一种更为精准的游离DNA突变检测技术制造技术

本发明专利技术公开了一种更为精准的游离DNA突变检测技术，包括以下步骤：S1、gDNA的提取；S2、gDNA的片段化；S3、向破碎后的DNA样本中添加分子条形码引物；S4、用纯化柱对完成反应后的反应液1进行纯化，并利用上游引物和基因特异性引物对样本进行纯化；S5、用纯化柱对完成反应后的反应液2进行纯化，并利用通用引物和样本特异性引物对破碎后的DNA进行文库的扩增；S6、将S5制得的反应液在PCR完成后的反应液3进行测序分析，得到突变的DNA碱基位点和突变的碱基信息。本发明专利技术通过分子条形码技术的引入，使得样本中单一DNA模板分子上都会高效地引入一个独特的分子标签，从源头对不同来源的模板DNA进行区分。

A more accurate detection technique for free DNA mutation

The invention discloses a more accurate technique for detecting mutations in free DNA, which comprises the following steps: extraction of S1 and gDNA; fragmentation of S2 and gDNA; addition of molecular barcode primers to broken DNA samples; purification of reaction solution 1 with purification column, and utilization of upstream primers and gene specificity. Samples were purified by primers; S5, reaction liquid 2 was purified by purified column, and the fragmented DNA was amplified by universal primers and sample specific primers; S6, the reaction liquid produced by S5 was sequenced and analyzed in reaction liquid 3 after PCR, and the mutant DNA base sites and mutations were obtained. Base information. By introducing molecular barcode technology, a unique molecular tag is efficiently introduced on a single DNA template molecule in a sample to distinguish template DNA from different sources from the source.

【技术实现步骤摘要】
一种更为精准的游离DNA突变检测技术
本专利技术涉及DNA突变检测
，尤其涉及一种更为精准的游离DNA突变检测技术。
技术介绍
DNA检测是指将被检测者扩增其基因信息后，通过特定设备对被检测者细胞中的DNA分子信息作检测，预知身体患疾病的风险，分析它所含有的各种基因情况，从而使人们能了解自己的基因信息，从而通过改善自己的生活环境和生活习惯，避免或延缓疾病的发生。检测的时候，先把受检者的基因从血液或其他细胞中提取出来。然后用可以识别可能存在突变的基因的引物和PCR技术将这部分基因复制很多倍，用有特殊标记物的突变基因探针方法、酶切方法、基因序列检测方法等判断这部分基因是否存在突变或存在敏感基因型。随着突变位点检测要求的提高，传统基于多重PCR的靶向Panel由于测序深度的提高而存在大量背景噪音，已严重限制了靶向测序技术在更高数据精度要求的检测如液体活检中的深入应用。因此，我们提出了一种更为精准的游离DNA突变检测技术用于解决上述问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种更为精准的游离DNA突变检测技术。一种更为精准的游离DNA突变检测技术，包括以本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种更为精准的游离DNA突变检测技术，其特征在于，包括以下步骤：S1、gDNA的提取：使用gDNA提取试剂盒来提取gDNA，得到具有单一条带的gDNA，将gDNA稀释到500ng/ul；S2、gDNA的片段化：取一个100ml的烧杯，将烧杯内盛有碎冰且加入适量的无菌水，用一个合适大小的泡沫垫，取20ul的gDNA并放入到EP管中，将EP管置于泡沫垫的中间且烧杯中，用超声仪对gDNA进行破碎；S3、向破碎后的DNA样本中添加分子条形码引物：将分子条形码引物添加到破碎后的gDNA的5′端，添加反应时反应液1组成为：gDNA(20ul)，连接酶Buffer(12ul)，T4DNA ligase(...

【技术特征摘要】
1.一种更为精准的游离DNA突变检测技术，其特征在于，包括以下步骤：S1、gDNA的提取：使用gDNA提取试剂盒来提取gDNA，得到具有单一条带的gDNA，将gDNA稀释到500ng/ul；S2、gDNA的片段化：取一个100ml的烧杯，将烧杯内盛有碎冰且加入适量的无菌水，用一个合适大小的泡沫垫，取20ul的gDNA并放入到EP管中，将EP管置于泡沫垫的中间且烧杯中，用超声仪对gDNA进行破碎；S3、向破碎后的DNA样本中添加分子条形码引物：将分子条形码引物添加到破碎后的gDNA的5′端，添加反应时反应液1组成为：gDNA(20ul)，连接酶Buffer(12ul)，T4DNAligase(2ul)，DEPC水(26ul)；S4、对添加分子条形码的样本进行纯化：用纯化柱对完成反应后的反应液1进行纯化，纯化后的体积为20ul，并利用上游引物和基因特异性引物对样本进行纯化，纯化的反应液2为：DNA(5ul)，上游引物(25mM，0.25ul)，基因特异性引物(25mM，0.25ul)，DEPC水(16.5ul)，10XPCRBuffer(2.5ul))，Taq酶(5U/ul，0.2ul)，dNTP(25mM，0.25ul)；S5、DNA文库的获取：用纯化柱对完成反应后的反应液2进行纯化，纯化后的体积为20ul，并利用通用引物和样本特异性引物对破碎后的DNA进行文库的扩增，得到含有突变碱基的DNA序列，反应液3的组成为：DNA(5ul)，通用引物(25mM，0.25ul)，样本特异性引物(25mM，0.25ul)，DEPC水(16.5ul)，10XPCRBuffer(2.5ul)，Taq酶(5U/ul，0.2ul)，dNTP(25mM，0.25ul)；S6、将S5制得的反应液在PCR完成后的反应液3进行测序分析，得到突变的DNA碱基位点和突变的碱基信息。2.根据权利要求1所述的一种更为精准的游离DNA突变检测技术，其特征在于，所述超声仪的功率为05％，超声仪设置开的时间为2s，超声仪设置关的时间为2s，超声的时间为40min。3.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾庆，
申请(专利权)人：武汉永瑞康华医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42