20－三氮唑基－20－羟基－孕甾衍生物及其制备方法和医药用途技术

本发明专利技术属于医药领域，具体涉及一系列20‑三氮唑基‑20‑羟基‑孕甾衍生物、包含上述物质的制备方法以及它们的医药用途，特别是用于制备治疗雄激素受体相关疾病如依赖于雄激素的细胞增殖、前列腺癌、多毛症、痤疮、雄激素脱发等。本发明专利技术中涉及化合物的结构通式如下，通式中各基团定义详见说明书。

20 - three azazolyl 20 hydroxyl - steroidal derivatives and their preparation and pharmaceutical uses

The invention belongs to the field of medicine, in particular to a series of 20_triazole_20_hydroxy_progesterone derivatives, the preparation method of the above-mentioned substances and their pharmaceutical uses, especially for the preparation and treatment of androgen receptor-related diseases such as androgen-dependent cell proliferation, prostate cancer, hirsutism, acne, androgen. Hormone hair loss and so on. The general structure of the compounds involved is as follows: the definitions of each group in the general formula are detailed in the instruction manual.

【技术实现步骤摘要】
20-三氮唑基-20-羟基-孕甾衍生物及其制备方法和医药用途
本专利技术属于医药领域，具体涉及一系列20-三氮唑基-20-羟基-孕甾衍生物、包含上述物质的制备方法以及它们的医药用途，特别是用于制备治疗雄激素受体相关疾病如前列腺癌等的药物。
技术介绍
前列腺癌(PCa)是高发的男性泌尿生殖系统恶性肿瘤，其发生和发展与体内雄激素水平过高或雄激素受体过度表达相关，因此降低体内雄激素水平或阻断雄激素受体信号转导通路是前列腺癌内分泌治疗的主要方式。雄激素受体(AR)为人体内核受体超家族中类固醇受体的一种，在男性的生长生育、维持性征、生殖以及肌肉骨骼的生长等方面发挥重要的作用。科学家们已经发现了许多不同的AR基因突变体，而这些突变体与前列腺癌的发生和发展有着密切的关联，因此AR已成为前列腺癌药物研究的重要靶点之一。AR包含有四个结构区域：N端活性转录控制区域(NTD)，DNA结合区域(DBD)，铰链区以及配体结合区(LBD)。AR主要在雄激素靶组织例如前列癌、骨骼肌、肝脏和中枢(CNS)中表达。AR拮抗剂在PCa的治疗中发挥着重要作用，其通过作用于AR的活性区LBD区来抑制AR的活性，从而起到抑制PCa细胞增殖的作用。目前已经上市的甾体类AR拮抗剂多为模拟孕激素或者雄激素的结构而进行研究的内源性激素类似物，如奥生多龙(Oxendolone)、环丙孕酮(Cyproterone)及螺内酯(Spironolactone)等，这类化合物普遍存在口服生物利用度以及选择性较差的问题，因此开发新的具有临床价值的AR抑制剂具有重大意义。
技术实现思路
本专利技术公开了具有通式I和通式II结构的20-三氮唑基-20-羟基-孕甾衍生物。经药理实验证明该类化合物具有良好的抗前列癌活性。本专利技术通式的化合物结构如下其中R1代表-OH、＝O、＝NOH、-OAc、甲基醚、烷氧基甲基醚或者烷氧基取代的甲基醚；其中虚线表示有无双键；其中R2代表SEM、H；本专利技术化合物的结构及编号如下：编号R1R2双键编号R1R2双键XWA1-OMOM-SEMΔ5XWA2-OMOM-HΔ5XWA3-OCH3-SEMΔ5XWA4-OCH3-HΔ5XWA5-OTHP-SEMΔ5XWA6-OTHP-HΔ5XWA7-OH-SEMΔ5XWA8-OH-HΔ5XWA9＝O-SEMΔ4XWA10-OCOCH3-SEMΔ5XWA11＝NOH-SEMΔ4编号R1R2双键编号R1R2双键XWB1-OMOM-SEMΔ5，16XWB2-OMOM-HΔ5，16XWB3-OCH3-SEMΔ5，16XWB4-OCH3-HΔ5，16XWB5-OTHP-SEMΔ5，16XWB6-OTHP-HΔ5，16XWB7-OH-SEMΔ5，16XWB8-OH-HΔ5，16XWB9＝O-SEMΔ4，116XWB10-OCOCH3-SEMΔ5，16药理实验及实验实施例中化合物的代号等同于以上代号所对应的化合物结构。下面是本专利技术化合物的部分药理学试验及结果：MTT法测试人前列腺癌细胞LNCaP细胞株抗增殖活性实验1)实验材料(1)细胞系人前列腺癌细胞LNCaP(中国药科大学李志裕老师课题组赠送)。