一种含有IL12重组表达基因的纳米制剂及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种含有IL12重组表达基因的纳米制剂，它是以IL12的重组表达基因为活性成分，加上聚合物形成的纳米制剂。本发明专利技术还公开了前述纳米制剂的制备方法和用途。本发明专利技术含有IL12重组表达基因的纳米制剂治疗结肠癌的效果优良，临床应用前景良好。

Nano preparation containing recombinant expression gene of IL12 and preparation method and use thereof

The invention discloses a nano-preparation containing IL12 recombinant expression gene. The nano-preparation is composed of IL12 recombinant expression gene as active component and polymer. The invention also discloses the preparation method and application of the above-mentioned nano preparation. The nanometer preparation containing IL12 recombinant expression gene has excellent effect in treating colon cancer and good clinical application prospect.

【技术实现步骤摘要】
一种含有IL12重组表达基因的纳米制剂及其制备方法和用途
本专利技术涉及一种含有IL12重组表达基因的纳米制剂及其制备方法和用途。
技术介绍
IL-12是由不同基因编码的2个亚基p35与p40两条肽链借二硫键的形成结合在一起的异二聚体细胞因子。人IL-12编码p35、p40的基因分别定位于第3号染色体(3p12～3q13.2)和第5号染色体(5q31～33)。两者都含有一个单的长开链阅读框架,一个疏水N端信号肽及劈裂部位,显示2种蛋白产物是以前体形式合成。p35、p40两者单独存在时无生物学作用,只能结合后才具有生物学活性。IL-12表达的调控机制比较复杂,其异二聚体的产生需要编码p40和p35的2个基因的同时表达。而产生IL-12的细胞主要是两大类细胞:一类是参与先天免疫的细胞,如吞噬细胞、浆细胞及角质细胞；另一类是抗原递呈细胞(APC),包括吞噬细胞的单核/巨噬细胞、B细胞以及树突状细胞和皮肤郎罕细胞。吞噬细胞产生IL-12的能力受一些因子的调节,IFN-γ和GM-CSF可增加吞噬细胞的IL-12表达,而IL-10、IL-4和抑制IL-12的表达。大量动物实验表明,IL-12能够明显抑制肿瘤的生长和转移,以及延长荷瘤动物的生存时间。
技术实现思路
为了克服现有技术存在的缺陷，本专利技术提供了一种含有IL12重组表达基因的纳米制剂及其制备方法和用途。本专利技术提供了一种含有IL12重组表达基因的纳米制剂，它是以IL12的重组表达基因为活性成分，加上聚合物形成的纳米制剂。其中，所述的聚合物为DOTAP和MPEG-PLA的组合或者DOTAP和MPEG-PCL的组合。本专利技术MPEG-PLA是指甲氧基聚乙二醇-聚乳酸，甲氧基聚乙二醇与聚乳酸的摩尔比为45:28；本专利技术MPEG-PCL是指甲氧基聚乙二醇-聚ε-己内酯，甲氧基聚乙二醇与聚ε-己内酯的摩尔比为45:18。其中所述DOTAP和MPEG-PLA的质量比为1：4～1：9。所述IL12的重组表达基因的序列如SEQIDNO.1所示，具体如下：atgtgtcaatcacgctacctcctctttttggccacccttgccctcctaaaccacctcagtttggccagggtcattccagtctctggacctgccaggtgtcttagccagtcccgaaacctgctgaagaccacagatgacatggtgaagacggccagagaaaaactgaaacattattcctgcactgctgaagacatcgatcatgaagacatcacacgggaccaaaccagcacattgaagacctgtttaccactggaactacacaagaacgagagttgcctggctactagagagacttcttccacaacaagagggagctgcctgcccccacagaagacgtctttgatgatgaccctgtgccttggtagcatctatgaggacttgaagatgtaccagacagagttccaggccatcaacgcagcacttcagaatcacaaccatcagcagatcattctagacaagggcatgctggtggccatcgatgagctgatgcagtctctgaatcataatggcgagactctgcgccagaaacctcctgtgggagaagcagacccttacagagtgaaaatgaagctctgcatcctgcttcacgccttcagcacccgcgtcgtgaccatcaacagggtgatgggctatctgagctccgccGTTCCTGGAGTAGGGGTACCTGGAGTGGGCGGATCTatgtgggagctggagaaagacgtttatgttgtagaggtggactggactcccgatgcccctggagaaacagtgaacctcacctgtgacacgcctgaagaagatgacatcacctggacctcagaccagagacatggagtcataggctctggaaagaccctgaccatcactgtcaaagagtttctagatgctggccagtacacctgccacaaaggaggcgagactctgagccactcacatctgctgctccacaagaaggaaaatggaatttggtccactgaaattttaaaaaatttcaaaaacaagactttcctgaagtgtgaagcaccaaattactccggacggttcacgtgctcatggctggtgcaaagaaacatggacttgaagttcaacatcaagagcagtagcagttcccctgactctcgggcagtgacatgtggaatggcgtctctgtctgcagagaaggtcacactggaccaaagggactatgagaagtattcagtgtcctgccaggaggatgtcacctgcccaactgccgaggagaccctgcccattgaactggcgttggaagcacggcagcagaataaatatgagaactacagcaccagcttcttcatcagggacatcatcaaaccagacccgcccaagaacttgcagatgaagcctttgaagaactcacaggtggaggtcagctgggagtaccctgactcctggagcactccccattcctacttctccctcaagttctttgttcgaatccagcgcaagaaagaaaagatgaaggagacagaggaggggtgtaaccagaaaggtgcgttcctcgtagagaagacatctaccgaagtccaatgcaaaggcgggaatgtctgcgtgcaagctcaggatcgctattacaattcctcatgcagcaagtgggcatgtgttccctgcagggtccgatcctag其中，所述IL12的重组表达基因是含有IL12的重组表达基因的质粒；优选地，所述质粒是pVAX质粒。其中，所述基因与聚合物的质量比为1：(50～150)。本专利技术还提供了一种制备前述含有IL12重组表达基因的纳米制剂的方法，步骤如下：取聚合物，溶于有机溶剂，减压除去有机溶剂，然后在真空条件下放置6h以上，水化脱膜，脱膜后过滤，得纳米载体，将载体与基因混合，孵育，即可。其中，所述有机溶剂为丙酮的混合液；和/或，所述减压除去有机溶剂的温度为37℃，时间为1h。其中，所述水化脱膜采用的溶液为葡萄糖溶液；优选地，所述葡萄糖溶液的浓度为5％；优选地，所述水化脱膜的温度是55℃，时间为1h。其中，所述过滤采用0.22μm微孔滤膜过滤。其中，所述孵育是室温孵育30min。本专利技术还提供了前述含有IL12重组表达基因的纳米制剂在制备治疗肿瘤的药物中的用途。其中，所述肿瘤是结肠癌。实验结果说明，本专利技术含有IL12重组表达基因的纳米制剂可以有效治疗结肠癌，应用前景优良。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含有IL12重组表达基因的纳米制剂，其特征在于：它是以IL12的重组表达基因为活性成分，加上聚合物形成的纳米制剂。

【技术特征摘要】
2017.03.24 CN 20171018372711.一种含有IL12重组表达基因的纳米制剂，其特征在于：它是以IL12的重组表达基因为活性成分，加上聚合物形成的纳米制剂。2.根据权利要求1所述的纳米制剂，其特征在于：所述的聚合物为DOTAP和甲氧基聚乙二醇-聚乳酸的组合或者DOTAP和甲氧基聚乙二醇-聚ε-己内酯的组合；所述甲氧基聚乙二醇-聚乳酸中，甲氧基聚乙二醇与聚乳酸的摩尔比为45:28；所述甲氧基聚乙二醇-聚ε-己内酯中，甲氧基聚乙二醇与聚ε-己内酯的摩尔比为45:18。3.根据权利要求2所述的纳米制剂，其特征在于：所述DOTAP和甲氧基聚乙二醇-聚乳酸的质量比为1：4～1：9。4.根据权利要求1所述的纳米制剂，其特征在于：所述IL12的重组表达基因的序列如SEQIDNO.1所示；所述IL12的重组表达基因是含有IL12的重组表达基因的质粒；优选地，所述质粒是pVAX质粒。5.根据权利要求1～4任意...

【专利技术属性】
技术研发人员：高祥，刘家刚，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：四川,51