一种分离制备鹿茸多肽和多糖的方法技术

本发明专利技术涉及鹿茸深加工的方法，具体来说是涉及一种分离制备鹿茸多肽和多糖的方法。鹿茸样品经预处理、Alcalase酶解、醇沉、超滤、纳滤、浓缩、干制获得鹿茸多肽和多糖，通过本方法可以使鹿茸蛋白提取率达50％及以上，鹿茸多肽含量为650μg/mg及以上，鹿茸多糖提取率达40％及以上，鹿茸多糖含量为40μg/mg及以上。此技术方法为连续操作，操作过程绿色、无污染、安全。该方法所制备样品可应用于食品、保健品、化妆品等领域。

【技术实现步骤摘要】
一种分离制备鹿茸多肽和多糖的方法
本专利技术涉及鹿茸深加工的方法，具体来说是涉及一种分离制备鹿茸多肽和多糖的技术方法。
技术介绍
鹿茸是传统名贵药材，具有多种药理生理功能，我国对于鹿茸的利用已2000余年，其功效在《五十二病方》、《神农本草经》和《本草纲目》均有记载。现代药理学研究也发现，鹿茸具有增强免疫力、抗炎、抗氧化、促进骨质修复、抗衰老、抗肿瘤、加速创伤愈合等作用。鹿茸多肽是鹿茸蛋白水解后的产物或从鹿茸中直接分离得到的一类分子量小于10kDa的化合物。依据所测不同部位的鹿茸样品，干制鹿茸中多肽含量为40％～75％，冷冻鲜鹿茸为5％～25％。鹿茸多糖主要以蛋白聚糖的形式存在，Hoon等测得鹿茸中硫酸软骨素类约占多糖的88％。鹿茸多肽和多糖具有多种生物活性，如增强免疫力、抗氧化、抗衰老等。鹿茸中有效成分的获取方式是煎煮和泡酒，并沿用至今，在日常生活中，很多家庭仍采用这种方式滋补。随着科技的发展，鹿茸多肽和多糖提取分离的方式较多，有采用热水、乙醇、缓冲溶液等溶剂浸泡提取或者酶解制备等。然而，这些方法仍存在用时长、提取率不高、提取不连续等缺点，因此，有必要探索一种高效分离制备鹿茸多肽和鹿茸多糖的技术方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种分离制备鹿茸多肽多糖的技术方法，通过本方法可以使鹿茸蛋白提取率达50％及以上，鹿茸多肽含量为650μg/mg及以上，鹿茸多糖提取率达40％及以上，鹿茸多糖含量为40μg/mg及以上。鹿茸多肽提取率＝干制粉中多肽质量/(鹿茸样品质量×鹿茸中的总蛋白含量)。鹿茸中蛋白的含量采用凯氏定氮法测定，蛋白系数取6.25。鹿茸多肽含量采取BCA法试剂盒测定。鹿茸多糖提取率＝干制粉中多糖质量/(鹿茸样品质量×鹿茸中的总糖含量)。糖含量采用微孔板蒽酮硫酸法测定。一种分离制备鹿茸多肽和多糖的方法，至少包括以下步骤：步骤一：样品预处理取新鲜鹿茸，去除皮下脂肪，鹿茸切片、粉碎或取干制鹿茸样品粉末，按重量比1：10～1：15加入水，以200r/min～750r/min搅拌，快速升温至90℃，保持10min～15min；步骤二：Alcalase酶解将上述预处理液冷却至50～55℃，用0.5～1mol/L氢氧化钠调节PH＝10，按3000-5000U/g比例加入Alcalase，酶解30-60min，整个过程200r/min～750r/min搅拌并保持PH＝9～11，3000r/min离心，收集上清液A和沉淀A；步骤三：醇沉将步骤二收集的上清液A浓缩，并按70％--80％比例添加无水乙醇，4℃静置4—6小时，3000r/min离心分别收集上清液B和沉淀B；步骤四：二次酶解和醇沉将步骤二、三收集的沉淀A与沉淀B合并，按重量比1：10—1：15加入水，按步骤二再次操作收集上清液C，沉淀C另作它用，将上清液C按步骤三醇沉，分别收集沉淀D和上清液D；步骤五：乙醇回收将步骤三、步骤四收集的上清液B、D合并，减压浓缩完全回收乙醇；将步骤四制备的沉淀D加入其体积10--20％的水溶解，减压浓缩完全回收乙醇；步骤六：超滤、纳滤将步骤五制备的浓缩液采用10KDa的超滤膜超滤，收集小于10KDa的滤液，然后进行纳滤，除去无机盐，收集滤液；步骤七：干制将步骤五中挥发掉乙醇的沉淀D干制得鹿茸多糖，将步骤六中的浓缩滤液干制得鹿茸多肽。所述步骤一、四、五、六所述水为去离子水、蒸馏水、超纯水。步骤三所述浓缩为减压真空浓缩，温度控制在45～55℃，浓缩体积为原体积的20％-30％。步骤七所述干制方法为喷雾干燥、恒温烘干或真空冷冻干燥。所得鹿茸蛋白提取率达50％及以上，鹿茸多肽含量为650μg/mg及以上，鹿茸多糖提取率达40％及以上，鹿茸多糖含量为40μg/mg及以上。有益效果此方法通过设计连续的制备方式分别获得鹿茸多肽和鹿茸多糖，相比单一的分离制备多糖或多肽，有效地提高了鹿茸的综合利用，整个制备过程无污染、无残留，乙醇回收完全且可以多次重复利用，生产过程绿色、安全，所得制品可放心应用于食品、保健品、化妆品等领域。具体实施方式实施例1取10g新鲜梅花鹿鹿茸粉碎样品，加入100ml去离子水，以200r/min不停搅拌，快速升温至90℃保持10min，然后冷却至50℃，用1mol/L氢氧化钠调节PH＝10，按3000U/g(蛋白含量，根据样品含氮量估算)比例加入6600U的Alcalase酶解60min，整个过程不停搅拌并保持PH＝10，3000r离心收集上清液A和沉淀A；上清液A经55℃真空减压浓缩至30ml，加入无水乙醇70ml，4℃静置5h，分别收集上清液B和沉淀B。沉淀A、B合并，加入100ml去离子水，按相同条件进行二次酶解得上清液C和沉淀C，上清液C浓缩至30ml,加入无水乙醇70ml，再次同条件醇沉得上清液D和沉淀D；沉淀D用蒸馏水溶解，45℃真空减压浓缩，挥发掉乙醇，干制得鹿茸粗多糖。上清液B、D合并减压回收乙醇，浓缩至20ml，1mol/LHCL调节PH＝7，采用10KDa超滤膜超滤，样品处理完再过水冲洗，收集小于10KDa的滤液，纳滤除去无机盐等，滤液50℃真空减压浓缩，浓缩液经-20℃预冻后，进行真空冷冻干燥获得肽粉。鹿茸多肽提取率为51.37％，鹿茸多肽含量为655μg/mg，鹿茸多糖提取率达41.22％，鹿茸多糖含量为40μg/mg。实施例2取20g新鲜梅花鹿鹿茸粉碎样品，加入300ml去离子水，去离子水，以750r/min不停搅拌，快速升温至90℃保持15min，然后冷却至55℃，用0.5mol/L氢氧化钠调节PH＝9，按5000U/g(蛋白含量，根据样品含氮量估算)比例加入22000U的Alcalase酶解30min，整个过程不停搅拌并保持PH＝9，3000r离心收集上清液A和沉淀A；上清液A经55℃真空减压浓缩至40ml，加入160ml无水乙醇，4℃静置6h，分别收集上清液B和沉淀B；沉淀A、B合并，加入300ml去离子水，按相同条件进行二次酶解得上清液C和沉淀C，上清液浓缩至40ml，加入160ml无水乙醇，再次同条件醇沉得上清液D和沉淀D；沉淀D用蒸馏水溶解，48℃真空减压浓缩，挥发掉乙醇，干制得鹿茸粗多糖。上清液B、D合并减压回收乙醇，浓缩至30ml，1mol/LHCL调节PH＝7，采用10KDa超滤膜超滤，样品处理完再过水冲洗，样品收集小于10KDa的滤液，纳滤除去无机盐等，滤液52℃减压浓缩，浓缩液经-80℃预冻后，进行真空冷冻干燥获得肽粉。鹿茸多肽提取率为50.12％，鹿茸多肽含量为651μg/mg，鹿茸多糖提取率达43.12％，鹿茸多糖含量为43μg/mg。实施例3取10新鲜梅花鹿鹿茸粉碎样品，加入130去离子水，以750r/min不停搅拌，快速升温至90℃保持15min。