The present invention relates to an allopeptide bond scanning method and its application in protein engineering. The method utilizes microorganisms as hosts, and takes advantage of SpyTag and SpyCatcher system to autocatalyze the formation of allopeptide bonds. SpyTag or SpyCatcher are randomly substituted for any amino acid of a target protein peptide chain or inserted into a target protein peptide chain. The coding sequence of the peptide chain was placed in the appropriate promoter and terminator, and the expression cassette was constructed. Under the control of the host, the transcription and translation were realized. The set of target protein products spontaneously formed heteropeptide bonds among different amino acids in the polypeptide chain were obtained. With different screening methods, different modified proteins can be obtained. The invention is developed for modification of recombinant protein, and provides a method for rapid artificial evolution of protein.
【技术实现步骤摘要】
一种基于异肽键扫描的蛋白质工程方法及其在蛋白质工程中应用
本专利技术属蛋白质工程领域，涉及异肽键的形成，尤其是一种涉及SpyTag-SpyCatcher系统介导的分子自催化形成异肽键，特别是一种基于异肽键扫描的蛋白质工程方法及其在蛋白质工程中应用。
技术介绍
一般地，蛋白质工程着力解决如下两个问题：1、蛋白质热力学稳定性问题。2、蛋白质功能动力学高效问题。目前，蛋白质工程技术存在以下两方面存在着改善空间：1、构效关系研究限制，定点突变蛋白质改性的效率不高核苷酸为基础的定向进化，因密码子简并性造成无意义的分子多样性，增加筛选过程难度；因个别氨基酸的变化对整体蛋白质结构与功能影响有限，更不可预知的是，在肽链氨基酸序列限定后，其有意义的生物多样性饱和的事实便已经决定了的能否通过这样的进化获得期望的工程蛋白质；2、多肽或蛋白质的定点化学修饰，存在生产成本高及产品质量均一性不好控制等问题。本专利技术公开一种新的蛋白质工程方法，在一定程度上可以突破上述生物多样性饱和特性的限制，而且因降低了负突变数量，其进化速度有了显著的提高，而且其产物均可通过基因预编程实现，没有后续的化学修...
【技术保护点】
1.一种基于异肽键扫描的蛋白质工程方法，其特征在于：所述方法依赖于某宿主内，分子内异肽键的形成，且这种异肽键的形成具有位置的任意，可应用于蛋白质工程领域，为蛋白质快速进化改性提供新的策略。
【技术特征摘要】
1.一种基于异肽键扫描的蛋白质工程方法，其特征在于：所述方法依赖于某宿主内，分子内异肽键的形成，且这种异肽键的形成具有位置的任意，可应用于蛋白质工程领域，为蛋白质快速进化改性提供新的策略。2.根据权利要求1所述的基于异肽键扫描的蛋白质工程方法，其特征在于：具体步骤如下：(1)首先用SpyCatcher即氨基酸序列AS1或SpyTag即氨基酸序列AS2定点替换某目标蛋白内部的氨基酸或寡肽段，或插入某目标蛋白氨基酸残基下游；避免编码拼接时造成移码突变及翻译终止突变；(2)将SpyTag或SpyCatcher随机替换上述已经载有SpyCatcher或SpyTag的某目标蛋白内部氨基酸或寡肽段，或插入目标蛋白肽链上任意氨...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨柳，王海勇，孙雅旭，梁鸿真，
申请(专利权)人：齐鲁工业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37
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