The invention discloses a visual detection method of Shigella flexneri based on aptamer magnetic capture and direct LAMP reaction, which provides aptamers and primers F3, B3, FIP, BIP for LAMP reaction. The method comprises the following steps: preparing magnetic bead solution of coupling aptamers; magnetic capture of target bacteria; and bacteria. The preparation of DNA template; LAMP reaction; after the LAMP reaction, the reaction solution and SYBR were obtained.
【技术实现步骤摘要】
基于适配体磁捕获和直接LAMP的福氏志贺菌可视化检测方法
本专利技术属于食源性致病菌分子生物学检测
，涉及福氏志贺菌基于核酸适配体的磁性捕获和基于直接LAMP反应的可视化检测方法。
技术介绍
志贺氏菌(Shigella)为一类具有高度传染性和危害严重的革兰氏阴性杆菌，也是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，通常称为痢疾杆菌。人类对志贺氏菌普遍易感，据报道每年全球有1.6亿人患病，约有110万人死亡，绝大多数为5岁以下儿童。在人群密集区，志贺氏菌引起的痢疾爆发和传播速度很快并且难以控制，常常是群体性食物中毒的罪魁祸首。根据其抗原构造不同，志贺氏菌可分为四个主要类群：痢疾志贺菌、福氏志贺菌、鲍氏志贺菌和宋内氏志贺菌。这四个群中，福氏志贺菌是发展中国家(如中国)的主要流行群。我国自2005年开始，在全国范围内开展了菌痢的监测，福氏志贺菌的报告病例数一直高居全国法定传染病的前5位，由该菌所引起的痢疾占总发病率的70％。目前，志贺氏菌检测的国家标准为微生物检测法：包含富集、分离、纯化和鉴定等步骤。这种检测方法通常需要将抽查样品带回实验室，通过3-7天甚至更长时间才能完成整...
【技术保护点】
1.基于适配体磁性捕获和直接LAMP反应的福氏志贺菌可视化检测方法，其特征是：适配体磁性捕获时，所用核酸适配体的序列为：5′‑CCGGACTAGGGCTGGTTAGCTTCAATACTGCTGGGCGAGG‑3′。
【技术特征摘要】
1.基于适配体磁性捕获和直接LAMP反应的福氏志贺菌可视化检测方法，其特征是：适配体磁性捕获时，所用核酸适配体的序列为：5′-CCGGACTAGGGCTGGTTAGCTTCAATACTGCTGGGCGAGG-3′。2.根据权利要求1所述的福氏志贺菌可视化检测方法，其特征是：LAMP反应所用的引物由F3、B3、FIP和BIP组成；F3：5′-ACAGCAGTCTTTCGCTGTT-3′B3：5′-ATCCCGGGCAATGTCCTC-3′FIP：5′-ACCAGGAGGGTTTTCCGGAGATGCTGCTGATGCCACTGAG-3′BIP：5′-AGGCATCAGAAGGCCTTTTCGAAGAATTTCGAGGCGGAACAT-3′。3.根据权利要求2所述的福氏志贺菌可视化检测方法，其特征是依次进行以下步骤：1)、制备偶联适配体的磁珠溶液：对核酸适配体的5′端进行生物素标记；取标记的适配体50±2pmol，90±5℃变性5±0.2min、冰浴10±0.5min后，加入到50±2μg地高辛标记的磁珠中，室温放置10～15min；然后，将其放置于磁力架上至溶液澄清；弃上清，沉淀用TE缓冲液清洗，最后，将清...
【专利技术属性】
技术研发人员：冯俊丽，田小兰，沈清，
申请(专利权)人：浙江工商大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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