骤为：(1)配制流动相，过滤，脱气；(2)调节高效液相色谱仪条件，平衡色谱柱；(3)对照品溶液和供试品溶液的配制：称取酪胺对照品和酪胺供试品，分别用流动相溶解定容，即得；(4)将对照品溶液、供试品溶液过滤后注入高效液相色谱仪，记录色谱图及峰面积，采用外标法计算酪胺的含量。

【技术特征摘要】
1.一种酪胺的高效液相色谱检测方法，其特征在于：色谱条件为：色谱柱：氨基键合硅胶柱；流动相：0.05mol/L磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为35：65；其中，磷酸盐缓冲液的pH值为2.5-6.0；流动相流速：0.7-1.0mL/min；检测波长：205-225nm；色谱柱柱温：25-40℃；检测步骤为：(1)配制流动相，过滤，脱气；(2)调节高效液相色谱仪条件，平衡色谱柱；(3)对照品溶液和供试品溶液的配制：称取酪胺对照品和酪胺供试品，分别用流动相溶解定容，即得；(4)将对照品溶液、供试品溶液过滤后注入高效液相色谱仪，记录色谱图及峰面积，采用外标法计算酪胺的含量。2.根据权利要求1所述的一种酪胺的高效液相色谱检测方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钾缓冲液。3.根据权利要求1所述的一种酪胺的高效液相色谱检测方法，其特征在于：流动相流速为0.7mL/min。4.根据权利要求1所述的一种酪胺的高效液...

【专利技术属性】
技术研发人员：张思雨，何连顺，李斌水，米造吉，马静，
申请(专利权)人：精晶药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13