本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种编码重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的基因、卵黄抗体与应用。所述的编码重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术还提供了一种抑制幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的卵黄抗体，该抗体通过如下方法制备得到：通过基因合成，得到编码重组丝氨酸蛋白酶的基因；将其原核表达，纯化，获得重组丝氨酸蛋白酶，将重组丝氨酸蛋白酶作为免疫抗原免疫母鸡，收集免疫后的母鸡产下的鸡蛋，提取鸡蛋中的卵黄抗体，纯化，得到抑制幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的卵黄抗体，该卵黄抗体可以作为食品添加剂或加入保健品中，也可以进一步制成药品用于预防或治疗胃溃疡和胃癌。
【技术实现步骤摘要】
编码重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的基因、卵黄抗体与应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种编码重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的基因、卵黄抗体与应用。
技术介绍
幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)是科学家BarryMarshall和RobinWarren发现的，该菌能够感染胃部组织并且引发溃疡，而这两位研究者也因发现了幽门螺杆菌而获得了2005年的诺贝尔生理学及医学奖。幽门螺杆菌，是胃溃疡和胃癌的致病因子。据估计，一半的世界人口感染上幽门螺杆菌。很多感染者产生胃炎症状，而且每5名感染者当中，就有1人在他们的生命的某个时刻患上胃溃疡，在很多情形下，这是一种病情进展快速的致命性疾病。胃炎和胃溃疡可利用抗生素加以治疗；这些治疗经常需要使用两到三种不同类型的抗生素，而且仍然不能够治愈所有的病人。在最糟糕的情形下，长期的幽门螺杆菌炎症能够导致胃癌产生。胃癌是一种高度致死性的很难治疗的癌症。在全世界，胃癌每年影响着100万人，每年有超过70万人死于胃癌。幽门螺杆菌的感染通常发生于幼年时期，这种细菌分布广泛，很多人都是该菌的携带者，这种细菌引发的并发症包括胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡，此外，其也会增加携带者患胃癌的风险。胃癌产生的主要原因被认为是幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)感染。目前，人们尚没有有效地治疗胃癌的方法，而且抗生素耐药性的不断扩散也使得治疗这种细菌感染变得更加复杂。如今，在一项新的研究中，来自德国埃尔朗根-纽伦堡大学(Friedrich-Alexander-Erlangen-Nürnberg,FAU)的研究人员鉴定出这种细菌能够导致胃癌的两种机制。他们的发现可能导致人们开发出新的治疗方法。相关研究结果发表在2017年10月11日的CellHost&Microbe期刊上，论文标题为“HelicobacterpyloriEmploysaUniqueBasolateralTypeIVSecretionMechanismforCagADelivery”。如今，这些研究人员发现幽门螺杆菌分泌一种被称作HtrA的丝氨酸蛋白酶，它的作用就像一种武器那样能够穿透这个保护层。HtrA切割三种蛋白：闭合蛋白(occludin)、紧密连接蛋白-8(claudin-8)和上皮钙黏蛋白(E-cadherin)，从而破坏这个上皮细胞保护层。因此，幽门螺杆菌能够侵入更深的通常是不含病原体的组织层中，从而造成进一步的损伤。这是胃癌开始产生的第一阶段。然而，正如这些研究人员所发现的那样，在第一个阶段之后的那个阶段是更加危险的。被称阿作IV型分泌系统的针状突起物经激活后，作为“分子注射器(molecularsyringes)”发挥作用。利用一种受体依赖性的机制，这些分子注射器穿过宿主细胞的基侧膜，注射一种细菌毒素，即CagA蛋白。注入的CagA随后会让宿主细胞发生重编程，使得它们潜在地发生癌变。这种蛋白的另一种作用是它阻止人免疫系统识别和消灭幽门螺杆菌---这是人胃部中的这种细菌长期存活下来的一个关键机制。抑制幽门螺杆菌(HP)丝氨酸蛋白酶(HtrA)的卵黄抗体，可以通过抑制丝氨酸蛋白酶(HtrA)的活性，阻断幽门螺杆菌(HP)感染人体的途径，从而对其导致的相关疾病产生预防和治疗作用。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足和缺点，本专利技术的首要目的在于提供一种编码重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的基因。本专利技术的另一目的在于提供上述编码重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的基因的应用。本专利技术的再一目的在于提供一种抑制幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的卵黄抗体，该卵黄抗体适于预防和治疗幽门螺杆菌感染引起的胃溃疡或胃癌。本专利技术的第四个目的在于提供上述抑制幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的卵黄抗体的制备方法，该方法含基因工程技术，优化免疫技术和蛋白质分离纯化技术。本专利技术的第五个目的在于提供上述抑制幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的卵黄抗体的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种编码重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的基因，其核苷酸序列如下所示：所述的编码重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的基因在制备抑制幽门螺杆菌感染产品中的应用；一种重组载体pET22b-HtrA，包含上述编码重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的基因；一种基因工程菌，是将上述重组载体pET22b-HtrA转化原核表达系统得到；所述的基因工程菌，通过如下制备方法制备得到：通过基因合成，得到编码重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的基因；将编码重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