用于富集衍生自甜叶菊的糖苷组合物中的新蛇菊苷B和/或新蛇菊苷D的方法技术

本发明专利技术涉及使用吸附/脱附色谱以制备包含新蛇菊苷B和/或新蛇菊苷D的经富集的组合物的方法。使用吸附‑脱附色谱工艺可从衍生自甜叶菊的糖苷组合物制备富集新蛇菊苷B和/或新蛇菊苷D组分的组合物，该色谱工艺中色谱床的固定相包含大孔中性吸附树脂。

A method for enriching the new pyrethroid B and / or new stevioside D derived from Stevia leaf glycoside compositions

The present invention relates to a method for preparing enriched compositions containing neochrysanthemin B and/or neochrysanthemin D by adsorption/desorption chromatography. Components enriched with neochrysanthemin B and/or neochrysanthemin D can be prepared from a stevia-derived glycoside composition by an adsorption-desorption chromatography process in which the stationary phase of the chromatographic bed contains a macroporous neutral adsorption resin.

【技术实现步骤摘要】
用于富集衍生自甜叶菊的糖苷组合物中的新蛇菊苷B和/或新蛇菊苷D的方法本申请为于2011年11月18日提交的申请号201180064931.2的名称为“使用具有大孔中性吸附树脂的吸附-脱附色谱用于富集衍生自甜叶菊的糖苷组合物中的新蛇菊苷B和/或新蛇菊苷D的方法”的申请的分案申请。相关申请的交叉引用本申请要求享有2010年11月19日提交的，名为“METHODFORTHEENRICHMENTOFREBAUDIOSIDEAND/ORREBADIOSIDEDINSTEVIA-DERIVEDGLYCOSIDECOMPOSITIONSUSINGABSORB-DESORBCHROMATOGRAPHYWITHAMACROPOROUSNUETRALADSORBENTRESIN”的美国临时专利申请61/415,548的权益，将其全部援引加入本文。
本专利技术涉及使用吸附/脱附色谱以制备包含新蛇菊苷B和/或新蛇菊苷D(reb-B和/或reb-D)的经富集的组合物。如本文所述，已经发现使用吸附-脱附色谱工艺从衍生自甜叶菊的糖苷组合物中可制备经富集的reb-B和/或reb-D，该色谱工艺中色谱床的固定相包含大孔中性吸附树脂。可用树脂的实例包括“SP70”和“SP710”(购自Mitsubishi)和“FPX66”(购自Dow)。
技术实现思路
在一些实施方案中，本专利技术提供了制备包含reb-B、reb-D的至少一种或它们的混合物的经富集的组合物的方法，该方法包括以下步骤：(A)提供pH经调节的衍生自甜叶菊的糖苷溶液，其包含：(i)选自reb-B和reb-D的至少一种糖苷，和(ii)至少一种其他的衍生自甜叶菊的糖苷；(B)提供大孔中性吸附树脂；(C)使大孔中性吸附树脂与衍生自甜叶菊的糖苷溶液接触，以使衍生自甜叶菊的糖苷溶液中的至少一部分糖苷被吸附至吸附剂上；(D)提供至少一种包含乙醇和水的混合物的洗脱溶剂，配制该洗脱溶剂，以从吸附剂选择性地洗脱reb-B、reb-D或它们的混合物；(E)使大孔中性吸附树脂与乙醇和水的洗脱溶剂接触，以洗脱富集选自reb-B和reb-D的至少一种糖苷的组合物；以及(F)任选地从大孔中性吸附树脂洗脱至少一部分剩余的被吸附的糖苷。在本专利技术的某些实施方案中，衍生自甜叶菊的糖苷溶液的pH可以是碱性的pH。在这些实施方案的某些中，pH经调节的衍生自甜叶菊的糖苷溶液的pH可以为约8至约11。在其他实施方案中，pH经调节的衍生自甜叶菊的糖苷溶液的pH可以为约8至约10。在这些实施方案的一些中，至少一种洗脱溶剂包含约20-35％w/w的乙醇和约65-80％w/w的水。在其他的实施方案中，至少一种洗脱溶剂包含约25-33％w/w的乙醇和约67-75％w/w的水。在这些实施方案中，富集至少一种糖苷的组合物富集reb-B和reb-D。在这些实施方案的一些中，用后续洗脱溶剂从大孔中性吸附树脂洗脱至少一部分剩余的被吸附的糖苷，其中后续洗脱溶剂包含约36-100％w/w的乙醇和约0-64％w/w的水，并且用后续洗脱溶剂洗脱的组合物富集reb-A。在本专利技术的其他特别的实施方案中，衍生自甜叶菊的糖苷溶液的pH可以是略酸性的pH。在这些实施方案中，pH经调节的衍生自甜叶菊的糖苷溶液的pH可以为约4至约7。在这些实施方案的一些中，至少一种洗脱溶剂包含约20-35％w/w的乙醇和约65-80％w/w的水。在其他的实施方案中，至少一种洗脱溶剂包含约25-33％w/w的乙醇和约67-75％w/w的水。在这些实施方案中，富集至少一种糖苷的组合物富集reb-D。在这些实施方案的一些中，用后续洗脱溶剂从大孔中性吸附树脂洗脱至少一部分剩余的被吸附糖苷，其中后续洗脱溶剂包含约36-100％w/w的乙醇和约0-64％w/w的水，并且用后续洗脱溶剂洗脱的组合物富集reb-A和reb-B。在本专利技术其他的特别方面，衍生自甜叶菊的糖苷溶液的pH可以是非常酸性的pH。在这些实施方案中，pH经调节的衍生自甜叶菊的糖苷溶液的pH可以为约1至约4。在其他实施方案中，pH经调节的衍生自甜叶菊的糖苷溶液的pH可以为约1至约3。在这些实施方案的一些中，至少一种洗脱溶剂包含约40-65％w/w的乙醇和约35-60％w/w的水。在其他的实施方案中，至少一种洗脱溶剂包含约40-60％w/w的乙醇和约40-60％w/w的水。在这些实施方案中，富集至少一种糖苷的组合物富集reb-A和reb-D。在这些实施方案的一些中，用后续洗脱溶剂从大孔中性吸附树脂洗脱至少一部分剩余的被吸附糖苷，其中后续洗脱溶剂包含约61-100％w/w的乙醇和约0-39％w/w的水，并且用后续洗脱溶剂洗脱的组合物富集reb-B。在本专利技术的实施方案中，大孔中性吸附树脂包括二乙烯基苯大孔树脂。本专利技术还涉及根据本专利技术描述的方法制备的经富集的组合物。附图说明图1A和图1B显示了“新蛇菊苷B”和“新蛇菊苷D”的结构。图2为实施例1中每种洗脱的各种糖苷的回收图，显示了在pH5.8下用SP710处理之后的浸渍水中的各种糖苷的回收率。图3为实施例2中在不同乙醇浓度下洗脱的样品的糖苷曲线图，显示了在用SP710处理之后，用氯化铁和石灰处理的浸渍水中的各种糖苷的回收率。图4为实施例3中进样过程中从柱上洗脱的糖苷浓度图，显示了用浸渍水上样过程中从SP70洗脱的糖苷浓度。图5为实施例3中用15％的乙醇冲洗和用100％的乙醇洗脱过程中从柱上洗脱的糖苷浓度图，显示了用15％的乙醇冲洗和用100％的乙醇洗脱过程中从SP70洗脱的糖苷浓度。图6为实施例4中进样、冲洗和洗脱过程中的糖苷浓度图，显示了在pH2下的SP70上样、冲洗和洗脱过程中的糖苷浓度。图7显示了实施例4中洗脱过程中收集的新蛇菊苷A、甜菊苷、新蛇菊苷B和新蛇菊苷D的质量(mass)，即显示了相对于洗脱液的乙醇浓度，在pH2下的SP洗脱过程中的糖苷回收。图8为实施例5中进样、冲洗和洗脱过程中的糖苷浓度图，显示了上样、冲洗和洗脱过程中的糖苷浓度。图9显示了实施例5中洗脱过程中收集的新蛇菊苷A、甜菊苷、新蛇菊苷B和新蛇菊苷D的量，即显示了洗脱过程中收集的RA、Stev、RB和RD的量。具体实施方式Reb-B和reb-D具有理想的感官特性。例如，reb-B比reb-A的苦味更少且具有稍微较少的甜味。纯粹的组分感官数据显示了reb-B中苦味的降低，其表明reb-B和reb-A的混合物可具有较少的苦味。与有显著降低苦味的reb-A相比，Reb-D具有类似或更强烈的甜味。由于reb-D和reb-B降低的苦味，预计reb-D、reb-B和reb-A的混合物会具有改善的味道。本专利技术提供了富集reb-B和/或reb-D的方法，以利用甜味剂组合物中的理想特性。本专利技术方法还可以用于通过使用该工艺而从包含reb-A的组合物中去除至少一部分reb-B和/或reb-D，产生包含reb-A的经富集的组合物。在本专利技术方法中，衍生自甜叶菊的糖苷溶液可以是从甜叶菊叶提取物制备的溶液，或者衍生自甜叶菊的糖苷溶液可以是结晶工艺的母液。在一些实施方案中，当期待多个富集步骤时，衍生自甜叶菊的糖苷溶液可以是本专利技术富集工艺的产物。可以存在于衍生自甜叶菊的糖苷溶液中的糖苷的实例包括reb-A、reb-B、reb-C、reb-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.制备包含新蛇菊苷B、新蛇菊苷D的至少一种或它们的混合物的经富集的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：(A)提供pH为约8至约11的糖苷溶液，所述糖苷溶液包含新蛇菊苷B、新蛇菊苷D和至少一种其它的甜叶菊糖苷；(B)使大孔中性吸附树脂与所述糖苷溶液接触，以使所述糖苷溶液中的至少一部分糖苷被吸附至所述大孔中性吸附树脂上；以及(C)使所述大孔中性吸附树脂与至少一种洗脱溶剂接触，所述洗脱溶剂被配制为从吸附剂中选择性地洗脱新蛇菊苷B和新蛇菊苷D，并包含约10‑50％w/w的乙醇和约50‑90％w/w的水，从而洗脱相对于所述糖苷溶液富集新蛇菊苷B和新蛇菊苷D的组合物；以及(D)任选地，从所述大孔中性吸附树脂上洗脱至少一部分剩余的被吸附的糖苷。

【技术特征摘要】
2010.11.19 US 61/415,5481.制备包含新蛇菊苷B、新蛇菊苷D的至少一种或它们的混合物的经富集的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：(A)提供pH为约8至约11的糖苷溶液，所述糖苷溶液包含新蛇菊苷B、新蛇菊苷D和至少一种其它的甜叶菊糖苷；(B)使大孔中性吸附树脂与所述糖苷溶液接触，以使所述糖苷溶液中的至少一部分糖苷被吸附至所述大孔中性吸附树脂上；以及(C)使所述大孔中性吸附树脂与至少一种洗脱溶剂接触，所述洗脱溶剂被配制为从吸附剂中选择性地洗脱新蛇菊苷B和新蛇菊苷D，并包含约10-50％w/w的乙醇和约50-90％w/w的水，从而洗脱相对于所述糖苷溶液富集新蛇菊苷B和新蛇菊苷D的组合物；以及(D)任选地，从所述大孔中性吸附树脂上洗脱至少一部分剩余的被吸附的糖苷。2.权利要求1的方法，其中所述糖苷溶液的pH为约8至约10。3.权利要求2的方法，其中所述至少一种洗脱溶剂包含约20-35％w/w的乙醇和约65-80％w/w的水。4.权利要求1的方法，其中所述方法还包括，在步骤(C)之后，从所述大孔中性吸附树脂上洗脱至少一部分剩余的被吸附的糖苷。5.权利要求1的方法，其中所述方法还包括，在步骤(C)之后，用后续洗脱溶剂从所述大孔中性吸附树脂上洗脱至少一部分剩余的被吸附的糖苷，其中所述后续洗脱溶剂包含约36-100％w/w的乙醇和约0-64％w/w的水，并且用所述后续洗脱溶剂洗脱的组合物相对于甜叶菊糖苷溶液，富集新蛇菊苷A。6.权利要求1的方法，其中所述大孔中性吸附树脂包括二乙烯基苯大孔树脂。7.根据权利要求1的方法制备的经富集的...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·J·布劳尔三世，T·L·卡森，A·B·埃里克森，J·赫尔格森，A·K·奥莫斯，T·A·鲁尼穆斯，C·A·泰勒，T·旺，
申请(专利权)人：嘉吉公司，
类型：发明
国别省市：美国,US