来源于体液的miRNA的品质的评价方法技术

本发明专利技术公开了评价来源于体液样本的miRNA的品质的新方法。在本发明专利技术的方法中，以序列号1～12所示miRNA的至少任一种作为基准miRNA，将体液样本中的该基准miRNA的存在量、与处于核酸试样未分解状态的标准体液样本中的miRNA的存在量进行比较，从而评价miRNA的品质。包含序列号1～12所示的碱基序列的miRNA是作为依赖于体液样本中的核酸试样的分解而存在量减少的miRNA，由本申请发明专利技术者们选择的miRNA。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】来源于体液的miRNA的品质的评价方法
本专利技术涉及来源于体液样本的miRNA的品质的评价方法。
技术介绍
miRNA(微RNA)从基因组DNA作为发夹样结构的RNA(前体)而被转录出来。该前体被具有特定的酶RNaseIII切割活性的dsRNA切割酶(Drosha、Dicer)切割后，变成双链形态，然后变成单链。并且，一般认为一条反义链被叫做RISC的蛋白质复合体摄入，参与mRNA的翻译抑制。这样，因为miRNA在转录后各阶段其形态不同，所以通常在以miRNA为检测对象的情况下，需要考虑发夹结构体、双链结构体、单链结构体等各种形态。miRNA由15～25个碱基的RNA组成，在各种生物中确认了其存在。近年来发现，miRNA不仅在细胞内存在，在不含细胞的样本血清、血浆、尿、脊髓液等体液中也较多存在，提示其表达量可能成为以癌为代表的各种疾病的生物标志物。miRNA在2016年2月的现在，在人中存在2500种以上，在利用高灵敏度的DNA微阵列等测定体系的情况下，其中超过1000种的miRNA能够在血清/血浆中同时检测到表达。于是，进行了使用DNA微阵列法以血清/血浆、尿、脊髓液等体液为对象的生物标志物探索研究，并期待向能够早期发现疾病的生物标志物检查展开。另一方面，已知RNA是容易由于热、分解酶、冻融等各种物理和化学因素而分解的物质，在使用DNA微阵列进行基因表达分析的情况下，RNA的分解影响表达量的测定。在作为疾病的生物标志物测定体液所含的miRNA的表达量的检查中，如果基于具有不确实性的表达量的测定值进行检查、诊断，则有时会由于丧失适当的治疗机会、应用了错误的医疗而带给患者患者不必要的经济、体力负担。因此，为了正确测定表达量，将作为检查目标的miRNA不分解的样本用于检查是极为重要的。一直以来，作为测定RNA的分解度的方法，一般使用电泳，例如，可以根据来源于28S核糖体RNA的带与来源于18S核糖体RNA的带的浓度比(28S/18S)来测定。另外，作为别的方法，专利文献1中提出了根据RNA片段的长度不同来定量评价RNA的分解度的方法，其中，利用了如果核苷酸分解则片段长度变短这样的长链RNA的特征。然而，在测定miRNA的表达量时，多利用短链级分的RNA，此时不含长链RNA，因此如上所述的现有方法不是用于测定RNA的分解度的有效方法。也可以根据基因表达分析结果的全基因的相关系数测定所使用的RNA的分解度，但需要全基因的数据，花费时间和工夫。因此，着眼于来源于长链RNA的分解片段，开发了以混入短链级分的分解片段作为指标评价短链级分中的miRNA的分解度的方法(专利文献2)。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特表2015-519045号公报专利文献2：日本特开2008-35779号公报
技术实现思路
专利技术所要解决的课题如上所述，为了正确测定目标RNA的表达量，测定样本中的RNA的分解度并评价品质是重要的。但是，前述的现有方法是利用核糖体RNA、长链RNA的方法，核糖体RNA、长链RNA是存在于核内、细胞质内的RNA，在例如血清、血浆、尿、脊髓液等体液样本中几乎不存在。因此，通过该现有方法，不能正确测定体液样本所含的miRNA的分解度并评价品质。本专利技术的课题是发现在作为样本使用不适于现有方法的体液样本时，测定该体液样本所含的miRNA的分解度并评价品质的方法。用于解决课题的方案为了解决上述课题，本专利技术者们发现，通过以依赖于体液样本所含的核酸试样的分解而存在量变化的miRNA(以下称为“基准miRNA”)作为基准测定其存在量，能够评价目标miRNA的品质，从而完成了本专利技术。即，本专利技术是以序列号1～12所示的miRNA的至少任一种作为基准miRNA，将体液样本中的该基准miRNA的存在量、与处于未进行核酸试样的分解的状态下的标准体液样本中的miRNA的存在量进行比较，从而评价miRNA的品质的方法，包含以下方式。(1)一种来源于体液样本的miRNA的品质评价方法，所述方法包括：测定工序，使用由体液样本和标准体液样本制备的包含miRNA的RNA样品，分别测定1种或多种基准miRNA在体液样本和标准体液样本中的存在量，所述1种或多种基准miRNA从包含序列号1～12所示的碱基序列的miRNA中选择；比较工序，将体液样本中的1种或多种基准miRNA的存在量测定值或其代表值，与标准体液样本中的1种或多种基准miRNA的存在量测定值或其代表值进行比较，获得体液样本和标准体液样本之间的1种或多种基准miRNA的存在量测定值或其代表值的差或比；和判定工序，基于所述比较工序中得到的1种或多种基准miRNA的存在量测定值或其代表值的差或比，判定来源于体液样本的miRNA的品质好坏。(2)根据(1)所述的方法，所述比较工序是获得1种基准miRNA的存在量测定值的差或比、多种基准miRNA各自的存在量测定值的差或比、或者多种基准miRNA的存在量测定值的代表值的差或比的工序。