(2)试剂及仪器标准品睾酮；阳性药TOK-001(美国MCE公司)；氟他胺；DMSO(GeneralReagent)；胰酶、四甲基偶氮唑盐(MTT)(南京凯基生物技术公司)；RPMI1640培养基、双抗、优级胎牛血清(Gibco)。倒置显微镜(日本尼康Ts100)；CO2培养箱(美国赛诺菲)；BioTek酶标仪(美国伯腾仪器有限公司)。2)溶剂的配置方法PBS：称取0.27g磷酸二氢钾(KH2PO4)、1.42g磷酸氢二钠(Na2HPO4)、8g氯化钠(NaCl)以及0.2g氯化钾(KCl)溶于1L超纯水，再用NaOH调pH至7.4。放置于高压灭菌锅中灭菌，4℃保存。0.25％胰酶消化液：称取0.125g胰蛋白酶，溶于50mLPBS中，涡旋震荡5分钟，使其完全溶解，0.22μm无菌滤头过滤，-20℃保存。RPMI1640培养液：称取6.65g的RPMI1640粉、1.0g碳酸氢钠(NaHCO3)溶于500mL超纯水中，加入10％双抗，0.22μm无菌滤头过滤。使用时加入10％胎牛血清，4℃保存。3)实验方法(1)细胞培养细胞复苏：从液氮中取出冻存管，立即放置于37℃水浴中摇晃，使其融化，倒入培养瓶中，加入6.5mL的RPMI1640培养基(含10％胎牛血清)稀释，低速离心5分钟，去上清，将新鲜RPMI1640培养基加入沉淀中，将沉淀在培养液中吹匀，移至培养瓶中。细胞传代：人前列腺癌细胞LNCaP细胞株为贴壁生长细胞，将其置于RPMI1640培养基中，放入5％CO2，37℃培养箱中培养，细胞生长达到80％-90％时传代。传代时，倒去培养瓶中的培养液，用PBS洗两次(除去代谢废物及残余血清)，加入2mL0.25％的胰蛋白酶液于37℃下消化3分钟(显微镜下观察细胞团簇分离且细胞变圆)。吸去胰酶，直接加入5mL新鲜培养基，用枪头吸取瓶内培养液，反复吹打，形成细胞悬液，离心，弃去上清，细胞沉淀用2mL培养液制成悬液，吸取1mL细胞悬液，接种于新的培养瓶内，加4mL新鲜培养液于新培养瓶内，将后者放入培养箱中培养。冻存细胞：预先配制冻存液(20％胎牛血清，10％DMSO，其余为RPMI1640培养基)避免因临时配制产热而损伤细胞。取对数生长期细胞，经胰酶消化，离心，倒去上清，加入适量冻存液，用移液枪吹打制成细胞悬液，加入1.5mL细胞悬液于冻存管中。冻存管放入冻存盒中，放在-80℃超低温冰箱过夜后移入液氮容器中，标记细胞名称并记录冷冻日期。细胞计数：将血球计数板及盖片擦拭干净，将盖片盖在计数板上。取少量细胞悬液约15uL，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。静置3分钟。在倒置显微镜下观察，记录计数板四大格细胞数目，压线细胞只计左侧和上方的，细胞团簇只记单个细胞。(细胞数/mL＝所得细胞数目/4×104)(2)MTT检测法取对数生长期细胞，弃去培养皿内的培养液，用PBS缓冲液洗涤两次(除去代谢废物及残余血清)，随后加入3mL的0.25％胰蛋白酶消化，置于显微镜下观察，当细胞回缩、细胞间隙增大后，弃去消化液，利用剩余的少量消化液继续消化，当细胞开始脱落时，加入5mL含10％胎牛血清的RPMI1640培养基终止消化，吹打培养皿底部至细胞完全脱落，转移至离心管，1000r/min，离心5min，弃去上清。加入2mLRPMI1640培养基重悬，混合均匀，取100μL细胞悬液加入900μL的RPMI1640培养基稀释，进行细胞计数。计数完成后，按照每孔10000个细胞将细胞悬液稀释至适宜浓度，随后用排枪进行点板，对照组和给药组每孔加入100μL含细胞的培养基，调零孔加入100μL的空白培养基，96孔板四周的36个孔内加入200μL的PBS缓冲液，置于5％CO2、37℃培养箱孵育24h。将药物用RPMI1640培养基依次稀释至所需浓度，每个浓度设置3个复孔，按照每孔100μL加入96孔板，轻轻混合均匀。对照组加入相应浓度的含溶媒的培养基，调零孔加入相同体积的空白培养基，置于5％CO2、37℃培养箱孵育48h。每孔加入20μL的MTT溶液，混合本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.由下列通式的化合物或其药学上可接受的立体异构体：

【技术特征摘要】
1.由下列通式的化合物或其药学上可接受的立体异构体：其中R1代表-OH、＝O、＝NOH、-OAc、甲基醚、烷氧基甲基醚或者烷氧基取代的甲基醚；其中虚线表示有无双键；其中R2代表SEM、H。2.根据权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐或其前药：其中R1代表-OH、＝O、＝NOH、-OAc、-OCH3、-OMOM、-OTHP；其中虚线表示有无双键；其中R2代表SEM、H。3.根据权利要求2所述的化合物或其...

【专利技术属性】
技术研发人员：向华，黄阿丽，王崇，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32