高通量测序技术检测银耳菌种中银耳和香灰菌配比的方法技术

本发明专利技术公开了一种高通量测序技术检测银耳菌种中银耳和香灰菌配比的方法。该方法包括如下步骤：采用真菌ITS2区引物对待测银耳菌种的基因组进行PCR扩增建库，高通量测序，然后将高通量测序所得结果数据过滤去杂后根据97％以上相似性进行OTU聚类分析，对比真菌ITS序列数据库，得到银耳和香灰菌对应的OTU信息，进而实现对所述待测银耳菌种中银耳和香灰菌的配比的定量分析。本发明专利技术方法结合不同配比下银耳菌种子实体生长情况，定量评估银耳和香灰菌不同配比对子实体形成的影响，为银耳生产中的菌种的制备提供可靠的参考标准。特别适用于各食用菌服务和研究单位，以突破或制定出相应的技术壁垒，保障食用菌生产的安全性和稳定性。

High throughput sequencing technology for detecting the ratio of tremella and fungus in Tremella strains

The invention discloses a method for detecting the proportion of Tremella fuciformis and cinerea in Tremella fuciformis by high-throughput sequencing technology. This method includes the following steps: using the ITS2 region primers of fungi to amplify the genome of Tremella fuciformis strains by PCR, high-throughput sequencing, and then filtrating the data of high-throughput sequencing, OTU clustering analysis was carried out according to 97% similarity, and the ITS sequence database of fungi was compared to obtain Tremella fuciformis and Botrytis cinerea pairs. According to the OTU information, the quantitative analysis of the proportion of Tremella fuciformis and Botrytis cinerea in the tested Tremella species can be realized. The method quantitatively evaluates the influence of Tremella fuciformis and cinerea fuciformis on the formation of fruiting bodies in combination with the growth of Tremella fuciformis seeds in different proportions, and provides a reliable reference standard for the preparation of Tremella fuciformis strains in Tremella fuciformis production. Especially suitable for various edible fungi services and research units to break through or formulate the corresponding technical barriers to ensure the safety and stability of edible fungi production.

【技术实现步骤摘要】
高通量测序技术检测银耳菌种中银耳和香灰菌配比的方法
本专利技术涉及食用菌特别是银耳菌种中银耳和香灰菌定量配比检测领域，特别是涉及一种基于高通量测序技术检测银耳菌种中银耳和香灰菌配比的方法及其应用。
技术介绍
中国是食用菌生产大国，年产量约占世界的3/4，在我国农业生产中食用菌已位居第五大产业，仅次于粮食、蔬菜、果树、油料。银耳又称白木耳，雪耳，在真菌中隶属于担子菌门(Basidiaomycota)、伞菌亚门(Agaricomycotina)、银耳纲(Tremellomycetes)、银耳目(Tremellales)、银耳科(Tremellaceae)、银耳属(Tremella)，是我国传统食药兼用真菌，它不仅是我国医学宝库中久负盛名的良药，也是滋补佳品和筵席佳肴。我国是银耳人工栽培的发源地，也是世界银耳生产和出口最多的国家，银耳年总产量已接近40万吨。其中以袋料栽培为主要模式的福建省是银耳生产产量最大的省份，其始终占据全国银耳总产量的90％以上。与大多数生产栽培的食用菌种类不同，银耳有其非常独特的生活史，它必须在伴生真菌香灰菌的协同作用下才能完成其生活史。银耳自身没有分解木质纤维素与本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测银耳菌种中银耳和香灰菌配比的方法，是采用高通量测序的方法检测银耳菌种中银耳和香灰菌的配比。

【技术特征摘要】
1.一种检测银耳菌种中银耳和香灰菌配比的方法，是采用高通量测序的方法检测银耳菌种中银耳和香灰菌的配比。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：采用真菌ITS2区引物对待测银耳菌种的基因组进行PCR扩增建库，高通量测序，然后将高通量测序所得结果数据过滤去杂后根据97％以上相似性进行OTU聚类分析，对比真菌ITS序列数据库，得到银耳和香灰菌对应的OTU信息，进而实现对所述待测银耳菌种中银耳和香灰菌的配比的定量分析。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：(1)提取待测银耳菌种的基因组DNA；(2)对提取的基因组DNA进行质量检测；(3)采用真菌ITS2区引物对基因组进行PCR扩增建库；(4)通过Miseq平台进行高通量测序；(5)将高通量测序所得结果数据过滤去杂后根据97％以上相似性进行OTU聚类分析，对比真菌ITS序列数据库，得到银耳和香灰菌对应的OTU信息，进而实现对所述待测银耳菌种中银耳和香灰菌的配比的定量分析。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，是采用月桂酸钠法提取所述待测银耳菌种的基因组DNA的；和/或步骤(3)中，采用的所述真菌ITS2区引物中的特异性部分的序列为SEQIDNo.1和SEQIDNo.2；和/或步骤(5)中，是按照如下标准对所述高通量测序所得结果数据进行过滤去...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘新展，孙淑静，白逢彦，张琪辉，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，福建农林大学，
类型：发明
国别省市：北京,11