动物线粒体DNA的纯化方法技术

技术编号:19309938 阅读:59 留言:0更新日期:2018-11-03 06:20
本申请涉及一种动物线粒体DNA的纯化方法,属于包含酶或微生物的测定或检测方法技术领域。将待检测动物组织中加入裂解液,研磨成浆后常温离心,取上清液加入到DNA结合柱进行纯化,所述DNA结合柱表面偶联有带正电荷的二乙胺乙醇亲水性树脂,裂解处理后的浆液中的DNA结合到DNA结合柱上并完成纯化,纯化完毕的DNA结合柱加入灭菌水中,静置并常温离心,即可得到待检测动物的线粒体DNA;所述裂解液中蛋白酶K和RNase A的浓度分别为20μg/mL、10μg/mL,裂解温度为37℃,裂解时间为5min‑3h。将本申请应用于肉源的鉴定,具有操作简便、获取率高、成本低廉等优点。

【技术实现步骤摘要】
动物线粒体DNA的纯化方法
本申请涉及一种动物线粒体DNA的纯化方法,属于包含酶或微生物的测定或检测方法

技术介绍
动物细胞中的DNA分布于两种细胞器,一种是细胞核,另一种是线粒体。通常所说的基因组DNA是指核DNA,线粒体DNA则是线粒体中含有的DNA。传统的细胞核DNA提取方法是使用裂解液将切碎的动物组织进行研磨匀浆后进行长时间的蛋白酶K消化(55℃/3h或者37℃/12h),以释放细胞核染色质中的DNA,然后再通过酚/氯仿抽提法收集含有DNA的水相,最后通过加入乙醇或异丙醇使DNA发生沉淀,获得细胞中含有的全部DNA。线粒体DNA则是将动物组织进行研磨匀浆,释放细胞中的线粒体,先是粗提线粒体,再通过超速离心机纯化线粒体,然后再进行酚/氯仿抽提和乙醇或异丙醇沉淀法获得线粒体DNA。上述方法操作周期大约为8h,同时操作过程对技术要求较高,否则就会存在大量的损耗,因而,并不适用于日常纯化提取。基于此,做出本申请。
技术实现思路
针对现有DNA获取纯化中所存在的上述缺陷,本申请提供一种操作便捷、获取率高、成本低廉的动物线粒体DNA的纯化方法。为实现上述目的,本申请采取的技术方案如本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.动物线粒体DNA的纯化方法,其特征在于:将待检测动物组织中加入裂解液,常温下研磨匀浆后离心,取上清液加入到DNA结合柱进行纯化,所述DNA结合柱表面偶联有带正电荷的二乙胺乙醇亲水性树脂,裂解处理后的浆液中的DNA结合到DNA结合柱上并完成纯化,纯化完毕的DNA结合柱中加入灭菌水,静置并常温离心,即可得到待检测动物的线粒体DNA;所述裂解液中蛋白酶K和RNase A的浓度分别为20μg/mL、10μg/mL,裂解温度为37℃,裂解时间为5min‑3h。

【技术特征摘要】
1.动物线粒体DNA的纯化方法,其特征在于:将待检测动物组织中加入裂解液,常温下研磨匀浆后离心,取上清液加入到DNA结合柱进行纯化,所述DNA结合柱表面偶联有带正电荷的二乙胺乙醇亲水性树脂,裂解处理后的浆液中的DNA结合到DNA结合柱上并完成纯化,纯化完毕的DNA结合柱中加入灭菌水,静置并常温离心,即可得到待检测动物的线粒体DNA;所述裂解液中蛋白酶K和RNaseA的浓度分别为20μg/mL、10μg/mL,裂解温度为37℃,裂解时间为5min-3h。2.如权利要求1所述的动物线粒体DNA的纯化方法,其特征在于:所述裂解液的处理时间为5-20min。3.如权利要求1所述的动物线粒体DNA的纯化方法,其特征在于:所述DNA结合柱的结合时长为1-40min。4.如权利要求1所述的动物线粒体DNA的纯化方法,其特征在于,所述裂解液的构成为:150mMNaCl;10mMTris-HCl,pH8.0;10mMEDTA;0.1%SDS;20μg/mL蛋白酶K;10μg/mLRNaseA。5.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员:杨仙玉贾宇坤张先福马敬华施伟斌刘建勋
申请(专利权)人:浙江农林大学杭州野生动物世界有限公司
类型:发明
国别省市:浙江,33

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