一种使用寡序列检测林木染色体端部的方法技术

本发明专利技术提供一种使用寡序列检测林木染色体端部的方法。该方法通过(AGGGTTT)3寡序列探针及包含该探针的试剂盒实现，所述(AGGGTTT)3寡序列探针的碱基序列为：5′‑AGGGTTTAGGGTTTAGGGTTT‑3′，用于识别并标记林木染色体端部；试剂盒包括：探针；酶解液；20×SSC缓冲液；2×SSC缓冲液；70％FA液；50％DS液；鲑鱼精DNA；方法包括:获取林木染色体载玻片标本；变性；荧光原位杂交；信号检测；回收载玻片。本发明专利技术的方法可反复使用制片，并且探针准备容易、快速，灵敏度高，该探针仅针对染色体端部的寡序列，且根尖制片容易，方便获取中期染色体，整个实验流程时间短，操作简便。

【技术实现步骤摘要】
一种使用寡序列检测林木染色体端部的方法
本专利技术属于荧光原位杂交探针的应用领域，具体涉及一种使用寡序列检测林木染色体端部的方法。
技术介绍
目前，检测林木染色体的方法多是简单的显微观测，进行照片并分析，林木染色体相对草本植物的要小，很多时候对染色体的数目、大小和形态都不能清晰的区分，造成了实验的巨大误差。荧光原位杂交技术(fluorescenceinsituhybridization，FISH)是在放射性原位杂交技术基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术，以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法。FISH能够更加直观的观测林木染色体，高效且快捷，但是对染色体进行荧光标记成为其中的难点。除了缺乏对染色体进行荧光标记的简单快速方法外，还存在标记过程中所需求的目标DNA数量多，且可能会造成标记错误，出现重复标记，导致染色体数目不完整、不清晰等问题。本专利技术通过设计、合成用于检测林木染色体端部的寡序列探针，建立稳定便捷的荧光原位杂交反应体系，克服了现有林木染色体检测的诸多问题，为林木植物染色体的检测提供新方法。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供一种使用寡本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种使用寡序列检测林木染色体端部的方法，其特征在于，该方法通过(AGGGTTT)3寡序列探针及包含该探针的试剂盒实现，所述(AGGGTTT)3寡序列探针的碱基序列为：5′‑AGGGTTTAGGGTTTAGGGTTT‑3′，用于识别并标记林木染色体端部；所述试剂盒包括：(1)所述探针；(2)酶解液；(3)20×SSC缓冲液；(4)2×SSC缓冲液；(5)70％FA液；(6)50％DS液；(7)鲑鱼精DNA；所述方法包括以下步骤：1)获取林木染色体载玻片标本：剪取林木种子新生1.0～1.5cm根尖组织，依次用冰水混合物处理18～24h、冰醋酸处理5min，用双蒸水清洗后，切取根尖分生组织1～2...

【技术特征摘要】
1.一种使用寡序列检测林木染色体端部的方法，其特征在于，该方法通过(AGGGTTT)3寡序列探针及包含该探针的试剂盒实现，所述(AGGGTTT)3寡序列探针的碱基序列为：5′-AGGGTTTAGGGTTTAGGGTTT-3′，用于识别并标记林木染色体端部；所述试剂盒包括：(1)所述探针；(2)酶解液；(3)20×SSC缓冲液；(4)2×SSC缓冲液；(5)70％FA液；(6)50％DS液；(7)鲑鱼精DNA；所述方法包括以下步骤：1)获取林木染色体载玻片标本：剪取林木种子新生1.0～1.5cm根尖组织，依次用冰水混合物处理18～24h、冰醋酸处理5min，用双蒸水清洗后，切取根尖分生组织1～2mm，置于酶解液中于37℃酶解45～60min；去除酶解液，依次用双蒸水、70％、90％、100％酒精依次清洗根尖分生组织，再加入冰醋酸制成根尖组织悬浮液，滴于载玻片上，晾干，镜检，将能清晰观察到染色体的载玻片进行标记，并置于-20℃保存箱中保存；2)变性：准备好灭菌的1.5mL离心管，每管加入2μL鲑鱼精DNA，0.5μL探针，然后加入10μL100％FA、2μL20×SSC和4μL50％DS。混匀后瞬时离心，于沸水浴中变性10min，立即置于冰上放置20min，防止其复性；3)荧光原位杂交：将步骤1)中的载玻片用2×SSC缓冲液处理两次，每次5min，再依次用70％酒精、90％酒精、100％酒精梯度处理，每次5min，室温晾干后滴加70％FA液，盖上盖玻片，于80℃处理2min；之后依次用70％酒精、90％酒精、100％酒精梯度处理，每次5min，晾干后滴加10μL步骤2)的变性混合液，遮光下将载玻片于37℃恒温箱中放置1.5～2h，依次用2×SSC缓冲液清洗3min、...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗小梅，陈亮，刘俊成，万文林，龚伟，王景燕，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川,51