一种检测乳腺癌的尿液检测试剂盒及其制备和检测方法技术

本发明专利技术公开了一种检测乳腺癌的尿液检测试剂盒及其制备和检测方法，一些特定蛋白在健康人的尿液中基本检测不到，而在乳腺癌患者的尿液中，这些特定蛋白的表达量显著升高。因此，特定蛋白可以作为乳腺癌的特异性诊断标志物。本发明专利技术的技术方案就是以尿液中存在的特定蛋白作为标志物，通过生物化学的方法达到显色目标，从而通过检测尿液来诊断乳腺癌。

【技术实现步骤摘要】
一种检测乳腺癌的尿液检测试剂盒及其制备和检测方法
本专利技术涉及生物医学检测领域，尤其涉及一种乳腺癌尿液检测试剂。
技术介绍
癌症是威胁人类健康最严重的疾病之一。尽管近年来癌症的诊断、治疗技术取得了长足进步，但是癌症依然是死亡率非常高的一类疾病，对人类健康构成了巨大威胁。早期诊断困难，准确性低，导致丧失最佳治疗时机，是造成癌症治疗效果差，死亡率高的主要原因，对于乳腺癌患者来说尤其如此。乳腺癌是最常见的女性恶性肿瘤，位居全球女性发病和死亡第一位。据国际癌症研究中心(IARC)报告，2008年全球女性新发乳腺癌138万例，占女性恶性肿瘤发病的22.9％；死亡281万例，占女性恶性肿瘤死亡的13.7％。中国乳腺癌总死亡率在20世纪70-90年代初曾表现出一定的下降趋势，但中青年女性年龄别死亡率上升明显，致使中国城乡妇女在之后的十几年内，其年龄别发病率和死亡率以及绝对人数都呈现出明显的增长趋势。2010年《中国乳腺疾病调查报告》指出，中国乳腺癌发病率的增长速度高出西方国家1～2个百分点，呈现出明显的年轻化趋势，每年约有20余万女性罹患乳腺癌；2003-2009年，中国城市乳腺癌死亡率增长了38.91％。另一方面，乳腺癌虽然在女性患者中发病率最高，但死亡率仅排在第五，与肝癌、肺癌等高死亡率癌症不同，乳腺癌患者中每4人中不到1人死亡。不过，高治愈率是建立在早发现、早诊断、早治疗的基础上。临床实践证明，早期发现乳腺癌治愈率达90％以上。但是，目前对乳腺癌仍缺乏有效的病因学预防手段，因此二级预防显得尤为重要。乳腺癌筛查是实现乳腺癌早发现、早诊断和早治疗的重要的二级预防手段。大量研究表明，筛查的实施是近年来欧美各国乳腺癌死亡率下降的主要原因之一。合理的筛查能够早期发现乳腺癌，提高治愈率，增加“保乳”手术的机会，减少术后辅助治疗，节省医疗费用，提高患者生活质量。为此，WHO已将乳腺癌列为应开展人群筛查的癌症类别之一。目前全球常用的乳腺癌筛查手段包括临床乳腺检查(clinicalbreastexamination，CBE)、乳房X线摄影术(mammography，MAM)、超声成像(ultrasonography，US)和磁共振成像(magneticresonanceimaging，MRI)等。CBE的优点是经济实用，并能提高女性对乳腺癌的预防意识和警惕性；缺点是缺乏统一标准，结果的准确性与医生经验相关；不能检出无法触及的0期肿瘤，单独使用时敏感度较低。MAM的优点是对40岁以上女性的敏感度高，可检出临床不能触及的细小钙化，实现准确的定性和定位；缺点是存在放射性损伤，对年轻女性或致密乳腺的敏感度较差。US的优点是经济简便，无痛苦，无放射性损伤，可鉴别乳腺囊性和实性肿瘤，能检出致密乳腺内的早期乳腺癌；缺点是对微小钙化灶不敏感，检出率依赖于检查者的操作熟练度。MRI的优点是检出病灶不受腺体密度的限制，无放射性损伤，对早期乳腺癌的敏感度和分期，准确性均优于MAM和US；缺点是费用高，缺乏规范化的操作技术标准，对微小钙化灶的检出受限，增强造影MRI具有创伤性。由此可见，现有检测筛查乳腺癌的方法存在成本高，依赖医生经验，检测灵敏性低等缺点，缺少一种简便快捷且灵敏性高的检测。近年来，分子生物学技术迅速发展，科学家有可能从分子水平发现和研究有价值的乳腺癌，并进而开发出简便易行的检测方法，用于乳腺癌的临床早期筛查、预测，从而实现乳腺癌的早发现、早治疗，以期提高生存率和生活质量。进入二十一世纪以来，利用体液样品对患者脱落细胞及其相关产物(包括核酸，蛋白质，糖类，脂类等)进行检测，成为比较简便和可靠的癌症诊断方式。例如，通过对唾液样品进行细胞病理学分析，对分泌的生长因子和其他分子进行检测，用于肺癌、唾液腺癌的诊断；对粪便里的脱落细胞的遗传和表观遗传学基因改变的检测，用于直肠、结肠癌的诊断；对尿液里分泌的代谢产物和大分子物质的检测，同样有可能作为前列腺癌、肾癌和膀胱癌诊断的标志物。通过检测尿液中的乳腺癌标志物进行诊断具有以下优点尿液收集物是非介入、无创伤性的。
技术实现思路
