基于CRISPR-链取代的等温扩增及检测技术制造技术

本发明专利技术公开了基于CRISPR‑链取代的等温扩增及检测技术。基于CRISPR‑链取代的等温扩增试剂盒，包括链取代等温扩增试剂，试剂盒还包括了野生型Cas9和/或核酸酶缺陷的Cas9切口酶、特异性识别目标DNA序列上下游的sgRNA对，链取代等温扩增反应的扩增引物对，该引物对与Cas9‑sgRNA复合体对与目的基因结合后暴露出的单链区域互补。该技术操作简单，抗干扰能力强，检测结果准确可靠。

【技术实现步骤摘要】
基于CRISPR-链取代的等温扩增及检测技术
本专利技术涉及一种核酸扩增技术及基于该技术的检测技术，特别涉及基于CRISPR-链取代的等温扩增及检测技术。
技术介绍
核酸分子基于其生物特性被视为重要的生物标志物。核酸分子的检测在医学诊疗、食品安全、公共卫生和社会安全等方面有着广泛的应用。通常，在核酸检测过程中，待检样品中的靶核酸分子浓度极低，而非靶核酸分子浓度则较高。因此，对待检测样品中的靶核酸分子特异性扩增是提高核酸检测反应的灵敏度和准确度的常用方法。目前，通过PCR扩增技术特异性地扩增待检测样品中的靶核酸分子(DNA)片段是核酸检测中使用的最主要的技术，也是目前最有效、最直接的方法。然而，PCR技术目前仍具有诸多难以克服的限制，例如：1)对模板DNA纯度要求高；2)对反应条件敏感，而实际待检测样品中往往存在对PCR反应有抑制作用的成分；3)扩增反应需经历多重变温反应，反应时间较长；4)检测反应所需设备及结果分析设备成本较高，只能在实验室完成；以及5)检测所需试剂成本高，且使用操作需经过专业培训，相关检测需耗费大量人力物力成本。同时，在医学诊疗、食品安全相关的实际检测中，需要开展实本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于CRISPR‑链取代的等温扩增试剂盒，包括链取代等温扩增试剂，其特征在于：试剂盒还包括了野生型Cas9和/或核酸酶缺陷的Cas9切口酶、特异性识别目标DNA序列上下游的sgRNA对，链取代等温扩增反应的扩增引物对，该引物对与Cas9‑sgRNA复合体对与目的基因结合后暴露出的单链区域互补。

【技术特征摘要】
1.一种基于CRISPR-链取代的等温扩增试剂盒，包括链取代等温扩增试剂，其特征在于：试剂盒还包括了野生型Cas9和/或核酸酶缺陷的Cas9切口酶、特异性识别目标DNA序列上下游的sgRNA对，链取代等温扩增反应的扩增引物对，该引物对与Cas9-sgRNA复合体对与目的基因结合后暴露出的单链区域互补。2.根据权利要求1所述的等温扩增试剂盒，其特征在于：核酸酶缺陷的Cas9切口酶为HNH核酸酶缺陷的Cas9切口酶。3.根据权利要求1所述的等温扩增试剂盒，其特征在于：sgRNA对的识别位点分别为目的序列上游CCN序列3’端的10～30个核苷酸序列和下游NGG序列5’端的10～30个核苷酸序列。4.根据权利要求1所述的等温扩增试剂盒，其特征在于：链取代等温扩增试剂的DNA引物具有如下特征：该引物5’端包含了一个切口酶识别位点，且该位点的酶切位点在其互补链上；该引物的中段与Cas-sgRNA复合体所识别的靶DNA区域的NGG序列所在链的至少10个连续核苷酸互补配对。5.根据权利要求4所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：喻学锋，周文华，胡丽，
申请(专利权)人：中国科学院深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：广东,44