的基因亚克隆到原核表达载体pET22-b，得到重组载体pET22b-HtrA；将重组载体pET22b-HtrA转化大肠杆菌BL21(DE3)，得到基因工程菌；一种抑制幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的卵黄抗体，通过如下方法制备得到：将上述基因工程菌进行诱导表达，纯化，获得重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶，将重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶作为免疫抗原免疫母鸡，收集免疫后的母鸡产下的鸡蛋，提取鸡蛋中的卵黄抗体，纯化，得到抑制幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的卵黄抗体；所述的抑制幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的卵黄抗体的制备方法，包含如下步骤：(1)将基因工程菌发酵培养至OD600为0.6～0.8，然后使用IPTG诱导目的蛋白表达，冰浴，收集菌体；超声破碎，离心，收集上清液；上清液经离子交换和亲和层析分离纯化，得到重组幽门螺杆菌(HP)丝氨酸蛋白酶(HtrA)，作为免疫抗原；(2)选取20周龄产蛋母鸡，以步骤(1)制得的重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶作为免疫抗原，初次免疫使用弗氏完全佐剂和免疫抗原等体积混合，采用皮下多点注射的免疫方式对每只母鸡注射；首次免疫两周后进行第一次加强免疫，使用弗氏不完全佐剂和免疫抗原等体积混合，采用皮下多点注射的免疫方式对每只母鸡注射，以后每隔15天进行加强免疫一次，一共加强免疫3～5次，从第一次加强免疫开始收集免疫鸡蛋；(3)收集步骤(2)制得的免疫鸡蛋的卵黄，加入6～9倍卵黄体积的水，20～40℃搅拌30min～2h，得到溶解液；然后加入硅藻土和0.6～1.3倍溶解液体积的乙醇，调节pH至6.5～7.5，搅拌30min～1h，过滤弃去残渣，得到清液；(4)向步骤(3)制得的清液中加入硅藻土和1.5～2.5倍溶解液体积的乙醇，调节pH值至5.0～5.4，搅拌30min～1h，过滤弃去清液，得到固体组分；在固体组分中加入6～9倍固体组分质量的水溶解，20～40℃搅拌30min～2h，过滤弃去残渣，得到清液；将清液超滤浓缩，干燥，得到抑制幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的卵黄抗体；步骤(1)中所述的发酵培养的温度优选为35～37℃发酵培养；步骤(1)中所述的IPTG诱导蛋白表达的条件优选为25℃～30℃的条件下0.1～1.0mMIPTG诱导蛋白表达；步骤(1)中所述的使用IPTG诱导目的蛋白表达优选为：使用IPTG诱导目的蛋白表达后，最终70～85％的重组幽门螺杆菌(HP)丝氨酸蛋白酶(HtrA)以可溶性形式蛋白表达；步骤(2)中所述的免疫抗原的初始浓度优选为0.4～4mg/mL；步骤(2)中所述的注射的用量优选为每只母鸡每次注射0.5mL；步骤(3)中所述的卵黄的收集优选为：将步骤(2)制得的免疫鸡蛋清洗消毒后打破，用蛋黄分离器小心分离卵黄；步骤(3)中所述的硅藻土的用量为按本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种编码重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的基因，其特征在于其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
【技术特征摘要】
1.一种编码重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的基因，其特征在于其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.权利要求1所述的编码重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的基因在制备抑制幽门螺杆菌感染产品中的应用。3.一种重组载体pET22b-HtrA，其特征在于包含权利要求1所述的编码重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的基因。4.一种基因工程菌，其特征在于是将权利要求3所述的重组载体pET22b-HtrA转化原核表达系统得到。5.根据权利要求4所述的基因工程菌，其特征在于通过如下制备方法制备得到：通过基因合成，得到编码重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的基因；将编码重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的基因亚克隆到原核表达载体pET22-b，得到重组载体pET22b-HtrA；将重组载体pET22b-HtrA转化大肠杆菌BL21(DE3)，得到基因工程菌。6.一种抑制幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的卵黄抗体，其特征在于通过如下方法制备得到：将权利要求4或5所述的基因工程菌进行诱导表达，纯化，获得重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶，将重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶作为免疫抗原免疫母鸡，收集免疫后的母鸡产下的鸡蛋，提取鸡蛋中的卵黄抗体，纯化，得到抑制幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的卵黄抗体。7.权利要求6所述的抑制幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶的卵黄抗体的制备方法，其特征在于包含如下步骤：(1)将基因工程菌发酵培养至OD600为0.6～0.8，然后使用IPTG诱导目的蛋白表达，冰浴，收集菌体；超声破碎，离心，收集上清液；上清液经离子交换和亲和层析分离纯化，得到重组幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶，作为免疫抗原；(2)选取...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵肃清，肖益热，郑希，王甜甜，陈莉莉，贺攀，
申请(专利权)人：广东工业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44
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