本专利技术人在实验室针对乳腺癌诊断标志物进行的研究中意外发现，一些特定蛋白如(钙网蛋白3和细胞角蛋白15)在健康人的尿液中基本检测不到，而在乳腺癌患者的尿液中，这些特定蛋白的表达量显著升高。因此，特定蛋白可以作为乳腺癌的特异性诊断标志物。本专利技术的技术方案就是以尿液中存在的特定蛋白作为标志物，通过生物化学的方法达到显色目标，从而通过检测尿液来诊断乳腺癌。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的说明，下列实施例中如未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域的常规手段进行。本实施例只用于对专利技术进行进一步的说明，不能理解为对本专利技术保护范围的限制，本领域的技术人员根据上述专利技术的内容做出一些非本质的改进和调整也属于本专利技术的保护的范围。1.一种乳腺癌尿液检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包含以下成分：4-氨基安替比林、高碘酸钠、氨水等(1)显色剂溶液，准确称取10g-80g物质A溶于500ml-1000ml双蒸水中，配制成溶液。准确称取5g-60g物质B溶于300ml-1000ml双蒸水中，配制成溶液。(2)取物质C物质溶于水中配制成PH为7.3-9的溶液。(3)将上述物质A∶B体积比1∶1混合均匀无菌封装在10ml安瓿瓶中，物质C体积1无菌封装在10ml安瓿瓶中即为成品。实施例1乳腺癌尿液检测试剂750盒1.试剂配置准确称取20g物质A溶于1000ml双蒸水中，配制成0.2g/ml溶液。准确称取10g物质B溶于500ml双蒸水中，配制成0.2g/ml溶液。取物质C溶于水中配制成PH为9的溶液。将上述物质A∶B体积比1∶1混合均匀无菌封装在10ml安瓿瓶中，物质C体积l无菌封装在10ml安瓿瓶中即为成品。可制作试剂盒750盒实施例2乳腺癌尿液检测试剂1500盒1.试剂配置准确称取40g物质A溶于2000ml双蒸水中，配制成0.2g/ml溶液。准确称取30g物质B溶于1000ml双蒸水中，配制成0.2g/ml溶液。取物质C溶于水中配制成PH为8.5的溶液。将上述物质A∶B体积比1∶1混合均匀无菌封装在10ml安瓿瓶中，物质C体积1无菌封装在10ml安瓿瓶中即为成品，可制作试剂盒750盒乳腺癌尿液检测试剂的临床检验1.试验对象：将试验对象分为3组，第1组为临床确诊的乳腺癌患者29名，第2组为健康人23名，第3组为临床确诊的其它类型癌症患者21名。2.检测方法：用尿杯收集新鲜清洁尿样(最好是早餐第一次尿液)，用滴管滴尿液1ml到试剂A中，稍摇匀，然后加入试剂B1ml，稍摇匀后静置。2分钟内与比色板对比显色情况。检测结果概述于表1。表1.检测结果根据表1结果计算得出，本专利技术检测试剂的敏感性＝80.5％，特异性＝93.3％，由此可见，本专利技术的检测试剂对乳腺癌的检出率较高，同时抗干扰性较强，具有特异性和准确率双高的特点，可作为有效的乳腺癌筛查试剂。以上所述仅为本专利技术的优选实施例，并非对本专利技术做出任何形式上和实质上的限制。本领域的技术人员，在不脱离本专利技术技术方案的范围内，当可利用以上所揭示的
技术实现思路
而做出的更改、修饰与演变的等同变化均为本专利技术的等效实施例；同时，凡依据本专利技术的实质技术对以上实施例所本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种乳腺癌尿液检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包含以下成分：4‑氨基安替比林、高碘酸钠、氨水等(1)显色剂溶液，准确称取10g‑80g物质A溶于500ml‑1000ml双蒸水中，配制成溶液。准确称取5g‑60g物质B溶于300ml‑1000ml双蒸水中，配制成溶液。(2)取物质C物质溶于水中配制成PH为7.3‑9的溶液。(3)将上述物质A∶B体积比1∶1混合均匀无菌封装在10ml安瓿瓶中，物质C体积1无菌封装在10ml安瓿瓶中即为成品。

【技术特征摘要】
1.一种乳腺癌尿液检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包含以下成分：4-氨基安替比林、高碘酸钠、氨水等(1)显色剂溶液，准确称取10g-80g物质A溶于500ml-1000ml双蒸水中，配制成溶液。准确称取5g-60g物质B溶于300ml-1000ml双蒸水中，配制成溶液。(2)取物质C物质溶于水中配制成PH为7.3-9的溶液。(3)将上述物质A∶B体积比1∶1...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴泽江，
申请(专利权)人：杭州展邦生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33