上述预处理液冷却至50℃，用1mol/L氢氧化钠调节PH＝11，按4000U/g(蛋白含量，根据样品含氮量估算)比例加入8800U的Alcalase酶解50min，整个过程不停搅拌并保持PH＝11，3000r离心收集上清液A和沉淀A；上清液A经50℃真空减压浓缩至25ml，加入75ml无水乙醇，4℃静置6h，分别收集上清液B和沉淀B；沉淀A、B合并，按相同条件进行二次酶解得上清液C和沉淀C，上清液C再次同条件本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离制备鹿茸多肽和多糖的方法，其特征在于，至少包括以下步骤：步骤一：样品预处理取新鲜鹿茸，去除皮下脂肪，鹿茸切片、粉碎或取干制鹿茸样品粉末，按重量比1：10～1：15加入水，以200r/min～750r/min搅拌，快速升温至90℃，保持10min～15min；步骤二：Alcalase酶解将上述预处理液冷却至50～55℃，用0.5～1mol/L氢氧化钠调节PH＝10，按3000‑5000U/g比例加入Alcalase，酶解30‑60min，整个过程200r/min～750r/min搅拌并保持PH＝9～11，3000r/min离心，收集上清液A和沉淀A；步骤三：醇沉将步骤二收集的上清液A浓缩，并按70％‑‑80％比例添加无水乙醇，4℃静置4—6小时，3000r/min离心分别收集上清液B和沉淀B；步骤四：二次酶解和醇沉将步骤二、三收集的沉淀A与沉淀B合并，按重量比1：10—1：15加入水，按步骤二再次操作收集上清液C，沉淀C另作它用，将上清液C按步骤三醇沉，分别收集沉淀D和上清液D；步骤五：乙醇回收将步骤三、步骤四收集的上清液B、D合并，减压浓缩完全回收乙醇；将步骤四制备的沉淀D加入其体积10‑‑20％的水溶解，减压浓缩完全回收乙醇；步骤六：超滤、纳滤将步骤五制备的浓缩液采用10K Da的超滤膜超滤，收集小于10K Da的滤液，然后进行纳滤，除去无机盐，收集滤液；步骤七：干制将步骤五中挥发掉乙醇的沉淀D干制得鹿茸多糖，将步骤六中的浓缩滤液干制得鹿茸多肽。...

【技术特征摘要】
1.一种分离制备鹿茸多肽和多糖的方法，其特征在于，至少包括以下步骤：步骤一：样品预处理取新鲜鹿茸，去除皮下脂肪，鹿茸切片、粉碎或取干制鹿茸样品粉末，按重量比1：10～1：15加入水，以200r/min～750r/min搅拌，快速升温至90℃，保持10min～15min；步骤二：Alcalase酶解将上述预处理液冷却至50～55℃，用0.5～1mol/L氢氧化钠调节PH＝10，按3000-5000U/g比例加入Alcalase，酶解30-60min，整个过程200r/min～750r/min搅拌并保持PH＝9～11，3000r/min离心，收集上清液A和沉淀A；步骤三：醇沉将步骤二收集的上清液A浓缩，并按70％--80％比例添加无水乙醇，4℃静置4—6小时，3000r/min离心分别收集上清液B和沉淀B；步骤四：二次酶解和醇沉将步骤二、三收集的沉淀A与沉淀B合并，按重量比1：10—1：15加入水，按步骤二再次操作收集上清液C，沉淀C另作它用，将上清液C按步骤三醇沉，分别收集沉淀D和上清液D；步骤五：乙醇回收将步骤三、步骤四收集的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张铁华，姜玮，梁媛，畅柯飞，郑博文，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22