(3)根据(1)或(2)所述的方法，所述判定工序包括将所述1种或多种基准miRNA的存在量测定值或其代表值的差或比，与作为基准预先设定的阈值进行对比的操作。(4)根据(1)～(3)的任一项所述的方法，所述比较工序包括从体液样本中的存在量测定值或其代表值减去标准体液样本中的存在量测定值或其代表值而求差的操作，或者将体液样本中的存在量测定值或其代表值除以标准体液样本中的存在量测定值或其代表值而求比的操作。(5)根据(4)所述的方法，所述判定工序包括将所述1种或多种基准miRNA的存在量测定值或其代表值的差或比，与作为基准预先设定的阈值进行对比的操作，在该差或比超过该阈值的情况下，将来源于体液样本的miRNA的品质判定为良好。(6)根据(1)～(5)的任一项所述的方法，体液样本和标准体液样本中的多种基准miRNA的存在量测定值的代表值，分别为多种基准miRNA的存在量测定值的平均值或中央值。(7)根据(1)～(6)的任一项所述的方法，所述测定工序包括对体液样本和标准体液样本中的1种或多种基准miRNA的存在量测定值进行修正的操作，使用修正后的测定值实施以后的工序。(8)根据(1)～(7)的任一项所述的方法，所述测定工序包括使固定化于支持体上的用于捕捉所述1种或多种基准miRNA的探针、与从体液样本和标准体液样本提取且经标记物质标记的核酸试样分别接触而进行杂交，从而测定体液样本和标准体液样本中的该1种或多种基准miRNA的存在量的操作。(9)根据(1)～(8)的任一项所述的方法，所述测定工序包括在测定体液样本中的所述1种或多种基准miRNA的存在量的同时，测定该体液样本中的目标miRNA的存在量的操作。(10)根据(9)所述的方法，所述测定工序包括对体液样本中的目标miRNA的存在量测定值进行修正的操作。(11)根据(9)或(10)所述的方法，所述测定工序包括使固定化于支持体上的用于捕捉目标miRNA的探针和用于捕捉所述1种或多种基准miRNA的探针、与从体液样本提取且经标记物质标记的核酸试样接触而进行杂交，从而分别测定体液样本中的目标miRNA和该1种或多种基准miRNA的存在量的操作。(12)根据(1)～(11)的任一项所述的方法，所述体液样本是血液、血清或血浆本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种来源于体液样本的miRNA的品质评价方法，所述方法包括：测定工序，使用由体液样本和标准体液样本制备的包含miRNA的RNA样品，分别测定1种或多种基准miRNA在体液样本和标准体液样本中的存在量，所述1种或多种基准miRNA从包含序列号1～12所示的碱基序列的miRNA中选择；比较工序，将体液样本中的1种或多种基准miRNA的存在量测定值或其代表值，与标准体液样本中的1种或多种基准miRNA的存在量测定值或其代表值进行比较，获得体液样本和标准体液样本之间的1种或多种基准miRNA的存在量测定值或其代表值的差或比；和判定工序，基于所述比较工序中得到的1种或多种基准miRNA的存在量测定值或其代表值的差或比，判定来源于体液样本的miRNA的品质好坏。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.02.22 JP 2016-0309041.一种来源于体液样本的miRNA的品质评价方法，所述方法包括：测定工序，使用由体液样本和标准体液样本制备的包含miRNA的RNA样品，分别测定1种或多种基准miRNA在体液样本和标准体液样本中的存在量，所述1种或多种基准miRNA从包含序列号1～12所示的碱基序列的miRNA中选择；比较工序，将体液样本中的1种或多种基准miRNA的存在量测定值或其代表值，与标准体液样本中的1种或多种基准miRNA的存在量测定值或其代表值进行比较，获得体液样本和标准体液样本之间的1种或多种基准miRNA的存在量测定值或其代表值的差或比；和判定工序，基于所述比较工序中得到的1种或多种基准miRNA的存在量测定值或其代表值的差或比，判定来源于体液样本的miRNA的品质好坏。2.根据权利要求1所述的方法，所述比较工序是获得1种基准miRNA的存在量测定值的差或比、多种基准miRNA各自的存在量测定值的差或比、或者多种基准miRNA的存在量测定值的代表值的差或比的工序。3.根据权利要求1或2所述的方法，所述判定工序包括将所述1种或多种基准miRNA的存在量测定值或其代表值的差或比，与作为基准预先设定的阈值进行对比的操作。4.根据权利要求1～3的任一项所述的方法，所述比较工序包括从体液样本中的存在量测定值或其代表值减去标准体液样本中的存在量测定值或其代表值而求差的操作，或者将体液样本中的存在量测定值或其代表值除以标准体液样本中的存在量测定值或其代表值而求比的操作。5.根据权利要求4所述的方法，所述判定工序包括将所述1种或多种基准miRNA的存在量测定值或其代表值的差或比，与作为基准预先设定的阈值进行对比的操作，在该差或比超过该阈值的情况下，将来源于体液样本的miRNA的品质判定为良好。6.根据权利要求1～5的任一项所述的方法，体液样本和标准体液样本中的多种基准miRNA的存在量测定值的代表值，分别为多种基准miRNA的存在量测定值的平均值或中央值。7.根据权利要求1～6的任一项所述的方法，所述测定工序包括对体液样本和标准体液样本中的1种或多种基准miRNA的存在量测定值进行修正的操作，使用修正后的测定值实施以后的工序。8.根据权利要求1～7的任一项所述的方法，所述测定工序包括使固定化于支持体上...

【专利技术属性】
技术研发人员：名取一惠，小园聪子，近藤哲司，
申请(专利权)人：东丽株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP