【技术实现步骤摘要】
一种Atoh1a在斑马鱼侧线毛细胞再生过程中的表达图式的方法
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种atoh1a在斑马鱼侧线毛细胞再生过程中的表达图式的方法。
技术介绍
神经原基因(proneuralgene)atoh1a，属于bHLH家族转录因子，在脊椎动物毛细胞命运决定过程中起关键作用。已有研究表明，atoh1是毛细胞命运决定因子，过表达atoh1可以诱导过多毛细胞产生，缺失atoh1毛细胞无法形成。在斑马鱼侧线系统形成过程中，FGF信号可以起始Notch信号通路配体deltaA表达。DeltaA和DeltaD两者同时激活临近细胞的Notch信号通路，抑制atoh1a表达，表达atoh1a的细胞最终将发育成毛细胞(haircells)，其临近Notch信号活化的细胞因不能表达atoh1a将发育成助细胞(supportcells)，这就是Notch信号通路通过Atoh1a在毛细胞命运决定过程中所起的“侧向抑制”作用(lateralinhibition)。Atoh1a和Notch信号在侧线毛细胞命运决定过程中的作用和内耳中毛细胞命运决定的作用类似。在哺乳动物中感...
【技术保护点】
1.一种atoh1a在斑马鱼侧线毛细胞再生过程中的表达图式的方法，其特征在于：所述方法利用atoh1a反义核苷酸探针，通过整胚原位杂交的方法，观察顺铂诱导斑马鱼侧线毛细胞死亡及再生过程中atoh1a的表达图式，并通过原位杂交和抗体染色共染的方法观察atoh1a的表达细胞类群与神经丘中心成熟毛细胞的空间关系，进一步通过外源添加Notch信号抑制剂观察atoh1a表达增多的情况下再生毛细胞数目的变化。
【技术特征摘要】
1.一种atoh1a在斑马鱼侧线毛细胞再生过程中的表达图式的方法，其特征在于：所述方法利用atoh1a反义核苷酸探针，通过整胚原位杂交的方法，观察顺铂诱导斑马鱼侧线毛细胞死亡及再生过程中atoh1a的表达图式，并通过原位杂交和抗体染色共染的方法观察atoh1a的表达细胞类群与神经丘中心成熟毛细胞的空间关系，进一步通过外源添加Notch信号抑制剂观察atoh1a表达增多的情况下再生毛细胞数目的变化。2.根据权利要求1所述的atoh1a在斑马鱼侧线毛细胞再生过程中的表达图式的方法，其特征在于：所述atoh1a反义核苷酸探针合成具体为设计引物扩增atoh1amRNA片段，连接Ez-T载体，构建质粒，该质粒经线性化后，纯化回收，以该线性化质粒为模板，经T7聚合酶体外转录合成地高辛标记的反义探针，该探针经RNACleanupkit纯化回收，加入RNaseinhibitor-80℃保存。3.根据权利要求1所述的atoh1a在斑马鱼侧线毛细胞再生过程中的表达图式的方法，其特征在于：所述整胚原位杂交与抗体染色共染方法具体为取10条斑马鱼样本，经4％PFA固定过夜，加入地高辛标记的atoh1a反义链探针孵育过夜，第二天加入碱性磷酸...
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